王鳳琴 劉 冰

(濟寧醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,濟寧醫(yī)學(xué)院康復(fù)醫(yī)學(xué)院，濟寧 272067)

骨磨片是組織學(xué)實驗教學(xué)必須觀察的標本，然而在使用過程中，這些標本常出現(xiàn)不同程度的損壞現(xiàn)象，如載玻片被打碎、蓋玻片出現(xiàn)裂紋、固定不牢而掉落、蓋玻片下有空氣進入，甚至蓋玻片及骨組織滑落到載玻片邊緣等。本文在傳統(tǒng)方法的基礎(chǔ)上，改進受損骨磨片標本的修復(fù)方法。報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

受損的骨磨片標本50張；無水乙醚(天津富宇精細化工有限公司)；中性樹膠(國藥集團化學(xué)試劑有限公司)；無水乙醇(萊陽經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)精細化工廠)；二甲苯(天津富宇精細化工有限公司)；火棉膠(天津大茂化學(xué)試劑廠)。

1.2 修復(fù)方法

1.2.1浸泡 將受損的空氣封固法骨磨片標本放入盛有無水乙醚的染色缸內(nèi)浸泡并隨時觀察，染色缸上用數(shù)層紗布覆蓋；經(jīng)鍍銀染色、大力紫及酸性復(fù)紅染色的受損骨磨片放入溶劑為二甲苯的染色缸內(nèi)，一旦有骨磨片自然脫落，把其余未脫落的受損骨磨片放入與以上溶劑相同的染色缸內(nèi)。待骨磨片自然脫落后，將紗布連同脫落掉的骨磨片放到相適應(yīng)的濾紙上，使之充分干燥。用壓嘴鑷子將骨磨片輕輕推到清潔后載玻片常規(guī)位置，顯微鏡下檢查，使骨磨片結(jié)構(gòu)最清晰的一面向上。

1.2.2火棉膠鍍膜 將2%火棉膠液(火棉膠2g,100ml無水乙醇，)與等份的無水乙醚充分攪勻，使其完全溶解，放入棕色瓶子，擰緊瓶蓋，于37℃溫箱存放。用小玻璃棒蘸一滴2%火棉膠液置清潔后或免洗的載玻片的適當(dāng)位置，用眼科鑷子尖部蘸一點火棉膠液，粘貼已脫落的干燥骨磨片,迅速埋入火棉膠液中，靜置10min后待火棉膠液中無水乙醇與乙醚完全揮發(fā)風(fēng)干，使埋入的骨磨片與載玻片緊密相連，且骨磨片表面鍍上一層薄火棉膠膜。

1.2.3封片 在已鍍膜的骨磨片表面滴適當(dāng)中性樹膠液，再加蓋玻片即可[1]。

2 結(jié)果

與修復(fù)前相比，修復(fù)后的骨磨片標本美觀、整潔、完整。光鏡下骨單位的同心圓結(jié)構(gòu)及骨小管的放射狀結(jié)構(gòu)清晰可辨。見圖1。

注：a.未修復(fù)前(光鏡，100×);b.修復(fù)后(光鏡，100×)

3 討論

傳統(tǒng)的骨磨片修復(fù)僅限于摔破載玻片標本，用玻璃刀將受損骨磨片標本的載玻片兩側(cè)修理整齊，取一滴中性樹膠滴到清洗干凈的載玻片合適位置，放上修整后的骨磨片，因磨片位置附近有兩層載玻片，厚度是2～3mm，較厚，低倍鏡下觀察清晰，高倍鏡下分辨不清，這樣修復(fù)的標本既不美觀，又影響實驗教學(xué)質(zhì)量。改進后的方法適于任何一種受損或影響鏡下觀察的骨磨片。正常骨磨片厚約40～50μm，是切片的6～10倍，因其自身較厚，經(jīng)無水乙醚、二甲苯浸泡自然脫落的骨磨片舒展而不皺縮，染色缸上用紗布覆蓋，便于撈起、保護脫落的骨磨片[2]。

空氣封固法骨磨片，不能用含有二甲苯液體樹膠封片，因樹膠中的二甲苯使骨小管骨陷窩透明，骨組織結(jié)構(gòu)不清晰[3]。在修復(fù)受損骨磨片時，需用無水乙醚浸泡，因無水乙醚既能使受損的骨磨片自然脫落，又不能使空氣封固法制作的骨磨片變得透明。封片時，先用2%火棉膠液鍍膜，因火棉膠不溶于二甲苯，鍍膜后再用中性樹膠封片，樹膠中的二甲苯不能滲入到骨組織中，所以骨組織的各種結(jié)構(gòu)在顯微鏡下較為清晰[4]。大力紫、酸性復(fù)紅、鍍銀染色的受損骨磨片修復(fù)時可用二甲苯浸泡、常規(guī)中性樹膠封片，二甲苯不會影響其組織結(jié)構(gòu)[5-6]。

骨磨片的制作，首先取新鮮長骨經(jīng)固定液固定，用細鋼鋸鋸成4～5mm左右完整的環(huán)狀骨片，然后用打磨機將骨片磨至1～2mm左右，再改用細磨石研磨，在取材、打磨、細磨的過程中，用力要適中均勻，不能過猛，否則會造成骨片鋸斷、碎裂[7]。骨片磨至100～150μm左右時，投入染色液染色，染色后的骨片在細磨石上繼續(xù)研磨，因此時骨片非常薄，更需用力均勻，操作輕巧，否則骨片破碎或厚薄不均。磨至40～50μm時，顯微鏡下檢查骨磨片厚薄、形態(tài)結(jié)構(gòu)、背景符合要求后，再常規(guī)封片[8]。

由此可見，骨磨片制作步驟較繁瑣，所需時間較長。在組織學(xué)實驗教學(xué)過程中，無論骨磨片出現(xiàn)何種受損情況，經(jīng)以上方法修復(fù)后，其形態(tài)結(jié)構(gòu)與新制作的骨磨片一樣，可繼續(xù)用于實驗教學(xué)。