◆趙漢寧 吳 瑗 米 娜

(廣東醫(yī)科大學微生物免疫學教研室)

經(jīng)典免疫學抗原抗體反應實驗課開展多年，授課教師如能靈活采用不同授課方法，也有助于學生加深對深奧抽象的醫(yī)學免疫學理論內(nèi)容的理解掌握，并且能加強學生的實驗操作技能，提高動手能力，激發(fā)其學習興趣。

一、凝集反應

經(jīng)典免疫學凝集反應實驗中，玻片凝集是重點操作內(nèi)容之一，適合采用以教師提出問題引導，學生主導自行設計實驗路線并開展操作。教師如何設置問題并引導學生開展實驗呢？首先結(jié)合實際情況，每班進行分組操作，實驗材料按照分組發(fā)放到臺面上。帶課老師首先簡要講述凝集反應概念，然后進入主題，圍繞如何開展玻片凝集實驗設置如下幾個問題，通過玻片凝聚實驗如何鑒定出斜面培養(yǎng)基上的未知細菌？如何設計好實驗路線？應該設立哪些對照組？操作過程要注意哪些事項？觀察實驗結(jié)果除了凝集塊還注意哪些現(xiàn)象？對實驗結(jié)果如何分析？如何判斷結(jié)果中假陽性或假陰性？提示參考實驗指導教材相關(guān)內(nèi)容和結(jié)合桌面上分發(fā)的試劑材料等來設計實驗，實驗操作結(jié)束后每一組派代表發(fā)言并把實驗結(jié)果畫在黑板上，然后教師針對實驗進行總結(jié)，還可結(jié)合玻片凝集反應講述抗原抗體結(jié)合反應的特點和討論抗原抗體反應的影響因素。

教師作用主要是引導同學們提出問題，分析問題，解決問題，教師作用從臺前變成幕后，盡管角色改變，但工作量不減，教師課前必須做好充分準備，對實驗設計、操作注意事項、如何結(jié)果分析及討論做到心中有底。問題提出后，同學們就開始積極活動起來，首先是同學們組內(nèi)討論如何設計實驗，觀察桌面上有哪些器材試劑？學生查資料的查資料，思考的思考，觀察的觀察，討論的討論，都動起來，最后大家統(tǒng)一確定實驗方案，有些組存在疑問就跟老師及時溝通討論，對于同學們提出問題，教師耐心解答，試管凝集實驗也可通過類似教學方法開展。

二、沉淀反應

對流免疫電泳是沉淀反應的重點內(nèi)容之一，要求同學們動手操作。與凝集反應教學方法有所不同，沉淀反應授課方式教師先講解示范，然后同學們再進行實驗操作。教師上課首先開始講解沉淀反應概念，本次實驗主要是凝膠內(nèi)沉淀試驗，對流免疫電泳為重點操作實驗之一。以對流免疫電泳為例，時間安排上先講解這部分內(nèi)容。緊接著馬上進行此實驗操作，跑電泳期間再講解其他的沉淀反應，如單項擴散，火箭電泳，雙向擴散，免疫固定電泳等示教內(nèi)容。這里特別強調(diào)教師講解對流免疫電泳整個過程，包括從制板、打孔、加樣、搭橋、電泳，都要演示操作給同學們看，邊演示邊講解，關(guān)鍵地方特別強調(diào)。比如瓊脂制板中要趁熱吸取4ml瓊脂，倒板一氣呵成。等幾分鐘膠凝固才可打孔，如何才能打好孔？首先捏緊膠頭把空氣盡量排出來，放開膠頭吸瓊脂時動作要迅速。加樣時，可用毛細吸管或微量進樣器，保證樣品加到孔；加樣要加滿，但不能溢出，絕不能讓兩個孔之間樣品溢出串在一起，如何鑒定小孔加滿樣品呢？一方面可以從側(cè)面觀察，另一方面也可以用微量進樣器定量10微升樣品加入，當然前提是孔必須打好。搭橋濾紙片必須濕潤才能導電，可用鑷子夾濾紙片，要求盡量一次性就搭好橋。電泳前特別提醒陰陽極不能放錯，抗原放陰極端，可記諧音“原因”。特別強調(diào)注意用電安全，關(guān)電才能拿出玻片觀察結(jié)果。分析結(jié)果可采用提問題方式，例如出現(xiàn)和不出現(xiàn)沉淀線說明什么？沉淀線粗細又說明什么？為什么要求抗原放在陰極，抗體放在陽極？電壓、緩沖液PH值對結(jié)果有何影響？利用對流免疫電泳原理并結(jié)合操作過程來分析這些問題。特別強調(diào)，教師注意控制講解示范時間，要留給同學們足夠時間來操作實驗。

三、結(jié)果

四、討論

玻片凝集反應實驗操作更適合采用教師提出問題引導，同學們自行設計實驗路線并完成實驗操作的教學方法。首先，無菌操作等基本實驗技術(shù)同學們前面做微生物實驗時已經(jīng)學過；其次，免疫學抗原抗體特異結(jié)合理論課已經(jīng)講過；最后，玻片凝集實驗是本次實驗重點內(nèi)容之一，玻片凝集實驗操作內(nèi)容是用已知診斷血清檢測未知細菌，實驗設計不復雜，操作相對簡單，結(jié)果容易出現(xiàn)，操作時間不是太久，整個實驗過程從設計，操作，結(jié)果，討論分析是完整的。另外，同學們?nèi)绻鍪』蜻€想重復做，還有時間再做。對流免疫電泳實驗為什么特別強調(diào)教師詳細講解示范然后同學再操作呢？理由如下。

首先，沉淀反應實驗原理比較抽象復雜、操作要求更精細準確、對流免疫電泳注意事項比較多，相對繁瑣等；其次，對流免疫電泳過程需要40～60分鐘左右才能出現(xiàn)結(jié)果，如果實驗失敗沒有出現(xiàn)預想結(jié)果，這堂課就沒有時間重復做了；最后，理想的實驗結(jié)果不容易出現(xiàn)，稍不注意某個細節(jié)，實驗現(xiàn)象不像凝集反應結(jié)果那么明顯，所以操作之前，教師要強調(diào)注意事項，那些關(guān)鍵細節(jié)特別指出，一定要先邊示教邊講解。對流免疫電泳由老師先詳細地講解實驗內(nèi)容和實驗步驟，十分有利于學生短時間內(nèi)掌握實驗注意事項等基礎知識，規(guī)定時間內(nèi)能順利完成實驗。

五、結(jié)語

針對經(jīng)典免疫學抗原抗體反應實驗，教學方法要因地制宜，根據(jù)具體的實驗內(nèi)容以及操作要求來采用不同的教學方法，值得一提的是，經(jīng)典免疫學內(nèi)容略顯陳舊，課時偏少等，如何深化免疫學實驗教學改革，以使學生更好地掌握相關(guān)知識并培養(yǎng)綜合能力，值得進一步探討。