張永慧 邢椿偉 孫寬

煙臺(tái)新時(shí)代健康產(chǎn)業(yè)日化有限公司 山東煙臺(tái) 264006

伴隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，替代技術(shù)的應(yīng)用對(duì)其他產(chǎn)業(yè)發(fā)展也有著促進(jìn)作用，例如：三維組織構(gòu)建、產(chǎn)業(yè)化、細(xì)胞技術(shù)與模型，推動(dòng)著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展。怎樣在化妝品檢測(cè)中有效的應(yīng)用替代方法成為企業(yè)或單位重要研究?jī)?nèi)容[1]。

1 替代方法檢測(cè)發(fā)展

化妝品檢測(cè)包含皮膚刺激檢測(cè)、過(guò)敏檢測(cè)、光毒性檢測(cè)、光敏實(shí)驗(yàn)、皮膚滲透實(shí)驗(yàn)，也有很多功效檢測(cè)，例如：美白、防曬、保溫、補(bǔ)水、抗皺等。傳統(tǒng)的化妝品檢測(cè)以動(dòng)物或人為試驗(yàn)品，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)且消耗人力較大、經(jīng)濟(jì)投入高，一旦出現(xiàn)不良反應(yīng)將給動(dòng)物和人帶來(lái)直接影響。現(xiàn)如今，伴隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步發(fā)展，出現(xiàn)可以替代動(dòng)物或人的實(shí)驗(yàn)方法并得到了廣泛應(yīng)用。初期的替代方法為單層細(xì)胞培養(yǎng)，例如：MC、LC、KC、Fb等用于毒性檢測(cè)中。3T3成纖維細(xì)胞中性紅吸收光毒檢測(cè)通過(guò)了EC/COLIPA檢驗(yàn)。這種檢測(cè)有著簡(jiǎn)單方便、經(jīng)濟(jì)投入小的優(yōu)勢(shì)，主要用于化妝品毒性檢測(cè)，特別是在材料選擇上發(fā)揮了不小的作用。不過(guò)，無(wú)法完全代替總體皮膚的檢測(cè)。隨后，提出了皮膚多種細(xì)胞立體培養(yǎng)，創(chuàng)建人工皮膚進(jìn)行化妝品檢測(cè)，例如：把KC與MC細(xì)胞培養(yǎng)形成人工表皮進(jìn)行防曬劑與抗氧化劑效果分析，真皮成纖維細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞共同培養(yǎng)形成人工真皮，這對(duì)化妝品刺激性檢測(cè)效果顯著[2]?，F(xiàn)如今，體外建立含有表皮與真皮多層結(jié)構(gòu)的器官型人工皮膚，得到了廣泛應(yīng)用，是替代方法主要研究?jī)?nèi)容。

2 替代方法在化妝品體外檢測(cè)的應(yīng)用

2.1 材料安全性檢測(cè)

的替代方法是以取締動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的核心，替代方法的模型創(chuàng)建、驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)、判斷方法以動(dòng)物實(shí)驗(yàn)信息為準(zhǔn)。所以，替代方法應(yīng)用在檢測(cè)人們健康風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)價(jià)優(yōu)于動(dòng)物試驗(yàn)。標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)有助于對(duì)化妝品類(lèi)型、表示、安全監(jiān)督管理，體外方法改變了傳統(tǒng)的半定量動(dòng)物試驗(yàn)，趨向以數(shù)據(jù)信息為判斷依據(jù)的生物學(xué)檢測(cè)，提升了檢測(cè)通量且結(jié)果客觀。曾有學(xué)者利用CAMVA方法與BCOP方法檢測(cè)數(shù)十種化妝品對(duì)眼部的刺激效果，實(shí)踐證明：CVMVA方法特異性為97%、敏感度為100%、準(zhǔn)確率為98%。BCOP方法敏感度為100%、特異性為83%、準(zhǔn)確性為85%。替代方法適用于產(chǎn)品監(jiān)督管理，不過(guò)其適用范圍不同，比如：CAMVA和BCOP方法比較中，BCOP方法對(duì)在刺激性檢測(cè)方面不準(zhǔn)確[3]。

2.2 化妝品生產(chǎn)檢測(cè)

替代方法具有精準(zhǔn)性特點(diǎn)，適合應(yīng)用于化妝品材料檢測(cè)中，例如：相同材料的不同廠家，其工藝技術(shù)、雜質(zhì)不同使得毒性影響不同，通過(guò)替代方法檢驗(yàn)幫助選擇適合的材料。如：短期暴露細(xì)胞試驗(yàn)選擇刺激性溫和的表面活性劑，BCOP方法選擇適合商家。此外，替代方法可以提供不同的檢測(cè)參數(shù)，有助于化妝品優(yōu)化完善，比如：BCOP方法中得到的配方濁度參數(shù)、OD參數(shù)與體外評(píng)價(jià)，分?jǐn)?shù)較高的配方可以降低一些元素含量實(shí)現(xiàn)優(yōu)化，生產(chǎn)出溫和的化妝品。關(guān)于刺激-劑量效應(yīng)關(guān)系的材料，有助于確定材料安全性。

2.3 特殊化妝品檢測(cè)

替代方法實(shí)現(xiàn)了信息量化與不同方法融合，深入分析檢測(cè)參數(shù)有利于適應(yīng)化妝品多元化需求，比如：BCOP方法體外評(píng)價(jià)低于3的化妝品為無(wú)刺激性，CAMVA方法對(duì)EC50低于3%的產(chǎn)品為無(wú)刺激性，建立三維表皮模型對(duì)無(wú)刺激性判斷指標(biāo)為組織活性超過(guò)50%。一般情況下，約高于臨界參數(shù)的化妝品表示越溫和，其使用范圍較廣，尤其是敏感人群的應(yīng)用。實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，采用標(biāo)準(zhǔn)方法也有助于方案優(yōu)化[4]。比如：將溫和的化妝品刺激性設(shè)置為BCOP體外評(píng)價(jià)低于1，CAMVA的EC50高于70%，皮膚模型組織活性高于80%。

2.4 組合應(yīng)用

一種替代方法具有單一性，通過(guò)多種替代方法組合應(yīng)用有助于對(duì)化妝品的全面分析。組合應(yīng)用方法的使用要注意方法的適用性和限制性、成本投入、專(zhuān)業(yè)水平等。組合應(yīng)用分為多種形式，建議根據(jù)OECD發(fā)布的IATA指南。比如：關(guān)于眼部刺激的由下自上方案以BCOP為主要形式，實(shí)踐證明，CAMVA-BCOP聯(lián)合應(yīng)用檢測(cè)化妝品眼部刺激性、敏感度為100%，特異性97%、精準(zhǔn)度為98%。另一方面，復(fù)雜的毒性檢測(cè)也可以采取組合應(yīng)用，例如：將引起皮膚過(guò)敏的AOP各時(shí)期開(kāi)發(fā)的替代方法整合，能夠確保檢測(cè)精準(zhǔn)。將檢測(cè)胚胎各時(shí)期的干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、全胚胎實(shí)驗(yàn)、斑馬魚(yú)試驗(yàn)融合檢測(cè)化合物胚胎毒性。這種方法還適合應(yīng)用在產(chǎn)品功能效果檢測(cè)中，如：將酪氨酸酶抑制、B16或人黑色素細(xì)胞生成抑制、角質(zhì)細(xì)胞捏取實(shí)驗(yàn)綜合進(jìn)行美白劑檢測(cè)?？估匣δ艿捏w外檢測(cè)組合有酯酶抑制方法、成纖維細(xì)胞光老化檢測(cè)等[5]。

3 結(jié)語(yǔ)

總而言之，替代方法指標(biāo)的確立和創(chuàng)新是檢驗(yàn)行業(yè)和化妝品企業(yè)需要正視的問(wèn)題。人工皮膚替代產(chǎn)品的研發(fā)具有多學(xué)科性，如：檢驗(yàn)科學(xué)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)、的皮膚醫(yī)學(xué)等，有待進(jìn)一步研究分析。在今后化妝品檢測(cè)中，我國(guó)將進(jìn)一步對(duì)替代方法展開(kāi)研究，未來(lái)發(fā)展前景廣闊。