孫丹丹,王剛,和煥香,郭慶梅

(山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355)

板藍(lán)根為十字花科植物菘藍(lán)(IsatisindigoticaFort.)的干燥根，性寒味苦，歸心、胃經(jīng),具有清熱解毒，涼血利咽的作用,臨床用于瘟疫時(shí)毒、發(fā)熱咽痛、溫毒發(fā)斑、痄腮、爛喉丹痧、大頭瘟疫、丹毒及癰腫等癥[1]?，F(xiàn)代研究表明，板藍(lán)根的主要化學(xué)成分有(R，S)告依春、靛苷、香草酸、大黃素、香草醛、棕櫚酸、香草乙酮等[2-8]。板藍(lán)根的臨床應(yīng)用比較廣泛，具有抗癌、抗病毒、治療呼吸道疾病等藥理作用[9-12]。板藍(lán)根主要分布在河北、安徽、江蘇、河南等省，其他各省也有少量分布，河北為道地產(chǎn)區(qū)[13]。藥材市場(chǎng)各地板藍(lán)根藥材流通頻繁，加之臨床應(yīng)用廣泛，尤其需要對(duì)不同產(chǎn)地板藍(lán)根的質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)。因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)內(nèi)蒙古、陜西、甘肅、河北、河南、山東、黑龍江7個(gè)產(chǎn)地的板藍(lán)根進(jìn)行質(zhì)量比較。

1 樣品、儀器與試劑

1.1 樣品

從內(nèi)蒙古、陜西、甘肅、河北、河南、山東、黑龍江7個(gè)不同地區(qū)收集板藍(lán)根藥材各1 000 g，原藥材經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)郭慶梅教授鑒定，確認(rèn)為十字花科菘藍(lán)(IsatisindigoticaFort.)。見表1。

表1 板藍(lán)根的藥材來(lái)源Table 1 The source of Isatidis Radix

1.2 儀器

日立L-2000型高效液相色譜儀(日本日立)；色譜柱Agilent C18柱(250 mm×46 mm，5 μm)； FA2004N型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；SX2-4-10箱式電阻爐(山東省龍口市電爐總廠)；HH-S4雙孔四列電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永鑫儀器廠)；101-(1)A數(shù)顯式電熱恒溫干燥箱(上海陽(yáng)光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；8001型恒溫振蕩器(國(guó)華儀器)；KQ-250E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.3 試劑

蒸餾水；40%乙醇；甲醇(色譜純，天津科密歐公司)；純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán))；(R, S)-告依春對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111753-201706)；1%硝酸銀試液，三氯化鐵，無(wú)水乙醇，甲醇，稀鹽酸(均為分析純)。

1.4 樣品制備

分別取板藍(lán)根藥材50 g，粉碎，過(guò)四號(hào)篩，備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 水分、灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物測(cè)定方法

水分、灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物按照2015年版《中國(guó)藥典》四部[14]0832第二法烘干法、2302總灰分及酸不溶性灰分測(cè)定法、2201醇溶性浸出物測(cè)定法中熱浸法進(jìn)行測(cè)定。

2.2 (R, S)-告依春的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取(R, S)-告依春的對(duì)照品10.1 mg，置于250 mL的容量瓶里，配置標(biāo)準(zhǔn)溶液，(R, S)-告依春的濃度為40.4 μg/mL。配制好的對(duì)照品溶液放置于4 ℃下保存，備用[1]。

2.2.3 供試品溶液的制備

稱取板藍(lán)根粉末約2.0 g，精密稱定，置200 mL圓底燒瓶中，精密加入蒸餾水100 mL，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用蒸餾水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，即得。配制好的供試品溶液放置于4 ℃下保存，備用[1]。

2.2.4 線性關(guān)系考察

圖1 (R, S)-告依春標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 1 (R, S)-goitrin standard curve

分別精密吸取質(zhì)量濃度為40.4 μg/mL的對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、10 mL分別置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，得到質(zhì)量濃度分別為4.04、8.08、12.12、20.2、40.4 μg/mL的對(duì)照品溶液，按2.2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定峰面積，平行測(cè)定3次。以峰面積為縱坐標(biāo)(y)，濃度為橫坐標(biāo)(x)，進(jìn)行回歸分析，回歸方程為y= 109 207.499 6x+ 725 92，r=0.999，(R, S)-告依春在4.04～40.4 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,見圖1。

2.2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取質(zhì)量濃度為40.4 μg/mL的對(duì)照品溶液，按2.2.1項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果(R, S)-告依春峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.39%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一份供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)的色譜條件分別于0、2、4、8、12、24 h測(cè)定，結(jié)果(R, S)-告依春的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.35%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品6份，按2.2.2項(xiàng)下制備，按2.2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，測(cè)定(R, S)-告依春的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.74%，表明重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已測(cè)知含量的樣品6份，按2.2.2項(xiàng)下制備供試品，分別加入一定量的(R, S)-告依春對(duì)照品，測(cè)定峰面積，平均回收率為100.83%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.46%。

2.2.9 供試品含量測(cè)定

精密吸取各供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下的色譜條件，注入液相色譜儀，平行測(cè)定3次，計(jì)算各樣品中(R, S)-告依春的含量。結(jié)果見圖2。

圖2 (R, S)-告依春的HPLC圖Fig. 2 HPLC chart of (R, S)-goitrin

2.3 結(jié)果與分析

不同產(chǎn)地的板藍(lán)根水分、灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物及(R, S)-告依春含量均符合2015年版《中國(guó)藥典》的規(guī)定。陜西產(chǎn)地的板藍(lán)根水分含量最低，河北產(chǎn)地次之，其他產(chǎn)地相對(duì)較高；山東產(chǎn)地的板藍(lán)根灰分含量最低，內(nèi)蒙古產(chǎn)地的次之，除陜西產(chǎn)地的板藍(lán)根以外，其他產(chǎn)地的灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)均在5%以下；山東產(chǎn)地的板藍(lán)根酸不溶性灰分含量最低，河南產(chǎn)地的次之，其他產(chǎn)地相對(duì)較高；陜西產(chǎn)地板藍(lán)根的浸出物含量最高，甘肅產(chǎn)地次之，其他產(chǎn)地相對(duì)較低；7個(gè)產(chǎn)地的板藍(lán)根藥材的(R, S)-告依春含量在0.444 ～1.042 mg/g之間，河南產(chǎn)地中的含量最高，甘肅產(chǎn)地的次之，河北產(chǎn)地的最低。結(jié)果見表2。

表2 不同產(chǎn)地板藍(lán)根藥材含量測(cè)定結(jié)果(n≥3)Table 2 Content determination results of Isatidis Radix from different producing areas (n≥3)

3 結(jié)論

內(nèi)蒙古、陜西、甘肅等7個(gè)產(chǎn)地板藍(lán)根的水分、灰分、浸出物和(R, S)-告依春含量都符合2015年版《中國(guó)藥典》的標(biāo)準(zhǔn)，但由于各地區(qū)氣候、土壤等條件的差異，使得藥材的含水量、灰分、浸出物等質(zhì)量指標(biāo)各有差異，該結(jié)果給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中藥材種植、加工、保存提供了可靠的指導(dǎo)意見，同時(shí)對(duì)臨床用藥起到了指導(dǎo)和規(guī)范的作用。