（江門市藥品檢驗所，廣東 江門 529030）

曲安奈德新霉素貼膏是本地制藥企業(yè)生產(chǎn)的外用橡膠膏劑，其組分為醋酸曲安奈德、麝香草酚、硫酸新霉素等。主要用于局限性神經(jīng)性皮炎、慢性濕疹，也可用于小面積的銀屑病。近年還發(fā)現(xiàn)它可有效地治療結(jié)節(jié)性癢疹[1]、結(jié)節(jié)性疥瘡[2-3]、神經(jīng)性皮炎[4-5]、蕁麻疹[6]等，臨床應(yīng)用廣泛?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)》WS-10001-(HD-1079)-2002-2006[7]，目前該標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定部分。為提高藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本文建立了同時測定醋酸曲安奈德和麝香草酚含量的高效液相色譜法（HPLC），該方法簡便、快速，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制的有效方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-20AT高效液相色譜儀，包括LC-20AT高壓泵，SPD-M20A二極管陣列檢測器，SIL-20A自動進(jìn)樣器（日本島津）；XS205DU電子分析天平（Mettler Toledo）。

1.2 試藥

麝香草酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，含量99.9 %，批號100508-201603）；醋酸曲安奈德對照品（中國食品藥品檢定研究院，含量99.1 %，批號100125-201406）；曲安奈德新霉素貼膏（批號：160715，170107，170514）；甲醇（HPLC級，Honeywell，批號：R6AG1H），水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-SP色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫：30℃，流動相：甲醇-水（57:43），流速：1.0 ml/min，檢測波長：240 nm，進(jìn)樣量：20 μl。理論板數(shù)以麝香草酚與醋酸曲安奈德峰計均不低5000，兩峰間的分離度大于5.0。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取醋酸曲安奈德對照品10 mg，置入25 ml量瓶，用85 %乙醇溶解并稀釋至刻度，另精密稱取麝香草酚對照品10 mg，置入50 ml量瓶，加85 %乙醇20 ml使溶解，再吸取先前制備的醋酸曲安奈德對照品溶液3 ml，混入50 ml量瓶中，用85 %乙醇稀釋至刻度，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液6 ml，置入20 ml量瓶，用85 %乙醇稀釋至刻度，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品2片（48 cm2），除去蓋襯，剪成小塊，置入具塞錐形瓶，加入石油醚（60～90 ℃）25 ml，振搖，使膏體溶解。溶液轉(zhuǎn)移至燒杯中，容器及殘渣用石油醚（60～90 ℃）洗滌3次（15 ml，10 ml，10 ml），洗滌液并入上述溶液中，再用無水乙醇洗滌容器及殘渣3次（20 ml，15 ml，10 ml），將乙醇洗滌液邊攪拌邊緩緩加入上述合并的石油醚液中，靜置30 min使沉淀完全，濾過。濾液置入分液漏斗，容器及沉淀用石油醚（60～90 ℃）-無水乙醇（4:3）混合液洗滌3次（10 ml，5 ml，5 ml），洗液并入分液漏斗，加水10 ml，振搖，靜置至分層完全，分取乙醇液置入100 ml量瓶，石油醚層用85 %乙醇液洗滌3次（15 ml，10 ml，5 ml），合并乙醇液于上述100 ml量瓶中，用85 %乙醇稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液取不含麝香草酚和醋酸曲安奈德的空白制劑樣品，按2.2.2項方法制備溶液，作為陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試

驗分別取陰性對照溶液、對照品溶液、供試品溶液，按2.1項色譜條件進(jìn)樣測定，考察系統(tǒng)適用性。HPLC色譜圖見圖1，由圖1可見，輔料及其他組分對測定組分無干擾。

圖1 陰性對照溶液、對照品溶液和供試品溶液的HPLC圖譜

2.4 線性試驗

精密量取對照品儲備液4.0，5.0，6.0，7.0，8.0 ml，分別置入20 ml量瓶，用85 %乙醇液稀釋至刻度，搖勻。按2.1項色譜條件分別進(jìn)樣，測定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），分別以麝香草酚和醋酸曲安奈德的濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)（X），計算回歸方程。結(jié)果表明：麝香草酚濃度與峰面積在0.0454～0.0907 mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=2×106X+98.4，r=0.9995；醋酸曲安奈德在0.0050～0.0101 mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=3×107X+17 286，r=0.9995。

2.5 精密度試驗

取同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，麝香草酚、醋酸曲安奈德峰面積的RSD分別為0.67 %，0.47 %，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，于室溫下放置，分別在0，2，4，6，8，10，12 h測定峰面積，麝香草酚、醋酸曲安奈德峰面積的RSD分別為0.61 %，0.53 %。表明供試品溶液在室溫條件下，12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗

選擇同一批號的曲安奈德新霉素貼膏，按2.2.2項方法平行制備6份供試品溶液，按2.1項色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果：麝香草酚含量的RSD為0.89 %（n=6）；醋酸曲安奈德含量的RSD為0.25 %（n=6）。表明該方法重復(fù)性良好。

表1 麝香草酚的加樣回收率試驗（n=6）

表2 醋酸曲安奈德的加樣回收率試驗（n=6）

2.8 回收率試驗

取曲安奈德新霉素貼膏（批號：160715）1片（24 cm2），共6份，分別精密加入麝香草酚、醋酸曲安奈德混合對照溶液（含麝香草酚3.162 mg/ml，醋酸曲安奈德0.442 mg/ml）1 ml，置入具塞錐形瓶，按2.2.2項方法制備回收率試驗用供試品，測定峰面積，計算得麝香草酚的平均回收率為101.11 %，RSD=0.42 %（n=6）；醋酸曲安奈德的平均回收率為100.08 %，RSD=0.47 %（n=6）。表明該方法的準(zhǔn)確度較好，符合定量測定要求。結(jié)果見表1、表2。

2.9 樣品含量測定

按2.2.2項方法測定3個批次的供試品，按外標(biāo)法計算各組分的含量，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 流動相的選擇

本實驗分別考察了以不同比例的甲醇-水不同作為流動相的色譜圖，結(jié)果表明，甲醇比例大于70 %，供試品溶液中輔料峰與麝香草酚峰、醋酸曲安奈德峰的分離度較差；甲醇比例小于50 %，醋酸曲安奈德的保留時間太長，且峰形不理想；選擇甲醇-水比例為57:43，色譜峰之間的分離度均較好，且理論板數(shù)較高。

3.2 檢測波長的選擇

本實驗對麝香草酚和醋酸曲安奈德進(jìn)行紫外光譜掃描，發(fā)現(xiàn)麝香草酚、醋酸曲安奈德分別在275 nm、240 nm處有較大吸收，但處方中麝香草酚與醋酸曲安奈德的投藥量之比為8:1，當(dāng)兩成分濃度比為8:1時，在240 nm波長處兩峰高接近，故選擇240 nm作為最佳檢測波長。

3.3 提取溶劑的選擇

供試品溶液的制備過程中，用石油醚（60～90 ℃）溶解膏體，再用乙醇沉淀后，所得混合溶液的提取是影響含量的關(guān)鍵步驟。曾嘗試了不同比例的乙醇水溶液進(jìn)行提取，發(fā)現(xiàn)85 %乙醇水溶液既能有效地將目標(biāo)成份從石油醚中提取出來，又能和石油醚達(dá)到很好的分層效果，所以在設(shè)計實驗時，盡量使乙醇水溶液中乙醇比例達(dá)85 %。為與供試品溶液保持一致，對照品溶液也采用85 %乙醇水溶液制備。

方法學(xué)考察表明本文建立的方法具有良好的線性、精密度、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性，可同時對曲安奈德新霉素貼膏中麝香草酚和醋酸曲安奈德的含量進(jìn)行有效、簡便、準(zhǔn)確的定量，便于企業(yè)和監(jiān)管部門對產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行有效評價與監(jiān)控。