李 龍,于軍強(qiáng),于秀麗,顏顯輝,張麗娜,解春文*
(1. 山東達(dá)因海洋生物制藥有限公司,山東 威海 264300;2. 榮成出入境檢驗(yàn)檢疫局,山東 威海 264300)
重金屬雜質(zhì)可誘導(dǎo)藥物降解,并有潛在毒性,因此重金屬雜質(zhì)控制一直是藥物研發(fā)過(guò)程中的重要問(wèn)題。鑒于上述原因ICH(國(guó)際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì))指導(dǎo)委員會(huì)于2009年批準(zhǔn)Q3D元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則,并規(guī)定應(yīng)在不晚于2017年12月ICH主要成員國(guó)在審評(píng)與申報(bào)中提供相應(yīng)的元素雜質(zhì)研究資料。我國(guó)作為新加入的ICH成員國(guó),也應(yīng)在2022年前實(shí)行上述指導(dǎo)原則。一般藥品中元素雜質(zhì)的潛在來(lái)源包括:合成過(guò)程中人為加入;或以雜質(zhì)形式存在,如與生產(chǎn)設(shè)備相互作用或存在于藥品組分中,且最終能被檢測(cè)到[1-2]。
地氯雷他定是由先靈葆雅研制的三環(huán)長(zhǎng)效型的第三代組胺拮抗劑,選擇性作用于H1接受體。本品在2001年經(jīng)歐洲藥典管理局批準(zhǔn)上市。本品為氯雷他定的活性代謝物,可通過(guò)選擇性地拮抗外周H1受體,快速緩解季節(jié)性過(guò)敏性鼻炎的相關(guān)癥狀;還用于緩解慢性特發(fā)性蕁麻疹相關(guān)癥狀如瘙癢,并可減少蕁麻疹的數(shù)量及大小[3-6]。
本實(shí)驗(yàn)按照ICH Q3D元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則要求,建立了使用ICP-MS(電感耦合等離子體質(zhì)譜)測(cè)定地氯雷他定中多元素雜質(zhì)的方法,并探討了對(duì)各元素雜質(zhì)的控制方法。
7700型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(安捷倫);分析天平(梅特勒);MARS 20微波消解儀(CEM公司)。
地氯雷他定原料(批號(hào):170801、170802、170803)(山東達(dá)因海洋生物制藥股份有限公司);多元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(鋁,砷,硼,鋇,鈹,鉍,鎘,鈷,鉻,銅,鐵,鈣,鋰,鎂,錳,鎳,鉛,銻,錫,鍶,鈦,鉈,釩,鋅)(唯一標(biāo)識(shí):175056,國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心);汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(唯一標(biāo)識(shí):158022-1,國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心);硝酸為色譜級(jí)別;水為去離子水。
儀器參數(shù)見(jiàn)表1。
表1 金屬離子含量測(cè)定ICP-MS實(shí)驗(yàn)參數(shù)
2.2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備溶液 精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液與汞元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,加入2 %鹽酸水溶液溶解并稀釋制成濃度為1 μg/ml混合溶液,作為元素雜質(zhì)混合對(duì)照品母液。
2.2.2 對(duì)照品溶液 分別精密量取對(duì)照品母液10,100,200,500,1000 μl,置入100 ml量瓶,加入2 %鹽酸水溶液稀釋至刻度即為對(duì)照品溶液。
2.2.3 鉛元素對(duì)照品溶液 分別精密量取對(duì)照品母液100,400,600,1200,2500 μl,置入50 ml量瓶,加入2 %鹽酸水溶液稀釋至刻度即為鉛元素對(duì)照品溶液。
2.2.4 鉛元素供試品溶液制備 精密稱取樣品0.5 g,置消解罐中,加入濃硝酸8 ml,進(jìn)行消解,趕酸至近干,加2 %鹽酸水溶液稀釋制成50 mg/ml溶液,即為鉛元素供試品溶液。
2.2.5 供試品溶液 精密量取鉛元素供試品溶液1 ml,置10 ml量瓶,加2 %鹽酸搖勻并稀釋至刻度,即得。
參考美國(guó)藥典<233>[7]驗(yàn)證地氯雷他定元素雜質(zhì)測(cè)定方法,驗(yàn)證結(jié)果如下。
2.3.1 線性與定量限 按“2.1”項(xiàng)下方法制備各濃度對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液,以濃度為橫坐標(biāo),以校正數(shù)值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R2均大于0.99,鈀、汞、鎘、砷、鈷、釩和鎳在0~10 ppb范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,鉛在0~50 ppb范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。取空白溶劑平行測(cè)定11次,計(jì)算定量限,均低于各元素相應(yīng)限度。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 線性實(shí)驗(yàn)與定量限結(jié)果
2.3.2 回收率 取待測(cè)樣品,加入濃度為50 μg/ml鉛元素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25,0.5,0.75 ml,置入100 ml量瓶,加入2 %鹽酸溶液定容至刻度,搖勻,作為鉛元素供試品溶液;加入濃度為5 μg/ml多元素標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.25,0.5,12 ml,置入100 ml量瓶,加入2 %鹽酸溶液定容至刻度,搖勻,作為多元素供試品溶液。每個(gè)濃度各制備3份,按“2.1”項(xiàng)下方法處理,分別進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算各元素回收率。結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果
2.3.3 精密度 取待測(cè)樣品,按“2.1”項(xiàng)下方法處理,平行制備6份,分別進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算各元素的精密度。結(jié)果見(jiàn)表4。
表4 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果
取3批廠家自制樣品,按“2.1”項(xiàng)下方法處理,分別進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算待測(cè)樣品中各元素的含量。結(jié)果見(jiàn)表5。
表5 待測(cè)品測(cè)定結(jié)果
本品作為有機(jī)物,如未經(jīng)處理進(jìn)樣,不僅會(huì)導(dǎo)致有機(jī)成分離子干擾元素雜質(zhì)分子離子峰檢出,嚴(yán)重會(huì)導(dǎo)致噴霧裝置出口處堵塞,故對(duì)樣品進(jìn)行消解,以保證儀器正常運(yùn)行,測(cè)定結(jié)果可靠。樣品的消解方法主要包括敞口容器消解法、密閉容器消解法和微波消解法。微波消解法具有消耗溶劑少,消解速度快,且可有效減少易揮發(fā)金屬的損失[8-9],故選擇微波消解法對(duì)樣品進(jìn)行消解。
ICP-MS推薦測(cè)試濃度為1~10 ppb[10-11],但是鉛元素在此范圍內(nèi)并線性較差,在提高供試品濃度后,鉛元素線性關(guān)系得到改善。由于高濃度汞元素在ICP-MS中具有記憶效應(yīng)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響較大[12-13]且其他元素在高濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系并不理想,因此選擇使用低濃度測(cè)定其他元素含量,最后確定分別使用兩種濃度測(cè)定樣品中鉛與其他元素含量。
按照ICH Q3D元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則,對(duì)于常用的口服固體制劑需要對(duì)1類元素雜質(zhì)鉛、鎘、砷;2A類元素雜質(zhì)鈷、釩、鎳進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。同時(shí)地氯雷他定在合成過(guò)程中使用鈀碳進(jìn)行催化加氫[14-16],而鈀元素屬于2B類元素雜質(zhì),按照ICH Q3D指導(dǎo)原則,應(yīng)定量檢測(cè),并制定合理限度,因此在元素雜質(zhì)研究中對(duì)鉛、鎘、砷、鈷、釩、鎳、鈀進(jìn)行了研究,并建立了合理的控制方法。