□ 李丹梅 貴港市食品藥品檢驗(yàn)所

在日常試驗(yàn)用高效液相色譜法測(cè)定食品中合成著色劑的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T5009.35-2016[1]時(shí)，發(fā)現(xiàn)該方法測(cè)定樣品的前處理方法以及梯度洗脫程序存在耗時(shí)長(zhǎng)、步驟繁瑣等不足。因此，對(duì)該方法的前處理以及梯度洗脫程序加以改進(jìn)，提高樣品檢測(cè)效率，能適應(yīng)大批量檢測(cè)樣品的需求。

1 試劑

試劑配制：與GB 5009.35-2016中要求相同[2]。標(biāo)準(zhǔn)品：檸檬黃溶液0.500mg/mL、胭脂紅溶液0.500 mg/mL、莧菜紅溶液0.500 mg/mL、日落黃溶液0.500 mg /mL、亮藍(lán)溶液 0.500 mg /mL，以上均由中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院研制。合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液（50 μg/mL）：臨用時(shí)將標(biāo)準(zhǔn)品加一級(jí)實(shí)驗(yàn)用水，配制成每毫升相當(dāng)于50 μg的合成著色劑。

2 儀器

高效液相色譜儀（二極管陣列檢測(cè)器），安捷倫Agilent1260，安捷倫科技（中國(guó)）有限公司；電子天平（千分），Quintix313-1CN 賽多利斯儀器（北京）系統(tǒng)有限公司；超聲波清洗器，SB-4200DT寧波新芝生物科技股份有限公司；固相萃取儀，QYCQ-24D上海喬躍電子有限公司。

3 方法

3.1 樣品處理

將固相萃取小柱分別用3 mL甲醇和3 mL水活化后備用。稱取5 g樣品（精確至0.001 g），含二氧化碳樣品超聲驅(qū)除二氧化碳。樣品溶液加檸檬酸或者氫氧化鈉調(diào)pH到6，加熱至60 ℃后上小柱，上樣后，用3 mL 60 ℃ pH為4的水洗滌，然后用3 mL甲醇-甲酸混合溶液洗滌，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸直至色素完全，收集解吸液，加乙酸中和，水浴蒸發(fā)至近干，加5.00 mL水溶解，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。

3.2 色譜條件

3.2.1 儀器條件

色譜柱，Eclipse Plus C18；柱箱溫度，30 ℃；檢測(cè)器，二極管陣列檢測(cè)器；波長(zhǎng)，254 nm，5.5 min變更波長(zhǎng)為628 nm；柱流量，1.00 mL/min；流動(dòng)相，甲醇、0.02 mol/L乙酸銨溶液；進(jìn)樣體積，10 μL

3.2.2 梯度洗脫程序

梯度洗脫程序，見表1。

4 結(jié)果與分析

將標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述色譜條件進(jìn)樣分析，5種著色劑在7 min已經(jīng)出峰完畢，并且得到完好的分離。

5種合成著色劑的相關(guān)系數(shù)均達(dá)到 0.999以 上。GB 5009.35-2016方法檢出限：檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃均為0.5 mg/kg，亮藍(lán)為0.2 mg/kg[2]。按照基線噪聲的3倍對(duì)應(yīng)待測(cè)物濃度作為方法檢出限，5種合成著色劑的方法檢出限均優(yōu)于國(guó)標(biāo)值。

表1 測(cè)定合成著色劑的洗脫程序

在樣品中分別加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過回收方程計(jì)算得到回收率，5種合成著色劑回收率范圍在94.0%～99.2%。對(duì)同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)量6次，計(jì)算精密度結(jié)果，精密度結(jié)果在0.22%～1.49%。

5 結(jié)語(yǔ)

本文用固相萃取小柱代替聚酰胺粉吸附著色劑，改進(jìn)梯度洗脫流動(dòng)相比例和時(shí)間，采用二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，飲料中5種合成著色劑在7分鐘內(nèi)得到完好分離，具有分析速度快、分離效果好、檢出限優(yōu)、加標(biāo)回收率高等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)大批量飲料樣品的檢測(cè)工作具有很好的實(shí)用價(jià)值。