閆玉冰 王 磊 楊博鴻 柴欣樓
(北京中醫(yī)藥大學(xué),北京 100000)
高血壓病是我國(guó)最常見的心血管疾病,在我國(guó)18歲以上的成年人的發(fā)病率高達(dá)25.2%[1],嚴(yán)重影響了人們的生命財(cái)產(chǎn)安全,但尚未引起人們足夠的重視。在一項(xiàng)針對(duì)中國(guó)170萬基層人群的疾病篩查中[1],發(fā)現(xiàn)超過81%的高血壓病患者只服用一種降壓藥物,且缺乏相應(yīng)的血壓管理,尤其是在西部和農(nóng)村地區(qū)。高血壓病除了可能引發(fā)的種種并發(fā)癥以外,可能還會(huì)引發(fā)精神神經(jīng)癥狀。相關(guān)研究表明[2],高血壓病的發(fā)病與慢性情緒障礙密切相關(guān),且抑郁焦慮在高血壓人群中的發(fā)生率明顯高于非高血壓人群[3],可見高血壓的管理和情緒調(diào)節(jié)有著極為重要的意義,而中醫(yī)藥治療情志疾病的功效不可小覷,從這個(gè)角度來講,中醫(yī)藥治療具有無可比擬的優(yōu)勢(shì)。臨床研究表明,中西藥合用,既可以發(fā)揮西藥起效快的長(zhǎng)處,又可以通過減輕用藥量實(shí)現(xiàn)減輕副作用的目的[4]。本實(shí)驗(yàn)以二麻湯為研究對(duì)象,以穩(wěn)定的高血壓大鼠病證結(jié)合動(dòng)物模型[5]為基礎(chǔ),以符合現(xiàn)代中醫(yī)臨床特點(diǎn)的病證結(jié)合診療模式為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),評(píng)價(jià)二麻湯對(duì)SHR的降壓作用及初步探究其降壓的作用機(jī)理。現(xiàn)報(bào)告如下。
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用SPF級(jí)、11周齡、雄性高血壓對(duì)照模型(WKY)大鼠10只,自發(fā)性高血壓(SHR)大鼠40只,購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,證書號(hào):SCXK(京)2012-0001。飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)環(huán)境。
1.2 試藥與儀器 1)藥物。二麻湯:天麻10 g,羅布麻10 g(免煎顆粒,北京康仁堂藥業(yè)有限公司統(tǒng)一提供,生產(chǎn)批號(hào):201712019)。陽性對(duì)照藥:硝苯地平緩釋片,10 mg/片(成都地奧集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H10930145)。2)試劑。大鼠血管緊張素Ⅱ(ANGⅡ)ELISA試劑盒 (批號(hào):201609014.QS41752)、 大鼠去甲腎上腺素 (NE)ELISA試劑盒 (批號(hào):201606024.RGB-60075R)、大鼠內(nèi)皮素(ET)ELISA 試劑盒(批號(hào):201706016.QS42101)、大鼠一氧化氮(NO)ELISA 試劑盒(批號(hào):201606024.qs41893)、大鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA 試劑盒(批號(hào):201606024.E02C0744)、大鼠血栓素B2(TXB2)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒(批號(hào):201606024.QS42057)。3)儀器:DSWY-1 型大鼠無創(chuàng)尾動(dòng)脈測(cè)壓儀(成都儀器廠);ZH-SZ型平衡旋轉(zhuǎn)儀(淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司);動(dòng)物行為記錄分析系統(tǒng)(EthoVision 3.1,Noldus荷蘭);Sartorius-SECURA213-1CN型電子天平 (上海速展計(jì)量?jī)x器有限公司);BIOBASE TG-18W型高速離心機(jī)(濟(jì)南來寶醫(yī)療器械有限公司);全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀(MULTISKAN MK3,Thermo,USA);MINI shaker(MH-1,kylin-Bell Lab Instruments QILINBEIER)。
1.3 實(shí)驗(yàn)分組 11周齡SHR與WKY大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,12周齡測(cè)量血壓基線、采集宏觀表征和行為學(xué)試驗(yàn)適應(yīng)性訓(xùn)練后進(jìn)行證候?qū)傩耘袆e,均屬肝火亢盛證。隨機(jī)將40只高血壓大鼠分為4組,分別為模型組、陽性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組;WKY大鼠10只,作為正常組。
1.4 給藥方法 高血壓大鼠14周起灌胃給藥,每日1次,連續(xù)用藥5周,低劑量灌胃相當(dāng)于60 kg成人等效劑量的6倍;灌胃體積10 mL/kg,高劑量相當(dāng)于低劑量的9倍;依據(jù)二麻湯(20 g/d)一日成人用量進(jìn)行折算:二麻湯1組予二麻湯高劑量為6 g/(kg·d),二麻湯2組予二麻湯低劑量為0.67 g/(kg·d)。硝苯地平緩釋片生藥含量為0.002 g/(kg·d);正常組與模型組分別灌胃等體積的去離子水10 mL。每周給大鼠稱體質(zhì)量1次,并適時(shí)調(diào)整給藥劑量。
1.5 觀察指標(biāo) 治療前和治療1~5周后,檢測(cè)大鼠以下指標(biāo)。1)一般情況,測(cè)量大鼠體質(zhì)量、收縮壓。2)血壓測(cè)量。應(yīng)用DSWY-1型大鼠無創(chuàng)尾動(dòng)脈測(cè)壓儀測(cè)量大鼠尾動(dòng)脈收縮壓(SBP)。測(cè)量過程完全嚴(yán)格按照血壓計(jì)操作手冊(cè)規(guī)范進(jìn)行。3)旋轉(zhuǎn)耐受實(shí)驗(yàn)。將大鼠置于平衡旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)平臺(tái)上,設(shè)置轉(zhuǎn)速為60 r/min,記錄大鼠從開始旋轉(zhuǎn)到跌下平臺(tái)的時(shí)長(zhǎng),若超過2 min仍不跌下,則終止測(cè)試,該只大鼠的旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間記錄為120 s。4)易激惹程度評(píng)分[6]。 5)理化指標(biāo):ELISA 法檢測(cè)血清中 ANGⅡ、NE、ET、NO、CGRP、TXB2 水平。
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以(x±s)表示,符合正態(tài)分布且方差齊的數(shù)據(jù)比較差異性用方差分析(ANOVA);數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布或方差不齊使用非參數(shù)檢驗(yàn)的方法 比較組間差異,兩兩比較采用最小顯著差值法(LSD)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 各組大鼠給藥前后易激惹程度評(píng)分比較 見表1。模型組易激惹程度明顯高于正常組(P<0.05);陽性藥組大鼠給藥后易激惹程度較給藥前降低(P<0.05);與模型組比較,二麻湯1組、二麻湯2組易激惹程度隨給藥時(shí)間的延長(zhǎng)而降幅增大,相比較而言,二麻湯1組的易激惹程度降低幅度更大;給藥4周后,二麻湯2組易激惹程度才開始明顯減輕(P<0.05)。
2.2 各組大鼠給藥前后體質(zhì)量比較 見表2。各組隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng),體質(zhì)量均有不同程度的增加,正常組大鼠的體質(zhì)量最大;同一給藥時(shí)間不同組別之間的體質(zhì)量比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
表1 各組大鼠給藥前后易激惹程度評(píng)分比較(分,x±s)
表2 各組大鼠給藥前后體質(zhì)量比較(g,x±s)
2.3 各組大鼠給藥前后各時(shí)間段收縮壓比較 見表3。正常組和模型組的收縮壓隨周齡增長(zhǎng)而增加;自給藥3周后起,陽性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組與模型組比較,隨給藥時(shí)間增長(zhǎng)均有較大程度地降壓或抑制血壓升高的作用(P<0.01);其中陽性藥組降壓作用優(yōu)于其他藥物干預(yù)組(P<0.001)。二麻湯1組優(yōu)于二麻湯2組,即有量效關(guān)系。
表3 各組大鼠給藥前后各時(shí)間段收縮壓比較(mmHg,x±s)
2.4 各組大鼠給藥前后各時(shí)間段旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間比較見表4。隨著給藥時(shí)間增長(zhǎng),正常組旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間無明顯變化;與模型組比較,陽性藥組隨給藥時(shí)間延長(zhǎng)旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間有所增加,但幅度較小且差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與模型組比較,自給藥3周后起二麻湯1組、二麻湯2組隨給藥時(shí)間的延長(zhǎng)旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間均有不同程度地增加(P<0.05);且二麻湯1組的旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間增加顯著(P<0.01)。
表4 各組大鼠給藥前后各時(shí)間段旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間比較(s,x±s)
2.5 各組大鼠理化指標(biāo)比較 見表5。與正常組比較,模型組血清ANGⅡ、NE、ET、TXB2的水平高于正常組(P<0.001);與模型組比較,陽性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組血清ANGⅡ、NE、ET、TXB2水平均低于模型組(P<0.05),二麻湯2組血清ANGⅡ與模型組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與正常組比較,模型組血清CGRP的水平低于正常組(P<0.001);與模型組比較,陽性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組血清CGRP濃度均有高于模型組的趨勢(shì);其中二麻湯1組血清CGRP水平高于模型組 (P<0.05);二麻湯2組血清CGRP水平高于模型組但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與正常組比較,模型組與正常組血清NO水平,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);陽性藥組、二麻湯1組、二麻湯2組與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
表 5 各組大鼠血清 ANGⅡ、NE、ET、TXB2水平比較(x±s)
天麻,味甘性平,歸肝經(jīng),始見于《神農(nóng)本草經(jīng)》,具有平肝息風(fēng)、祛風(fēng)止痛之功效,現(xiàn)代藥理研究表明,其具有降壓、鎮(zhèn)靜、擴(kuò)血管等多種作用[7-8],臨床應(yīng)用比較廣泛;羅布麻,味甘苦性涼,歸肝經(jīng),始見于《救荒本草》,具有平抑肝陽、清熱利尿之功效,現(xiàn)代藥理研究表明羅布麻葉中降壓的有效成分主要是榭皮素、總黃酮和碳水化合物[9],具有降壓、抗抑郁、調(diào)脂、改善眩暈、頭痛癥狀等多種作用[10-11],近年來相關(guān)的研究日益增多。兩者藥性均較和緩,一潤(rùn)一燥,陰陽共濟(jì),同入肝經(jīng),效宏而力專,臨床上常常配伍使用,治療高血壓效果良好。截止到目前,高血壓的具體機(jī)制尚未完全闡明,很多因素參與其中,各種因子的作用亦不容忽視。ANGⅡ可直接使小動(dòng)脈平滑肌收縮、外周血管阻力增加,繼而交感神經(jīng)的活性增強(qiáng),醛固酮分泌水平升高,從而體內(nèi)存在水鈉潴留,最終導(dǎo)致血壓升高[12]。原發(fā)性高血壓發(fā)病與交感神經(jīng)系統(tǒng)活動(dòng)性增強(qiáng)有關(guān),文獻(xiàn)報(bào)道血清中NE水平在一定程度上能定量反映交感神經(jīng)系統(tǒng)的活性,NE濃度越高,說明交感神經(jīng)的興奮性越強(qiáng)[13],可以在一定程度上反映有無高血壓的發(fā)病趨勢(shì);ET是目前已知的作用最強(qiáng)烈且效力維持時(shí)間最久的收縮血管的因子,其主要成分為活性多肽,由血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌,合成或降解過程的失衡會(huì)導(dǎo)致異常的血管緊張度升高,進(jìn)而引起外周阻力改變,使血壓增高。ET對(duì)絕大多數(shù)種屬各異的動(dòng)、靜脈和微血管的體內(nèi)和離體實(shí)驗(yàn)都有強(qiáng)烈而持久的收縮作用,其中對(duì)動(dòng)脈的收縮作用更強(qiáng)[14],血管的這種變化可能是長(zhǎng)期性血壓調(diào)節(jié)的一個(gè)重要機(jī)制。NO是一種擴(kuò)血管物質(zhì),主要由內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生,能降低全身平均動(dòng)脈壓,對(duì)維護(hù)血管舒張和收縮的功能,穩(wěn)定血壓改善血管彈性具有積極意義[15]。NO和ET的失調(diào)在高血壓病的全過程中都起著非常重要的作用。與ET的作用剛好相反,CGRP是目前已知的作用最強(qiáng)烈的內(nèi)源性舒血管活性多肽,且CGRP對(duì)ET具有拮抗作用,一旦CGRP含量降低,拮抗作用就會(huì)相應(yīng)減弱,ET使血管收縮,從而造成血壓升高[16]。TXA2是血小板花生四烯酸(ARA)的代謝產(chǎn)物,具有強(qiáng)烈的收縮血管和促血小板聚集作用[17],但其生物半衰期僅30 s,迅速轉(zhuǎn)化為TXB2,因此常以其代謝產(chǎn)物TXB2反映其濃度。
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,天麻-羅布麻二麻湯具有顯著的降壓作用,作用機(jī)理可能與降低血清中ANGⅡ、NE、ET含量,增加血清中CGRP含量相關(guān),且存在量效關(guān)系。各組血清NO無明顯差異,提示硝苯地平及二麻湯的降壓機(jī)制可能與改變NO的含量無關(guān)。隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng),二麻湯組大鼠旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間、易激惹程度評(píng)分亦有不同程度的改善,說明不僅在血壓指標(biāo)上有明顯效果,在改善眩暈、易怒等癥狀的方面效果也收效良好[18],這是一般降壓藥物所不具備的,凸顯了中藥的獨(dú)特優(yōu)勢(shì),值得在臨床上深入研究。