閆玉冰 王 磊 楊博鴻 柴欣樓

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100000）

高血壓病是我國(guó)最常見(jiàn)的心血管疾病，在我國(guó)18歲以上的成年人的發(fā)病率高達(dá)25.2%［1］，嚴(yán)重影響了人們的生命財(cái)產(chǎn)安全，但尚未引起人們足夠的重視。在一項(xiàng)針對(duì)中國(guó)170萬(wàn)基層人群的疾病篩查中［1］，發(fā)現(xiàn)超過(guò)81%的高血壓病患者只服用一種降壓藥物，且缺乏相應(yīng)的血壓管理，尤其是在西部和農(nóng)村地區(qū)。高血壓病除了可能引發(fā)的種種并發(fā)癥以外，可能還會(huì)引發(fā)精神神經(jīng)癥狀。相關(guān)研究表明［2］，高血壓病的發(fā)病與慢性情緒障礙密切相關(guān)，且抑郁焦慮在高血壓人群中的發(fā)生率明顯高于非高血壓人群［3］，可見(jiàn)高血壓的管理和情緒調(diào)節(jié)有著極為重要的意義，而中醫(yī)藥治療情志疾病的功效不可小覷，從這個(gè)角度來(lái)講，中醫(yī)藥治療具有無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì)。臨床研究表明，中西藥合用，既可以發(fā)揮西藥起效快的長(zhǎng)處，又可以通過(guò)減輕用藥量實(shí)現(xiàn)減輕副作用的目的［4］。本實(shí)驗(yàn)以二麻湯為研究對(duì)象，以穩(wěn)定的高血壓大鼠病證結(jié)合動(dòng)物模型［5］為基礎(chǔ)，以符合現(xiàn)代中醫(yī)臨床特點(diǎn)的病證結(jié)合診療模式為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)二麻湯對(duì)SHR的降壓作用及初步探究其降壓的作用機(jī)理。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用SPF級(jí)、11周齡、雄性高血壓對(duì)照模型（WKY）大鼠10只，自發(fā)性高血壓（SHR）大鼠40只，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，證書號(hào)：SCXK（京）2012-0001。飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)環(huán)境。

1.2 試藥與儀器 1）藥物。二麻湯：天麻10 g，羅布麻10 g（免煎顆粒，北京康仁堂藥業(yè)有限公司統(tǒng)一提供，生產(chǎn)批號(hào)：201712019）。陽(yáng)性對(duì)照藥：硝苯地平緩釋片，10 mg/片（成都地奧集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H10930145）。2）試劑。大鼠血管緊張素Ⅱ（ANGⅡ）ELISA試劑盒 （批號(hào)：201609014.QS41752）、 大鼠去甲腎上腺素 （NE）ELISA試劑盒 （批號(hào)：201606024.RGB-60075R）、大鼠內(nèi)皮素（ET）ELISA 試劑盒（批號(hào)：201706016.QS42101）、大鼠一氧化氮（NO）ELISA 試劑盒（批號(hào)：201606024.qs41893）、大鼠降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）ELISA 試劑盒（批號(hào)：201606024.E02C0744）、大鼠血栓素B2（TXB2）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒（批號(hào)：201606024.QS42057）。3）儀器：DSWY-1 型大鼠無(wú)創(chuàng)尾動(dòng)脈測(cè)壓儀（成都儀器廠）；ZH-SZ型平衡旋轉(zhuǎn)儀（淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司）；動(dòng)物行為記錄分析系統(tǒng)（EthoVision 3.1，Noldus荷蘭）；Sartorius-SECURA213-1CN型電子天平 （上海速展計(jì)量?jī)x器有限公司）；BIOBASE TG-18W型高速離心機(jī)（濟(jì)南來(lái)寶醫(yī)療器械有限公司）；全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀（MULTISKAN MK3，Thermo，USA）；MINI shaker（MH-1，kylin-Bell Lab Instruments QILINBEIER）。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組 11周齡SHR與WKY大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，12周齡測(cè)量血壓基線、采集宏觀表征和行為學(xué)試驗(yàn)適應(yīng)性訓(xùn)練后進(jìn)行證候?qū)傩耘袆e，均屬肝火亢盛證。隨機(jī)將40只高血壓大鼠分為4組，分別為模型組、陽(yáng)性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組；WKY大鼠10只，作為正常組。

1.4 給藥方法 高血壓大鼠14周起灌胃給藥，每日1次，連續(xù)用藥5周，低劑量灌胃相當(dāng)于60 kg成人等效劑量的6倍；灌胃體積10 mL/kg，高劑量相當(dāng)于低劑量的9倍；依據(jù)二麻湯（20 g/d）一日成人用量進(jìn)行折算：二麻湯1組予二麻湯高劑量為6 g/（kg·d），二麻湯2組予二麻湯低劑量為0.67 g/（kg·d）。硝苯地平緩釋片生藥含量為0.002 g/（kg·d）；正常組與模型組分別灌胃等體積的去離子水10 mL。每周給大鼠稱體質(zhì)量1次，并適時(shí)調(diào)整給藥劑量。

1.5 觀察指標(biāo) 治療前和治療1～5周后，檢測(cè)大鼠以下指標(biāo)。1）一般情況，測(cè)量大鼠體質(zhì)量、收縮壓。2）血壓測(cè)量。應(yīng)用DSWY-1型大鼠無(wú)創(chuàng)尾動(dòng)脈測(cè)壓儀測(cè)量大鼠尾動(dòng)脈收縮壓（SBP）。測(cè)量過(guò)程完全嚴(yán)格按照血壓計(jì)操作手冊(cè)規(guī)范進(jìn)行。3）旋轉(zhuǎn)耐受實(shí)驗(yàn)。將大鼠置于平衡旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)平臺(tái)上，設(shè)置轉(zhuǎn)速為60 r/min，記錄大鼠從開(kāi)始旋轉(zhuǎn)到跌下平臺(tái)的時(shí)長(zhǎng)，若超過(guò)2 min仍不跌下，則終止測(cè)試，該只大鼠的旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間記錄為120 s。4）易激惹程度評(píng)分［6］。 5）理化指標(biāo)：ELISA 法檢測(cè)血清中 ANGⅡ、NE、ET、NO、CGRP、TXB2 水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（x±s）表示，符合正態(tài)分布且方差齊的數(shù)據(jù)比較差異性用方差分析（ANOVA）；數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布或方差不齊使用非參數(shù)檢驗(yàn)的方法 比較組間差異，兩兩比較采用最小顯著差值法（LSD）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠給藥前后易激惹程度評(píng)分比較 見(jiàn)表1。模型組易激惹程度明顯高于正常組（P＜0.05）；陽(yáng)性藥組大鼠給藥后易激惹程度較給藥前降低（P＜0.05）；與模型組比較，二麻湯1組、二麻湯2組易激惹程度隨給藥時(shí)間的延長(zhǎng)而降幅增大，相比較而言，二麻湯1組的易激惹程度降低幅度更大；給藥4周后，二麻湯2組易激惹程度才開(kāi)始明顯減輕（P＜0.05）。

2.2 各組大鼠給藥前后體質(zhì)量比較 見(jiàn)表2。各組隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，體質(zhì)量均有不同程度的增加，正常組大鼠的體質(zhì)量最大；同一給藥時(shí)間不同組別之間的體質(zhì)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 各組大鼠給藥前后易激惹程度評(píng)分比較（分，x±s）

表2 各組大鼠給藥前后體質(zhì)量比較（g，x±s）

2.3 各組大鼠給藥前后各時(shí)間段收縮壓比較 見(jiàn)表3。正常組和模型組的收縮壓隨周齡增長(zhǎng)而增加；自給藥3周后起，陽(yáng)性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組與模型組比較，隨給藥時(shí)間增長(zhǎng)均有較大程度地降壓或抑制血壓升高的作用（P＜0.01）；其中陽(yáng)性藥組降壓作用優(yōu)于其他藥物干預(yù)組（P＜0.001）。二麻湯1組優(yōu)于二麻湯2組，即有量效關(guān)系。

表3 各組大鼠給藥前后各時(shí)間段收縮壓比較（mmHg，x±s）

2.4 各組大鼠給藥前后各時(shí)間段旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間比較見(jiàn)表4。隨著給藥時(shí)間增長(zhǎng)，正常組旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間無(wú)明顯變化；與模型組比較，陽(yáng)性藥組隨給藥時(shí)間延長(zhǎng)旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間有所增加，但幅度較小且差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，自給藥3周后起二麻湯1組、二麻湯2組隨給藥時(shí)間的延長(zhǎng)旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間均有不同程度地增加（P＜0.05）；且二麻湯1組的旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間增加顯著（P＜0.01）。

表4 各組大鼠給藥前后各時(shí)間段旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間比較（s，x±s）

2.5 各組大鼠理化指標(biāo)比較 見(jiàn)表5。與正常組比較，模型組血清ANGⅡ、NE、ET、TXB2的水平高于正常組（P＜0.001）；與模型組比較，陽(yáng)性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組血清ANGⅡ、NE、ET、TXB2水平均低于模型組（P＜0.05），二麻湯2組血清ANGⅡ與模型組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與正常組比較，模型組血清CGRP的水平低于正常組（P＜0.001）；與模型組比較，陽(yáng)性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組血清CGRP濃度均有高于模型組的趨勢(shì)；其中二麻湯1組血清CGRP水平高于模型組 （P＜0.05）；二麻湯2組血清CGRP水平高于模型組但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與正常組比較，模型組與正常組血清NO水平，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；陽(yáng)性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組與模型組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表 5 各組大鼠血清 ANGⅡ、NE、ET、TXB2水平比較（x±s）

3 討 論

天麻，味甘性平，歸肝經(jīng)，始見(jiàn)于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有平肝息風(fēng)、祛風(fēng)止痛之功效，現(xiàn)代藥理研究表明，其具有降壓、鎮(zhèn)靜、擴(kuò)血管等多種作用［7-8］，臨床應(yīng)用比較廣泛；羅布麻，味甘苦性涼，歸肝經(jīng)，始見(jiàn)于《救荒本草》，具有平抑肝陽(yáng)、清熱利尿之功效，現(xiàn)代藥理研究表明羅布麻葉中降壓的有效成分主要是榭皮素、總黃酮和碳水化合物［9］，具有降壓、抗抑郁、調(diào)脂、改善眩暈、頭痛癥狀等多種作用［10-11］，近年來(lái)相關(guān)的研究日益增多。兩者藥性均較和緩，一潤(rùn)一燥，陰陽(yáng)共濟(jì)，同入肝經(jīng)，效宏而力專，臨床上常常配伍使用，治療高血壓效果良好。截止到目前，高血壓的具體機(jī)制尚未完全闡明，很多因素參與其中，各種因子的作用亦不容忽視。ANGⅡ可直接使小動(dòng)脈平滑肌收縮、外周血管阻力增加，繼而交感神經(jīng)的活性增強(qiáng)，醛固酮分泌水平升高，從而體內(nèi)存在水鈉潴留，最終導(dǎo)致血壓升高［12］。原發(fā)性高血壓發(fā)病與交感神經(jīng)系統(tǒng)活動(dòng)性增強(qiáng)有關(guān)，文獻(xiàn)報(bào)道血清中NE水平在一定程度上能定量反映交感神經(jīng)系統(tǒng)的活性，NE濃度越高，說(shuō)明交感神經(jīng)的興奮性越強(qiáng)［13］，可以在一定程度上反映有無(wú)高血壓的發(fā)病趨勢(shì)；ET是目前已知的作用最強(qiáng)烈且效力維持時(shí)間最久的收縮血管的因子，其主要成分為活性多肽，由血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌，合成或降解過(guò)程的失衡會(huì)導(dǎo)致異常的血管緊張度升高，進(jìn)而引起外周阻力改變，使血壓增高。ET對(duì)絕大多數(shù)種屬各異的動(dòng)、靜脈和微血管的體內(nèi)和離體實(shí)驗(yàn)都有強(qiáng)烈而持久的收縮作用，其中對(duì)動(dòng)脈的收縮作用更強(qiáng)［14］，血管的這種變化可能是長(zhǎng)期性血壓調(diào)節(jié)的一個(gè)重要機(jī)制。NO是一種擴(kuò)血管物質(zhì)，主要由內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，能降低全身平均動(dòng)脈壓，對(duì)維護(hù)血管舒張和收縮的功能，穩(wěn)定血壓改善血管彈性具有積極意義［15］。NO和ET的失調(diào)在高血壓病的全過(guò)程中都起著非常重要的作用。與ET的作用剛好相反，CGRP是目前已知的作用最強(qiáng)烈的內(nèi)源性舒血管活性多肽，且CGRP對(duì)ET具有拮抗作用，一旦CGRP含量降低，拮抗作用就會(huì)相應(yīng)減弱，ET使血管收縮，從而造成血壓升高［16］。TXA2是血小板花生四烯酸（ARA）的代謝產(chǎn)物，具有強(qiáng)烈的收縮血管和促血小板聚集作用［17］，但其生物半衰期僅30 s，迅速轉(zhuǎn)化為TXB2，因此常以其代謝產(chǎn)物TXB2反映其濃度。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，天麻-羅布麻二麻湯具有顯著的降壓作用，作用機(jī)理可能與降低血清中ANGⅡ、NE、ET含量，增加血清中CGRP含量相關(guān)，且存在量效關(guān)系。各組血清NO無(wú)明顯差異，提示硝苯地平及二麻湯的降壓機(jī)制可能與改變NO的含量無(wú)關(guān)。隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，二麻湯組大鼠旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間、易激惹程度評(píng)分亦有不同程度的改善，說(shuō)明不僅在血壓指標(biāo)上有明顯效果，在改善眩暈、易怒等癥狀的方面效果也收效良好［18］，這是一般降壓藥物所不具備的，凸顯了中藥的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，值得在臨床上深入研究。