陳東來 林順權(quán) 宋成虎 鐘新友

（惠東縣第二人民醫(yī)院內(nèi)科 廣東 惠東 516351）

反流性食管炎（reflux esophagitis，RE）屬于常見消化道疾病，是由于混合反流造成食管黏膜損傷引起的炎性病變。臨床統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示：2014—2018年我國(guó)反流性食管炎發(fā)生率年增高2.3%[1-2]，而且Barrett食管患者向EAC轉(zhuǎn)變的風(fēng)險(xiǎn)是正常人群的60～120倍。本文采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)COX-2、MMP-2、VEGF在各類型正常、反流性食管炎、BE、食管癌組織中的表達(dá)，并結(jié)合臨床實(shí)踐，分析三者表達(dá)變化的意義，以及與癌變發(fā)生的相關(guān)性。

1.一般資料和研究方法

1.1 一般資料

收集經(jīng)病理證實(shí)的中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院外科手術(shù)切除的食管癌石蠟標(biāo)本12例（10%的福爾馬林液固定），內(nèi)鏡下獲得正常食管上皮15例，輕、中、重度反流性食管炎20例，Barrett食管13例。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫組化 內(nèi)鏡下采用Lugol液染色，鉗取橘紅色病變組織，甲醛中常溫固定。石蠟包埋，切片，HE染色；樣本漂洗、脫蠟；30mlH2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，微波抗原修復(fù)，非免疫血清封閉，觀察各期病理變化[3]。

1.2.2 RT-PCR法 研磨管中加入1mlTrozil進(jìn)行研磨，完成后倒入EP管中，在4℃環(huán)境中進(jìn)行1200r/min離心，離心時(shí)間為5min，半徑為10cm；取上清液，靜置5min；加入200l氯仿，劇烈震動(dòng)15s，常溫環(huán)境中靜置3min；在4℃環(huán)境中進(jìn)行1200r/min離心，離心時(shí)間為5min，半徑為10cm；取上層水相移入另一EP管中，加入等體積的異丙醇，常溫環(huán)境中靜置10min，并在此進(jìn)行4℃環(huán)境下1200r/min速度的離心，離心時(shí)間為10min，可見白色沉淀[4]；除去上清，加入75%濃度的乙醇1ml進(jìn)行清洗，進(jìn)行4℃環(huán)境下7500轉(zhuǎn)/min離心，離心時(shí)間為1min，防止于常溫環(huán)境中進(jìn)行干燥，放置時(shí)間為5min；用25μl DEPC處理過的離子水溶解RNA樣品。用瓊脂糖凝膠電泳鑒定RNA降解情況，分光光度測(cè)量RNA含量，并放置于75℃冰箱中備用。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

2.結(jié)果

2.1 COX-2、MMP-2、VEGF mRNA表達(dá)

在反流性食管炎發(fā)展過程中，的COX-2、MMP-2、VEGF隨病程發(fā)展逐漸增強(qiáng)，在正常、RE、BE、EAC間存在顯著差異（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；COX-2、MMP-2、VEGF在BE、EAC中明顯高于正常和RE組，BE和EAC相比也存在顯著差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），如表1所示。

表1 COX-2、MMP-2、VEGF mRNA表達(dá)情況（±s）

表1 COX-2、MMP-2、VEGF mRNA表達(dá)情況（±s）

注：相對(duì)于正常組，aP＜0.05；相對(duì)于RE組，bP＜0.05；相對(duì)于EAC組，cP＜0.05。

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2.2 COX-2、MMP-2、VEGF與食管癌的相關(guān)性

通過對(duì)COX-2、MMP-2、VEGF的多元Logistics分析，發(fā)現(xiàn)其在食管癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)，如表2所示。

表2 COX-2、MMP-2、VEGF 的Logistics分析

3.討論

COX-2（環(huán)氧化酶-2）在刺激因子影響下表達(dá)量增加，促進(jìn)細(xì)胞過分增殖，抑制細(xì)胞凋亡，而且加速腫瘤新生血管生成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。血管生成因子（VEGF）既能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，又能促進(jìn)血管滲漏，而且誘導(dǎo)淋巴管形成，為腫瘤持續(xù)生長(zhǎng)提供充足血液[5]。基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）被激活后可以促進(jìn)腫瘤血管形成，并將細(xì)胞基底膜、細(xì)胞外基質(zhì)IV、V型膠原和纖維連接蛋白成分水解，導(dǎo)致基底膜受損，腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)結(jié)締組織基質(zhì)，侵入淋巴管而發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，隨病程發(fā)展COX-2、MMP-2、VEGF表達(dá)增強(qiáng)，說明COX-2、MMP-2、VEGF與食管癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。國(guó)內(nèi)研究結(jié)果顯示[6]，COX-2基因暴露于前列腺E2細(xì)胞株，能夠顯著提高VEGF、MMP-2表達(dá)，本研究結(jié)果與其研究相符，說明COX-2、MMP-2、VEGF不僅參與食管癌的發(fā)生，而且三者共同表達(dá)可提高食管癌的發(fā)生率，導(dǎo)致食管癌患者預(yù)后不良。

綜上所述，COX-2、MMP-2、VEG與反流性食管炎癌變呈正相關(guān)性，三者共同表達(dá)可以促進(jìn)食管癌發(fā)生、發(fā)展，促進(jìn)其發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移。因此， 通過檢測(cè)COX-2、MMP-2、VEG三者的表達(dá)程度，可能更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)食管癌的發(fā)展，成為食管癌變的預(yù)測(cè)手段。