亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        虎杖提取白藜蘆醇對(duì)PC-3細(xì)胞株的體外實(shí)驗(yàn)研究*

        2018-11-02 06:35:04胡著云戈陽華周瓊夏曙霞徐慶剛宮再興殷雍
        江西醫(yī)藥 2018年9期
        關(guān)鍵詞:虎杖白藜蘆醇抑制率

        胡著云 ,戈陽華 ,周瓊 ,夏曙霞 ,徐慶剛 ,宮再興 ,殷雍

        (1、江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,南昌 330006;2、南昌市第三醫(yī)院,南昌 330009)

        前列腺癌(PCa)的發(fā)病率位居所有男性惡性腫瘤的首位,且其死亡率位居男性惡性腫瘤的第2位,僅次于肺癌[1]。2015中國腫瘤登記年報(bào)顯示,2011年中國前列腺癌的發(fā)病率位居所有惡性腫瘤的第9位,城市人群中前列腺癌的發(fā)病率和死亡率,在所有男性惡性腫瘤中排名第6位和第9位[2]。

        白藜蘆醇(3′,5′,4′-三羥基芪)是天然存在的多酚化合物,是中藥虎杖的主要活性成分之一,其可通過激活或抑制信號(hào)通路、調(diào)解基因表達(dá)、誘導(dǎo)細(xì)胞周期延遲、細(xì)胞凋亡等方式作用于癌細(xì)胞,從而發(fā)揮抗腫瘤作用[3]。本研究對(duì)虎杖提取白藜蘆醇誘導(dǎo)PC-3系細(xì)胞凋亡的作用及其機(jī)制進(jìn)行研究,現(xiàn)報(bào)告如下。

        1 材料和方法

        1.1 儀器與材料 Agilent 1260高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司),YP1002電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司),SQP型1/1萬電子天平 (賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司),L-550臺(tái)式低速離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)。Leica DMIRB倒置相差顯微鏡 (OLYMPUS),CO2培養(yǎng)箱(Sanyo,Japan),F(xiàn)AC Sort流式細(xì)胞儀(Becton Dickinson),酶標(biāo)儀,RPM I1640培養(yǎng)液(Gibcobrl公司),PCR 提取及擴(kuò)增試劑盒(Takara公司)。B iorad凝膠成像分析系統(tǒng) (江蘇捷達(dá)公司)。F12培養(yǎng)基(HyClone Company),胎牛血清(HyClone Company),胰蛋白酶(Difco),噻唑藍(lán)(Sigma),碘化丙啶(PI),RNA 酶、TUNEL檢測(cè)試劑盒 (武漢博士德公司),蛋白酶K(ProteinaseK),二氨基聯(lián)苯(DAB)、多聚賴氨酸、二甲基亞砜DMSO (Sigma公司),白藜蘆醇對(duì)照品(11535-200502,供含量測(cè)定用,20mg,中國藥品生物制品檢定所)。

        1.2 試驗(yàn)藥物提取 本研究選用中藥虎杖產(chǎn)地為江西樟樹,經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定與炮制專家鑒定為廖科植物虎杖。采用醇提-樹脂分離工藝提取藥物中的白藜蘆醇成分,并采用萃取和硅膠柱層析相結(jié)合的方法,最終得到含90%白藜蘆醇的提取物[5]。

        1.3 細(xì)胞培養(yǎng) 人前列腺癌PC-3細(xì)胞株購自中科院昆明細(xì)胞庫,將其置于含10%新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中,常規(guī)二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)、傳代,直至細(xì)胞數(shù)量達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。

        1.4 四甲基噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)細(xì)胞抑制率 選取第14-16代PC-3細(xì)胞,配成5×104個(gè)/ml細(xì)胞密度接種于96孔培養(yǎng)板,于37℃、5%CO2,飽和濕度條件下培養(yǎng) 24h后, 分別用25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的白藜蘆醇干預(yù) PC-3細(xì)胞 24、48和72h,同時(shí)設(shè)置對(duì)照組僅加入相應(yīng)培養(yǎng)基。干預(yù)完成后,棄去培養(yǎng)基,加入200ml 5mg/m lMTT相同條件下繼續(xù)培養(yǎng)4h后終止。吸棄上清液加入50ml DMSO處理,采用酶標(biāo)儀測(cè)定OD 450nm時(shí)各孔細(xì)胞吸光值(OD),實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行2次,然后計(jì)算抑制率。其中抑制率計(jì)算公式為(1-藥物干預(yù)組OD/對(duì)照組 OD)×100%。

        1.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡 備好生長狀態(tài)良好的PC-3系細(xì)胞,其中生長范圍為80%-90%,采用0.05%胰蛋白酶將其消化成單細(xì)胞懸液,隨后培養(yǎng)于6cm皿中,密度為5×105個(gè)皿,時(shí)間為24h,此后分別加入濃度為 0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的白藜蘆醇,繼續(xù)培養(yǎng)24h后,充分稀釋、洗滌后取1×106/m l的細(xì)胞待檢測(cè)。將細(xì)胞重新懸浮,使其濃度為(2-5)×105/m l,加入 5μl Annexin V-FITC中。待3min后加入20μg/ml的碘化丙錠溶液 10μl,室溫孵育,避光 10min后加入 300μl緩沖液,采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)和分析細(xì)胞凋亡情況。

        1.6 Western blot法檢測(cè)Bcl-2和Survivin蛋白的表達(dá) 將 25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L 白藜蘆醇干預(yù)的PC-3細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞進(jìn)行裂解,BSA法檢測(cè)總蛋白量。蛋白制備樣本經(jīng)10%SDS-聚丙烯酰胺凝膠100V恒壓電泳分離,然后按照凝膠面積以0.65mA/cm2恒流電轉(zhuǎn)移1.5h將蛋白自凝膠轉(zhuǎn)印至PVDF膜。PVDF膜經(jīng)5%脫脂奶粉室溫封閉2h后,加入1∶1000稀釋的一抗,4℃孵育過夜,封閉液漂洗后加入1∶2000稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗人IgG二抗,室溫孵育1.5h,漂洗后用ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒增強(qiáng)發(fā)光,X線膠片顯影。

        1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 17.0軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),計(jì)量資料采用t檢驗(yàn),以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。 P<0.05為差異有顯著性意義。

        2 結(jié)果

        2.1 不同濃度白藜蘆醇對(duì)PC-3細(xì)胞抑制率比較隨著白藜蘆醇濃度的增高,PC-3細(xì)胞抑制率明顯增加,各組間比較差異顯著(P<0.05);同時(shí)隨著時(shí)間的延長,PC-3細(xì)胞抑制率也明顯增加,差異顯著(P<0.05)。 見表 1。

        表1 不同濃度白藜蘆醇對(duì)PC-3細(xì)胞抑制率比較(x±s,%)

        2.2 不同濃度白藜蘆醇對(duì)PC-3細(xì)胞凋亡的影響隨著白藜蘆醇濃度的增加,PC-3細(xì)胞凋亡率明顯升高,具有明顯的劑量依賴關(guān)系,呈劑量—效應(yīng)關(guān)系(P<0.05)。 見圖 1。

        2.3 不同濃度白藜蘆醇對(duì)PC-3細(xì)胞中Bcl-2和Survivin蛋白表達(dá)的影響 隨著白藜蘆醇濃度的增加,PC-3細(xì)胞中Bcl-2和Survivin蛋白的平均光密度均明顯下降,各組間比較差異顯著(P<0.05)。見表2。

        圖1 不同濃度白藜蘆醇對(duì)PC-3細(xì)胞凋亡的影響

        表2 各濃度白藜蘆醇對(duì)PC-3細(xì)胞中Bcl-2和Survivin蛋白表達(dá)的影響(x±s)

        3 討論

        腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切,其中凋亡抑制蛋白在前列腺癌的發(fā)生中起著極為重要的作用[5]。Bcl-2蛋白是細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵調(diào)控者,同時(shí)也是第一個(gè)確認(rèn)能對(duì)抗細(xì)胞凋亡的基因,其主要是通過線粒體外膜達(dá)到調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的作用。相關(guān)研究顯示,Bcl-2蛋白不僅與前列腺癌的發(fā)生有關(guān),還與前列腺癌的臨床病理特征有關(guān)。且Bcl-2蛋白的過表達(dá)促進(jìn)了前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展[6]。Survivin蛋白被證實(shí)是作用最強(qiáng)的凋亡抑制因子,其可參與細(xì)胞增殖分裂、細(xì)胞周期以及細(xì)胞凋亡的調(diào)控過程,具有調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和抑制細(xì)胞凋亡的雙重功能,其在癌細(xì)胞中過度表達(dá)可能是腫瘤預(yù)后不良的一個(gè)因素[4]。且國外研究顯示,前列腺癌中Survivin蛋白的表達(dá)與腫瘤的分期、分級(jí)密切相關(guān),Survivin蛋白過表達(dá)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞加快向S期轉(zhuǎn)換,抵抗G期抑制,從而促進(jìn)細(xì)胞增殖[6]。同時(shí),Survivin的組織分布有明顯的選擇性,其在正常成人組織中不表達(dá),但在前列腺癌組織中呈現(xiàn)出高表達(dá)狀態(tài)[6]。

        基于此理論,針對(duì)凋亡抑制蛋白進(jìn)行基因治療可以促進(jìn)前列腺腫瘤細(xì)胞凋亡并抑制其增殖,同時(shí)又不影響正常組織,具有良好的靶向性、特異性和安全性[7]。為此尋找能有效干預(yù)細(xì)胞凋亡抑制蛋白的新型藥物成為前列腺癌研究的關(guān)鍵。白藜蘆醇屬于非黃酮多酚類化合物,是中藥虎杖的主要活性成分之一。藥理學(xué)研究表明,其具有良好的抗腫瘤作用,抑制腫瘤轉(zhuǎn)移、逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥、增強(qiáng)化療藥物藥效、減少化療不良反應(yīng)等作用[8]。本研究將不同濃度的虎杖白藜蘆醇對(duì)PC-3細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,PC-3細(xì)胞的增殖抑制、凋亡發(fā)生顯著改變,說明白藜蘆醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞的增殖、凋亡可能具有調(diào)節(jié)作用。隨著濃度的增加,白藜蘆醇對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞的抑制率逐漸增加,且呈現(xiàn)出時(shí)間-劑量依賴性,細(xì)胞的形態(tài)及增值情況差別顯著。此外,隨著白藜蘆醇濃度的增加,PC-3細(xì)胞凋亡率明顯升高,具有明顯的劑量依賴關(guān)系?;⒄劝邹继J醇有有效促進(jìn)PC-3細(xì)胞凋亡,而通過Western blot提示,白藜蘆醇能夠抑制前列腺癌細(xì)胞Bcl-2和Survivin蛋白的表達(dá),通過降低Bcl-2和Survivin蛋白的表達(dá)Bcl-2和Survivin蛋白的表達(dá),從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。因而本研究認(rèn)白藜蘆醇能夠抑制前列腺癌細(xì)胞生長,其機(jī)制可能與白藜蘆醇通過抑制Bcl-2和Survivin蛋白的表達(dá)而阻斷信號(hào)通路有關(guān)。白藜蘆醇抑制前列腺癌的具體作用機(jī)制仍需進(jìn)行深入探討,并需進(jìn)行前列腺癌動(dòng)物模型結(jié)合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行深入探討,且白藜蘆醇廣泛存在于中草藥及其他植物中,應(yīng)提取不同植物的白藜蘆醇進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,以便為將白藜蘆醇作為預(yù)防或治療前列腺癌的有效藥物提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和最為充分的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

        猜你喜歡
        虎杖白藜蘆醇抑制率
        中藥單體對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制作用
        白藜蘆醇研究進(jìn)展
        云南化工(2021年11期)2022-01-12 06:06:12
        血栓彈力圖評(píng)估PCI后氯吡格雷不敏感患者抗血小板藥物的療效
        虎杖多糖的分離純化及結(jié)構(gòu)研究
        中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:47
        日本莢蒾葉片中乙酰膽堿酯酶抑制物的提取工藝優(yōu)化*
        虎杖對(duì)大鼠酒精性脂肪肝的作用及機(jī)制
        中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:20:15
        虎杖煎劑對(duì)急性肺損傷大鼠TNF-a,IL-1β表達(dá)的影響
        白藜蘆醇抑菌作用及抑菌機(jī)制研究進(jìn)展
        白藜蘆醇對(duì)紅色毛癬菌和煙曲霉菌抑菌作用比較
        鹽度變化對(duì)生物發(fā)光細(xì)菌的毒性抑制作用研究
        第一次处破女18分钟高清| 久久综合给合久久狠狠狠9| bbbbbxxxxx欧美性| 欧美白人最猛性xxxxx| 国产91一区二这在线播放| 日韩激情av不卡在线| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲中文字幕国产综合| 伊人一道本| 午夜日本理论片最新片| 手机看片久久第一人妻| 曰韩无码二三区中文字幕| 波多野结衣在线播放一区| 丰满人妻被猛烈进入中文字幕护士 | 精品一区二区三区在线观看视频 | 国产精品丝袜美腿诱惑| 日韩午夜理论免费tv影院| 国産精品久久久久久久| 国产精品国产三级在线高清观看| 日韩一区二区中文字幕| 欧洲美熟女乱又伦av影片| 欧美freesex黑人又粗又大| 无码av免费精品一区二区三区| 亚洲AⅤ乱码一区二区三区| 日本师生三片在线观看| 狂野欧美性猛xxxx乱大交| 亚洲综合无码一区二区三区| 中日韩字幕中文字幕一区| 性生大片免费观看性少妇| 制服丝袜中文字幕在线| 久久人妻公开中文字幕| 国产精品国产三级国产一地| 老熟女老女人国产老太| 蜜臀色欲av在线播放国产日韩 | 国产高清av首播原创麻豆| 精品国产av无码一道| 久久国产精品懂色av| 成人无码一区二区三区| 狠狠躁夜夜躁人人爽天天天天97| 国产成人精品蜜芽视频| 风韵丰满熟妇啪啪区99杏|