李 龍，于軍強(qiáng)，于秀麗，顏顯輝，張麗娜，解春文*

（1. 山東達(dá)因海洋生物制藥有限公司，山東 威海 264300；2. 榮成出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東 威海 264300）

重金屬雜質(zhì)可誘導(dǎo)藥物降解，并有潛在毒性，因此重金屬雜質(zhì)控制一直是藥物研發(fā)過程中的重要問題。鑒于上述原因ICH（國(guó)際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)）指導(dǎo)委員會(huì)于2009年批準(zhǔn)Q3D元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則，并規(guī)定應(yīng)在不晚于2017年12月ICH主要成員國(guó)在審評(píng)與申報(bào)中提供相應(yīng)的元素雜質(zhì)研究資料。我國(guó)作為新加入的ICH成員國(guó)，也應(yīng)在2022年前實(shí)行上述指導(dǎo)原則。一般藥品中元素雜質(zhì)的潛在來源包括：合成過程中人為加入；或以雜質(zhì)形式存在，如與生產(chǎn)設(shè)備相互作用或存在于藥品組分中，且最終能被檢測(cè)到[1-2]。

地氯雷他定是由先靈葆雅研制的三環(huán)長(zhǎng)效型的第三代組胺拮抗劑，選擇性作用于H1接受體。本品在2001年經(jīng)歐洲藥典管理局批準(zhǔn)上市。本品為氯雷他定的活性代謝物，可通過選擇性地拮抗外周H1受體，快速緩解季節(jié)性過敏性鼻炎的相關(guān)癥狀；還用于緩解慢性特發(fā)性蕁麻疹相關(guān)癥狀如瘙癢，并可減少蕁麻疹的數(shù)量及大小[3-6]。

本實(shí)驗(yàn)按照ICH Q3D元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則要求，建立了使用ICP-MS（電感耦合等離子體質(zhì)譜）測(cè)定地氯雷他定中多元素雜質(zhì)的方法，并探討了對(duì)各元素雜質(zhì)的控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

7700型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（安捷倫）；分析天平（梅特勒）；MARS 20微波消解儀（CEM公司）。

1.2 試藥

地氯雷他定原料（批號(hào)：170801、170802、170803）（山東達(dá)因海洋生物制藥股份有限公司）；多元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（鋁，砷，硼，鋇，鈹，鉍，鎘，鈷，鉻，銅，鐵，鈣，鋰，鎂，錳，鎳，鉛，銻，錫，鍶，鈦，鉈，釩，鋅）（唯一標(biāo)識(shí)：175056，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心）；汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（唯一標(biāo)識(shí)：158022-1，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心）；硝酸為色譜級(jí)別；水為去離子水。

2 法與結(jié)果

2.1 儀器參數(shù)與樣品測(cè)定

儀器參數(shù)見表1。

表1 金屬離子含量測(cè)定ICP-MS實(shí)驗(yàn)參數(shù)

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備溶液 精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液與汞元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加入2 %鹽酸水溶液溶解并稀釋制成濃度為1 μg/ml混合溶液，作為元素雜質(zhì)混合對(duì)照品母液。

2.2.2 對(duì)照品溶液 分別精密量取對(duì)照品母液10，100，200，500，1000 μl，置入100 ml量瓶，加入2 %鹽酸水溶液稀釋至刻度即為對(duì)照品溶液。

2.2.3 鉛元素對(duì)照品溶液 分別精密量取對(duì)照品母液100，400，600，1200，2500 μl，置入50 ml量瓶，加入2 %鹽酸水溶液稀釋至刻度即為鉛元素對(duì)照品溶液。

2.2.4 鉛元素供試品溶液制備 精密稱取樣品0.5 g，置消解罐中，加入濃硝酸8 ml，進(jìn)行消解，趕酸至近干，加2 %鹽酸水溶液稀釋制成50 mg/ml溶液，即為鉛元素供試品溶液。

2.2.5 供試品溶液 精密量取鉛元素供試品溶液1 ml，置10 ml量瓶，加2 %鹽酸搖勻并稀釋至刻度，即得。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

參考美國(guó)藥典<233＞[7]驗(yàn)證地氯雷他定元素雜質(zhì)測(cè)定方法，驗(yàn)證結(jié)果如下。

2.3.1 線性與定量限 按“2.1”項(xiàng)下方法制備各濃度對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液，以濃度為橫坐標(biāo)，以校正數(shù)值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R2均大于0.99，鈀、汞、鎘、砷、鈷、釩和鎳在0～10 ppb范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，鉛在0～50 ppb范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。取空白溶劑平行測(cè)定11次，計(jì)算定量限，均低于各元素相應(yīng)限度。結(jié)果見表2。

表2 線性實(shí)驗(yàn)與定量限結(jié)果

2.3.2 回收率 取待測(cè)樣品，加入濃度為50 μg/ml鉛元素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25，0.5，0.75 ml，置入100 ml量瓶，加入2 %鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，作為鉛元素供試品溶液；加入濃度為5 μg/ml多元素標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.25，0.5，12 ml，置入100 ml量瓶，加入2 %鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，作為多元素供試品溶液。每個(gè)濃度各制備3份，按“2.1”項(xiàng)下方法處理，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算各元素回收率。結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3.3 精密度 取待測(cè)樣品，按“2.1”項(xiàng)下方法處理，平行制備6份，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算各元素的精密度。結(jié)果見表4。

表4 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 測(cè)定結(jié)果

取3批廠家自制樣品，按“2.1”項(xiàng)下方法處理，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算待測(cè)樣品中各元素的含量。結(jié)果見表5。

表5 待測(cè)品測(cè)定結(jié)果

3 分析與討論

3.1 樣品處理方法的選擇

本品作為有機(jī)物，如未經(jīng)處理進(jìn)樣，不僅會(huì)導(dǎo)致有機(jī)成分離子干擾元素雜質(zhì)分子離子峰檢出，嚴(yán)重會(huì)導(dǎo)致噴霧裝置出口處堵塞，故對(duì)樣品進(jìn)行消解，以保證儀器正常運(yùn)行，測(cè)定結(jié)果可靠。樣品的消解方法主要包括敞口容器消解法、密閉容器消解法和微波消解法。微波消解法具有消耗溶劑少，消解速度快，且可有效減少易揮發(fā)金屬的損失[8-9]，故選擇微波消解法對(duì)樣品進(jìn)行消解。

3.2 供試品濃度的確定

ICP-MS推薦測(cè)試濃度為1～10 ppb[10-11]，但是鉛元素在此范圍內(nèi)并線性較差，在提高供試品濃度后，鉛元素線性關(guān)系得到改善。由于高濃度汞元素在ICP-MS中具有記憶效應(yīng)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響較大[12-13]且其他元素在高濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系并不理想，因此選擇使用低濃度測(cè)定其他元素含量，最后確定分別使用兩種濃度測(cè)定樣品中鉛與其他元素含量。

3.3 元素雜質(zhì)的確定

按照ICH Q3D元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則，對(duì)于常用的口服固體制劑需要對(duì)1類元素雜質(zhì)鉛、鎘、砷；2A類元素雜質(zhì)鈷、釩、鎳進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。同時(shí)地氯雷他定在合成過程中使用鈀碳進(jìn)行催化加氫[14-16]，而鈀元素屬于2B類元素雜質(zhì)，按照ICH Q3D指導(dǎo)原則，應(yīng)定量檢測(cè)，并制定合理限度，因此在元素雜質(zhì)研究中對(duì)鉛、鎘、砷、鈷、釩、鎳、鈀進(jìn)行了研究，并建立了合理的控制方法。