葛 建，林 芳，張永勇，鄧同樂，胡華軍，劉 軍

（中國計(jì)量大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310018）

植物多酚是多羥基酚類化合物的總稱，是廣泛存在于植物體內(nèi)的植物次生代謝物質(zhì)，具有抗腫瘤、降血脂、清除自由基、降血糖等一系列重要的藥理功能[1]。茶多酚為茶葉中含量最多的一類活性成分，約占茶葉干質(zhì)量的20%，而其中又以表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）含量最高，約占兒茶素總量的50%～60%[2]。

關(guān)于EGCG調(diào)控脂質(zhì)代謝機(jī)制方面的研究，國內(nèi)外學(xué)者從不同角度對(duì)非華人分別進(jìn)行了探索。Kobayashi[3]、Raederstorff[4]和Wu[5]等分別從EGCG影響胃腸道中膽固醇微粒溶解性、抑制食物中脂質(zhì)成分吸收以及EGCG與低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL）結(jié)合角度探索了EGCG對(duì)膽固醇代謝的調(diào)控機(jī)理。王瑋[6]、劉智偉[7]等分別從綠茶多酚（主要成分為EGCG）對(duì)腸道雙歧桿菌和人源化小鼠腸道菌群影響的角度探討了綠茶多酚對(duì)機(jī)體脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)機(jī)制。本課題組前期從EGCG對(duì)膽汁酸體外吸附角度探索了其降血脂活性[8]，但是相關(guān)機(jī)制未進(jìn)一步闡明。由于大劑量腹腔注射EGCG能夠?qū)е赂螕p傷[9]，本研究以人結(jié)腸癌細(xì)胞（Caco-2）模型和動(dòng)物灌胃途徑，從體外膽汁酸重吸收和膽固醇攝取以及體內(nèi)相關(guān)基因表達(dá)角度，探索EGCG調(diào)控血脂的機(jī)制。

機(jī)體內(nèi)膽酸鹽是膽固醇的主要去路，EGCG通過與膽汁酸吸附，阻止膽酸鹽的重吸收，促使肝臟中的膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸，從而達(dá)到降血脂的目的[10]。Kahlon等于2004—2007年持續(xù)開展了不同水果、蔬菜在體外吸附膽酸鹽能力的研究[11-13]。胡凱[14]、鄧雪[15]等探討了不同茶葉粉末、茶葉水提液以及茶多酚等對(duì)膽酸鹽的結(jié)合能力。但是此類研究只是從體外膽汁酸吸附的角度來探索調(diào)血脂機(jī)制，而關(guān)于EGCG通過干預(yù)膽汁酸重吸收和膽固醇跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控脂質(zhì)代謝機(jī)制的研究還鮮見報(bào)道。因此，本研究在前期研究基礎(chǔ)上開展深入探索，從而探討EGCG對(duì)膽固醇代謝的調(diào)控機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

SPF級(jí)Wistar雄性大鼠，體質(zhì)量（181±10）g，購于浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK（浙）20140001，于杭州師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)。

EGCG（純度98%以上） 杭州和田生物技術(shù)有限公司；牛磺膽酸鈉（sodium taurocholic，STC）、甘氨膽酸鈉（sodium glycocholate，SGC）標(biāo)準(zhǔn)品（純度98%以上） 杭州邦易化工有限公司；甲醇、乙腈（色譜純） 杭州米克化工有限公司；Caco-2細(xì)胞、大鼠肝細(xì)胞（BRL） 中國科學(xué)院上海細(xì)胞典藏委員會(huì)；高糖DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液（含1%非必需氨基酸、1%L-谷氨酰胺、1%雙抗和10%胎牛血清） ?？寺∩锘瘜W(xué)制品（北京）有限公司；熒光標(biāo)記膽固醇（NBD-膽固醇） 阿拉?。ㄉ虾＃┥镌噭┯邢薰荆粚?shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time polymerase chain reaction，qPCR）試劑盒 上海生工生物工程有限公司；包埋石蠟 德國徠卡公司；BCA定量試劑盒 上海碧云天生物技術(shù)有限公司；總膽固醇（total cholesterol，TC）試劑盒、甘油三酯（triglycerides，TG）試劑盒、LDL膽固醇（LDL-cholesterol，LDL-C）試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）試劑盒 南京建成生物工程研究所；化學(xué)發(fā)光顯色（electro-chemi-luminescence，ECL）試劑盒 美國GE公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LC-20ATvp高效液相色譜系統(tǒng) 日本島津公司；細(xì)胞培養(yǎng)箱 德國Binder公司；Trans-well小室 美國Corning公司；MK-3臺(tái)式熒光檢測(cè)儀 荷蘭雷勃生物醫(yī)學(xué)有限公司；倒置顯微鏡 日本尼康公司。

1.3 方法

1.3.1 EGCG對(duì)SGC和STC在Caco-2細(xì)胞跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)中的影響

1.3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

根據(jù)文獻(xiàn)[16]略作修改，本實(shí)驗(yàn)采用空白HBSS（Hank’s balanced salt solution）緩沖液分別配制濃度為0.05～1.20 mmol/L的SGC和STC的混合溶液。將不同濃度的STC和SGC采用高效液相色譜檢測(cè)，相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為Y＝380 726X+803和Y＝630 372X-1 171。STC與SGC的峰面積與濃度之間的線性相關(guān)系數(shù)分別為0.999 7、0.999 8，說明線性關(guān)系良好。日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均低于10%，說明精密度較好。

1.3.1.2 Caco-2細(xì)胞的培養(yǎng)

Caco-2細(xì)胞于充有5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞長勢(shì)良好，取出無菌Trans-well小室（聚碳酸酯膜，孔徑0.4 μm）置于6 孔培養(yǎng)板的中間部位并做好標(biāo)記。取出細(xì)胞，加適量消化液，倒置生物顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，加適量新鮮培養(yǎng)基，用滅菌后的膠頭滴管吹打培養(yǎng)瓶，將細(xì)胞吹打至培養(yǎng)基中，混勻，調(diào)整密度為1×105個(gè)/mL。

每個(gè)小室細(xì)胞單層膜頂端（apical side，AP）側(cè)加1.5 mL細(xì)胞懸液，基底端（basolateral side，BL）側(cè)加2.5 mL空白培養(yǎng)液，十字晃動(dòng)后放入培養(yǎng)箱中。隔一天換液1 次，1 周后每天更換培養(yǎng)液，21 d后待細(xì)胞基本匯合，檢測(cè)其電阻值、苯酚紅滲漏性以及小室AP和BL側(cè)堿性磷酸酶活力，以此判斷Caco-2單層細(xì)胞完整性、苯酚紅滲透率以及細(xì)胞極性[16]。

1.3.1.3 樣品收集和檢測(cè)

取跨膜電阻值200 Ω/cm2以上、苯酚紅滲透率10%以上以及AP側(cè)堿性磷酸酶活性10 倍于BL側(cè)的Trans-well小室細(xì)胞模型，實(shí)驗(yàn)前用預(yù)熱的HBSS緩沖液清洗細(xì)胞3 次，最后1 次于培養(yǎng)箱中孵育0.5 h，輕輕吸去緩沖液，洗去Caco-2細(xì)胞表面雜質(zhì)。重吸收實(shí)驗(yàn)設(shè)立3 組，分別為空白對(duì)照組（只加空白HBSS緩沖液）、膽酸鹽+HBSS組（加入用HBSS緩沖液稀釋的膽酸鹽溶液）和膽酸鹽+EGCG組（加入膽酸鹽溶液和EGCG溶液混合液）。將EGCG用HBSS緩沖液配成2 mg/mL的溶液；用HBSS緩沖液配制2 種含膽酸鹽的混合溶液，濃度分別為5.0 mmol/L和0.5 mmol/L。按體積比1∶1將上述EGCG溶液和膽酸鹽溶液混合，使最終EGCG質(zhì)量濃度為1 mg/mL、膽酸鹽濃度分別為2.5 mmol/L和0.25 mmol/L。分別吸取1.5 mL HBSS緩沖液/膽酸鹽混合液/EGCG+膽酸鹽混合液加入AP側(cè)作為供給側(cè)，同時(shí)BL側(cè)加入2.5 mL HBSS緩沖液作為受體側(cè)。將細(xì)胞培養(yǎng)板置于37 ℃、50 r/min的恒溫振蕩器中孵育。分別于0、2、4 h和8 h吸取BL側(cè)100 μL溶液于已標(biāo)記離心管中，同時(shí)補(bǔ)充相同體積的HBSS緩沖液。按照1.3.1.1節(jié)方法利用高效液相色譜分析，將所得膽酸鹽峰面積代入相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，得出培養(yǎng)液中膽酸鹽濃度，以培養(yǎng)液中膽酸鹽濃度乘以培養(yǎng)液體積計(jì)算不同時(shí)間內(nèi)膽酸鹽的滲透量。

1.3.2 EGCG對(duì)膽固醇在細(xì)胞內(nèi)攝取和外排的影響

根據(jù)文獻(xiàn)[17-18]的方法略有修改，將1×105個(gè)/mL的Caco-2細(xì)胞和BRL細(xì)胞懸液3 mL分別加入相應(yīng)6 孔培養(yǎng)板中，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中用濃度為0、40 μmol/L的EGCG的10%胎牛血清培養(yǎng)液干預(yù)24 h后換液，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）清洗后用10%胎牛血清培養(yǎng)液（含5 μmol/L NBD-膽固醇）孵育4 h，再用含濃度為0、40 μmol/L的EGCG的10%胎牛血清培養(yǎng)液培養(yǎng)4 h。孵育結(jié)束后，用PBS清洗3 遍，然后用0.1% Triton X-100裂解細(xì)胞，吸取200 μL細(xì)胞裂解液于黑色酶標(biāo)板中，采用熒光酶標(biāo)儀在激發(fā)波長469 nm、發(fā)射波長537 nm處測(cè)定熒光強(qiáng)度。同時(shí)測(cè)定細(xì)胞裂解液中蛋白質(zhì)含量，以蛋白質(zhì)含量校正裂解液中熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度與膽固醇含量成正比，根據(jù)熒光強(qiáng)度判斷膽固醇的攝取和外排。

1.3.3 EGCG對(duì)高脂模型大鼠膽固醇代謝的影響

1.3.3.1 大鼠分組及血脂水平測(cè)定

將18 只大鼠隨機(jī)分為3 組：正常組、高脂模型組、EGCG干預(yù)組，適應(yīng)性養(yǎng)殖1 周后，除對(duì)照組繼續(xù)飼喂普通飼料外，余下2 組飼喂高脂飼料（配方（以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)）：74%基礎(chǔ)飼料、15%豬油、10%蛋黃粉、1%膽固醇）。同時(shí)，EGCG組以200 mg/kg劑量EGCG灌胃，對(duì)照組和高脂模型組以相應(yīng)體積的生理鹽水灌胃，1 次/d，連續(xù)6 周。分別于第0、3、6周眼靜脈叢取血，采用試劑盒檢測(cè)不同時(shí)間段血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C濃度。

1.3.3.2 大鼠體質(zhì)量和肝臟指數(shù)測(cè)定

不同實(shí)驗(yàn)組大鼠每周稱質(zhì)量一次，第6周處死后剝離大鼠肝臟，吸干表面血跡，同時(shí)立即稱質(zhì)量。分離大鼠血清置于-80 ℃冰箱保存，分別用于血脂和膽汁酸含量測(cè)定，部分肝臟于液氮保存，用于基因表達(dá)水平檢測(cè)。肝臟指數(shù)為肝臟質(zhì)量與體質(zhì)量之比。

1.3.3.3 大鼠肝臟細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化觀察

將大鼠肝臟切除左側(cè)葉邊緣部分，于體積分?jǐn)?shù)10%福爾馬林溶液中固定48 h，然后依次經(jīng)85%（體積分?jǐn)?shù)，下同）乙醇（1 次）、95%乙醇（4 次）、100%乙醇（2 次）、二甲苯（2 次）、石蠟（3 次）脫水，石蠟包埋、切片，制備5 μm厚石蠟切片，脫蠟水化，蘇木精-伊紅（hematoxylin and eosin，HE）染色后光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化。

1.3.3.4 大鼠肝臟膽固醇代謝相關(guān)基因及蛋白的表達(dá)

利用試劑盒進(jìn)行大鼠肝臟總RNA的提取，采用RNA逆轉(zhuǎn)錄酶試劑盒進(jìn)行mRNA逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)格按照說明書操作。相關(guān)基因和內(nèi)參基因引物見表1，采用20 μL體系：cDNA 1.0 μL、引物1 0.5 μL、引物2 0.5 μL、SYBR Green Master Mix 10 μL、超純水8 μL。程序?yàn)椋?5 ℃、1 min；95 ℃、15 s，63 ℃、25 s，40 個(gè)循環(huán)。收集熒光，每個(gè)樣品重復(fù)3 次，各個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量以2（Ct（內(nèi)參基因）-Ct（目的基因））進(jìn)行計(jì)算，分析實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組肝臟中相關(guān)膽固醇代謝基因的表達(dá)差異。

表 1 qPCR引物Table 1 Primer sequences used for qPCR

將肝臟組織剪碎、裂解后，高速冷凍離心，分離上清液于超低溫冰箱保存。按照BCA定量試劑盒說明書方法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算樣品中總蛋白質(zhì)量濃度。分別進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、一抗孵育、洗膜、二抗孵育、洗膜后采用ECL試劑盒反應(yīng)，移入凝膠成像分析儀中，化學(xué)光敏模式曝光顯影。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

所有檢測(cè)數(shù)據(jù)結(jié)果采用 ±s表示，采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 EGCG對(duì)SGC和STC跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響分析

圖 1 EGCG對(duì)膽酸鹽SGC和STC在Caco-2細(xì)胞跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響Fig. 1 Effect of EGCG on transport of SGC and STC across Caco-2 cells

如圖1所示，膽汁酸高濃度（2.50 mmol/L）組EGCG能夠顯著抑制SGC和STC從Trans-well小室AP側(cè)進(jìn)入BL側(cè)（P＜0.05）；同時(shí)，在4 h和8 h時(shí)，EGCG對(duì)SGC的抑制水平顯著強(qiáng)于對(duì)STC的抑制（P＜0.05）；而膽汁酸低濃度（0.25 mmol/L）組EGCG對(duì)膽汁酸重吸收影響不顯著（P＞0.05）。

2.2 EGCG對(duì)膽固醇攝取的影響分析

圖 2 EGCG對(duì)膽固醇在Caco-2細(xì)胞（A）和BRL細(xì)胞（B）中內(nèi)流和外排的影響Fig. 2 Effect of EGCG on cholesterol inf l ux in Caco-2 cells (A) and cholesterol eff l ux from BRL cells (B)

由圖2A可見，在Caco-2細(xì)胞內(nèi)，與EGCG濃度為0 μmol/L組相比，EGCG濃度為40 μmol/L組細(xì)胞裂解液中熒光強(qiáng)度顯著降低（P＜0.05），說明EGCG能夠顯著抑制Caco-2細(xì)胞對(duì)膽固醇的攝取。由圖2B可見，BRL細(xì)胞內(nèi)，與EGCG濃度為0 μmol/L組相比，EGCG濃度為40 μmol/L組熒光強(qiáng)度顯著降低（P＜0.05），說明EGCG能夠顯著抑制BRL細(xì)胞對(duì)膽固醇的攝取。

2.3 EGCG對(duì)高脂模型大鼠的影響分析

2.3.1 EGCG對(duì)大鼠體質(zhì)量和肝臟指數(shù)的影響分析

表 2 大鼠體質(zhì)量、肝質(zhì)量和肝臟指數(shù)Table 2 Mean body mass, liver mass and liver index in rats

由表2可見，第3、6周高脂模型組大鼠體質(zhì)量顯著高于正常組，而EGCG組體質(zhì)量顯著下降。肝質(zhì)量測(cè)定結(jié)果顯示，模型組大鼠肝質(zhì)量高于正常組，EGCG組大鼠肝質(zhì)量有所下降，但各組間差異不顯著。模型組大鼠肝臟指數(shù)高于正常組，但差異不顯著。

2.3.2 EGCG對(duì)大鼠血脂水平影響分析

與高脂模型組相比，第6周EGCG組大鼠血清中TC、LDL-C、TG濃度顯著降低，HDL-C濃度顯著升高（P＜0.05），結(jié)果見表3、4。

表 3 大鼠血清中TC和TG濃度Table 3 Serum levels of TC and TG in rats

表 4 大鼠血清中LDL-C和HDL-C濃度Table 4 Serum levels of LDL-C and HDL-C in rats

2.3.3 大鼠肝臟細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化觀察結(jié)果

HE染色結(jié)果顯示，正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞呈現(xiàn)條索狀排列，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰（圖3A）。高脂模型組肝細(xì)胞內(nèi)有脂質(zhì)染色，肝小葉輪廓模糊，肝細(xì)胞排列紊亂（圖3B）。EGCG組肝小葉與高脂模型組相比結(jié)構(gòu)相對(duì)完整，肝細(xì)胞清晰，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)減少（圖3C）。

圖 3 不同處理組肝臟HE染色Fig. 3 Hematoxylin and eosin staining of liver tissues from different groups

2.3.4 EGCG對(duì)大鼠膽固醇代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響分析

圖 4 EGCG對(duì)膽固醇代謝基因HMGCR（A）、SREBP-2（B）、LXR-α（C）和CYP7A1（D）mRNA表達(dá)水平的影響Fig. 4 Effect of EGCG on mRNA expression levels of HMGCR (A),SREBP-2 (B), LXR-α (C) and CYP7A1 (D)

由圖4可知，與正常組相比，高脂模型組HMGCR表達(dá)明顯升高，SREBP-2、LXR-α及CYP7A1表達(dá)則顯著下降（P＜0.05）；與高脂模型組相比，EGCG組HMGCR表達(dá)顯著降低，SREBP-2、LXR-α及CYP7A1表達(dá)顯著升高（P＜0.05）。如圖5所示，不同處理組大鼠上述4 種基因的蛋白水平變化趨勢(shì)與qPCR結(jié)果相同。

圖 5 EGCG對(duì)膽固醇代謝基因HMGCR（A）、CYP7A1（B）、LXR-α（C）和SREBP-2（D）蛋白表達(dá)的影響Fig. 5 Effect of EGCG on protein expression levels of HMGCR (A),CYP7A1 (B), LXR-α (C) receptor and SREBP-2 (D)

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)利用Caco-2細(xì)胞模型研究了EGCG對(duì)SGC和STC跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，通過體外細(xì)胞模型探索了EGCG調(diào)血脂的可能機(jī)制。根據(jù)膽汁酸的腸肝循環(huán)機(jī)制，膽汁酸在十二指腸分泌后，在空腸中通過被動(dòng)擴(kuò)散重吸收，在回腸通過載體蛋白進(jìn)行主動(dòng)重吸收，通過肝門靜脈重新回到肝臟中。如果此環(huán)節(jié)受阻，將會(huì)反饋性加速膽汁酸分泌，進(jìn)而增強(qiáng)肝臟中膽固醇向膽汁酸的轉(zhuǎn)變，起到降膽固醇的作用[19]。本研究結(jié)果顯示EGCG能夠顯著抑制高濃度（2.50 mmol/L）膽酸鹽跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，而其對(duì)低濃度（0.25 mmol/L）膽酸鹽跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)抑制效果不顯著，說明膽汁酸在Caco-2細(xì)胞中既有被動(dòng)吸收又有主動(dòng)吸收。膽酸鹽濃度較高時(shí)，膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白被飽和，EGCG主要通過與膽汁酸的氫鍵結(jié)合影響其被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過程；膽酸鹽濃度較低時(shí)，膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白未飽和，EGCG與膽汁酸氫鍵結(jié)合對(duì)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)影響較弱，此時(shí)膽汁酸以主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主。這或許可以解釋高脂飲食條件下EGCG能夠顯著抑制膽汁酸重吸收，而正常或低脂飲食條件下EGCG對(duì)血脂影響并不顯著的原因。

NBD-膽固醇在Caco-2細(xì)胞內(nèi)攝取和BRL細(xì)胞中外排結(jié)果顯示，EGCG顯著抑制了Caco-2細(xì)胞對(duì)NBD-膽固醇的攝取，使得細(xì)胞裂解液中熒光強(qiáng)度顯著降低。BRL細(xì)胞對(duì)膽固醇既有攝取功能又有外排作用，BRL細(xì)胞表面LDL受體（LDL receptor，LDL-R）對(duì)LDL-C內(nèi)流攝取，從而加速總膽固醇含量的降低。本研究結(jié)果表明EGCG組肝細(xì)胞裂解液中熒光強(qiáng)度明顯下降，可能是肝細(xì)胞對(duì)游離膽固醇（NBD-膽固醇）攝取能力減弱或者外排能力增強(qiáng)造成的。

本研究對(duì)大鼠肝臟與膽固醇代謝相關(guān)的基因表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示EGCG對(duì)肝臟中SREBP-2和CYP7A1以及核受體LXR-α基因表達(dá)具有顯著增強(qiáng)作用，對(duì)HMGCR表達(dá)具有顯著抑制功能。HMGCR是內(nèi)源性膽固醇生成限速酶，HMGCR基因的表達(dá)降低可以抑制膽固醇合成；CYP7A1為膽固醇向膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)的限速酶，而核受體LXR-α對(duì)于調(diào)控膽固醇ATP結(jié)合盒（ATP-binding cassette，ABC）轉(zhuǎn)運(yùn)子（ABCA1、ABCG5和ABCG8）具有顯著作用[20-22]，這與BRL細(xì)胞對(duì)NBD-膽固醇外排能力增強(qiáng)的結(jié)果一致。血清LDL-C含量受肝細(xì)胞表面LDL-R調(diào)控，而LDL-R又受SREBP-2調(diào)控，SREBP-2使LDL-R表達(dá)增多，因此SREBP-2表達(dá)的提高能夠引起肝細(xì)胞對(duì)膽固醇攝取的增加，降低體內(nèi)LDL-C含量，從而發(fā)揮降血脂活性[23]。

有文獻(xiàn)報(bào)道綠茶多酚和高脂飲食對(duì)機(jī)體腸道菌群均具有顯著影響[6-7,24-25]，機(jī)體腸道菌群的改變能夠影響膽汁酸代謝過程，而體內(nèi)膽汁酸含量的改變反過來又能夠影響腸道菌群結(jié)構(gòu)，因此，腸道菌群與機(jī)體脂質(zhì)代謝緊密相關(guān)[26]。本研究雖然對(duì)EGCG調(diào)控膽固醇代謝方面進(jìn)行了探索，但尚有一些問題難以解釋，比如EGCG對(duì)小腸上皮細(xì)胞中膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體影響如何，以及EGCG通過何種途徑干預(yù)膽汁酸跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，尚需進(jìn)一步研究。此外，由于EGCG體內(nèi)生物利用度較低和易于代謝[27-29]，其對(duì)大鼠肝臟中膽固醇代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響是通過何種途徑或機(jī)制發(fā)揮作用，以及膽汁酸和腸道菌群在降血脂過程中是否與EGCG發(fā)揮協(xié)同作用，尚需更加深入的探索。