趙麗娟 張冬燕 高月華 姜莉鋮 柳忠豪 張彬

唾液腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma，SACC)是一種來(lái)源于上皮的高度惡性腫瘤[1]，國(guó)內(nèi)腺樣囊性癌的發(fā)病率占唾液腺上皮性惡性腫瘤的首位[2-3]。本病的典型特點(diǎn)是生長(zhǎng)緩慢、廣泛侵襲、易沿神經(jīng)擴(kuò)散、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及局部復(fù)發(fā)等[4-6]。盡管完全的手術(shù)切除和輔助放療已被證實(shí)可以提高患者的長(zhǎng)期生存率，但患者的預(yù)后仍不理想[7]。因此，尋找新的治療手段和治療靶點(diǎn)一直是腺樣囊性癌的研究熱點(diǎn)。

有絲分裂異常是大多數(shù)惡性腫瘤發(fā)生的共同特征。紡錘體和動(dòng)粒相關(guān)蛋白復(fù)合體亞基-1，或稱為紡錘體與動(dòng)粒相關(guān)蛋白-1(spindle and kinetochore-associated complex subunit 1，SKA1)是一個(gè)新近發(fā)現(xiàn)的與有絲分裂相關(guān)的基因[8]，是動(dòng)粒與微管穩(wěn)定結(jié)合所必需的組成部分[9-10]。基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)家族通過(guò)降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[11]。其中，基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9，MMP-9)是基質(zhì)金屬蛋白酶家族的重要成員之一。

目前，有關(guān)SKA1在SACC中的表達(dá)及其與MMP-9相關(guān)性的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)了SKA1和MMP-9在SACC中的表達(dá)情況，并進(jìn)一步分析了其表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系，以期為臨床治療和預(yù)后的判斷提供參考。

1 材料與方法

1.1 基本資料

42 例唾液腺腺樣囊性癌組織及20 例癌旁正常組織來(lái)自聊城市人民醫(yī)院病理科，所有患者均經(jīng)2 名不知曉病情的高年資病理醫(yī)師確診為腺樣囊性癌，且術(shù)前均未行化療、放療及其他抗腫瘤治療(表 1)。

表 1 SKA1及MMP-9在SACC及癌旁正常組織中的表達(dá)情況

1.2 主要試劑與方法

兔抗SKA1(Sigma-Aldrich，美國(guó))；兔抗MMP-9(1∶800，1∶50，Abcam，美國(guó))；免疫組化檢測(cè)試劑盒、DAB顯色試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)。石蠟標(biāo)本經(jīng)4 μm厚連續(xù)切片，3%雙氧水阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，0.1 mol/L檸檬酸鈉抗原修復(fù)液高溫高壓下抗原修復(fù)(具體步驟參照試劑盒說(shuō)明)，以PBS代替一抗作為空白對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果由2 名有經(jīng)驗(yàn)的高年資病理醫(yī)生參考相關(guān)文獻(xiàn)[12]進(jìn)行雙盲判斷。結(jié)合陽(yáng)性細(xì)胞比例及陽(yáng)性細(xì)胞著色強(qiáng)度進(jìn)行綜合評(píng)分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0 對(duì)臨床病理資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用Pearson卡方檢驗(yàn)，病例數(shù)n≤1者采用Fisher確切概率法，以P<0.05 為具有顯著性差異。

2 結(jié) 果

2.1 SKA1和MMP-9蛋白在各組組織中的表達(dá)情況

SKA1和MMP-9蛋白在唾液腺腺樣囊性癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為78.6%和66.7%，明顯高于其在癌旁正常組織中的表達(dá)(15%和25%)，組間比較具有顯著性差異(P<0.05)(表 1)。SKA1 在腺樣囊性癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)主要分布于腫瘤細(xì)胞內(nèi)，包括導(dǎo)管細(xì)胞和變異肌上皮細(xì)胞，而腫瘤間質(zhì)內(nèi)未見(jiàn)明顯著色；SKA1 在腺樣囊性癌癌細(xì)胞中的陽(yáng)性表達(dá)表現(xiàn)為胞漿及/或胞核中的黃色或棕黃色顆粒沉淀(圖 1)。MMP-9在腺樣囊性癌組織中的表達(dá)主要表現(xiàn)為胞漿中的淺黃色或棕色顆粒(圖 2)。

圖 1 SKA1在唾液腺腺樣囊性癌中的表達(dá)情況 (×200)

圖 2 MMP-9在唾液腺腺樣囊性癌中的表達(dá)情況 (×200)

2.2 SKA1和MMP-9蛋白與腺樣囊性癌臨床病理特征的關(guān)系

SKA1的表達(dá)在唾液腺腺樣囊性癌TNM分期為III～I(xiàn)V期患者的陽(yáng)性率明顯高于I～I(xiàn)I期患者(P<0.05)，在不同組織病理類型中的表達(dá)水平亦存在明顯差異。40 例患者的5 年生存率為 52.5%，有2 例患者至研究結(jié)束時(shí)因隨訪尚不足5 年，未計(jì)入統(tǒng)計(jì)范圍。MMP-9蛋白與唾液腺腺樣囊性癌的臨床分期、組織病理類型、神經(jīng)侵襲及5 年生存率關(guān)系密切，組間比較具有顯著性差異(P<0.05)，而與年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及局部復(fù)發(fā)差異無(wú)顯著性。

2.3 SKA1與MMP-9蛋白在腺樣囊性癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

33 例SKA1陽(yáng)性表達(dá)的腺樣囊性癌組織中22 例為MMP-9陽(yáng)性表達(dá)，而9 例SKA1陰性表達(dá)的腺樣囊性癌組織中3 例為MMP-9陰性表達(dá)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析二者差異無(wú)顯著性(P>0.05)(表 2)。

表 2 SKA1及MMP-9的表達(dá)與SACC臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

目前，SACC的研究主要聚焦于探索潛在的預(yù)后及治療作用的分子標(biāo)志物[13]，對(duì)這些腫瘤標(biāo)志分子的研究為SACC 早期診斷、 分型分期、 評(píng)價(jià)預(yù)后提供了可靠指標(biāo)[14]。新近發(fā)現(xiàn)的SKA1基因能夠?qū)е录忓N體檢測(cè)點(diǎn)沉默[8]，與細(xì)胞周期調(diào)控及腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[8,15-16]。目前已有研究表明，SKA1在非小細(xì)胞肺癌[17]、甲狀腺乳頭狀癌[18]、惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤[19]、口腔鱗癌[20]、胃癌[21]等多種惡性腫瘤中存在過(guò)度表達(dá)，并且其表達(dá)與腫瘤預(yù)后[18]、侵襲轉(zhuǎn)移[19]、凋亡相關(guān)基因[16]、順鉑耐藥[17]以及化療耐受[22]等因素相關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)SKA1在SACC組織中的表達(dá)明顯高于其在癌旁正常組織中的表達(dá)，提示SKA1在腺樣囊性癌的發(fā)生過(guò)程中可能發(fā)揮著一定的作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，SKA1的表達(dá)與SACC的臨床分期及組織病理類型密切相關(guān)。SKA1在臨床晚期患者中的表達(dá)明顯高于臨床早期患者，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示SKA1在腺樣囊性癌的發(fā)展過(guò)程中可能也發(fā)揮著一定的作用。此外，SKA1在實(shí)性型SACC腫瘤組織類型中的表達(dá)明顯高于其在篩孔狀型及導(dǎo)管型中的表達(dá)。而目前研究發(fā)現(xiàn)，臨床晚期及實(shí)性型腫瘤類型等因素都預(yù)示著腫瘤的不良預(yù)后[23]。雖然本研究中未發(fā)現(xiàn)SKA1的表達(dá)與患者的5年生存時(shí)間有必然的聯(lián)系，但根據(jù)上述的研究結(jié)果，我們認(rèn)為檢測(cè)SKA1的表達(dá)對(duì)于SACC的預(yù)后判斷可能仍具有一定的輔助價(jià)值。今后的研究中，在進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證。

目前，SACC高侵襲及高轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚未完全闡明。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9在腺樣囊性癌的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的作用[24]。本研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9在SACC組織中的表達(dá)明顯高于其在癌旁正常組織中的表達(dá)，且其表達(dá)與腫瘤類型、臨床分期、神經(jīng)侵襲及5年生存時(shí)間關(guān)系密切，其在實(shí)性型腫瘤類型、臨床晚期、存在神經(jīng)侵襲以及生存時(shí)間不足5年的患者中的表達(dá)明顯增高。上述研究結(jié)果表明，MMP-9有助于SACC的預(yù)后判斷，有望成為新的預(yù)后判斷指標(biāo)。

綜上所述，SKA1及MMP-9在唾液腺腺樣囊性癌組織中高表達(dá)，并與SACC的發(fā)生、發(fā)展及侵襲、預(yù)后有關(guān)，二者可能成為SACC預(yù)后評(píng)估指標(biāo)及潛在的治療靶點(diǎn)，為進(jìn)一步的分子生物學(xué)研究提供了理論基礎(chǔ)。