荊治華 祁文秀 吳惠文

[摘要] 目的 探討銀杏葉提取物（Extract of Ginkgo biloba，EGb）對2型糖尿?。╠iabetes mellitus，T2DM）伴阿爾茨海默病（Alzheimers disease， AD）樣大鼠習(xí)記憶能力和中樞膽堿能系統(tǒng)的影響。方法 健康雄性SD大鼠大鼠50只，隨機分為5組，分別為正常組，模型組，低劑量銀杏葉提取物組（1.5 g/kg），中劑量銀杏葉提取物組（3 g/kg），高劑量銀杏葉提取物組（6 g/kg）。通過持續(xù)高脂高糖飲食喂養(yǎng)及小劑量鏈脲佐菌素（STZ）制備T2DM伴AD大鼠模型模型。除正常組、模型組給予等容積的生理鹽水，其他治療組以相應(yīng)藥物治療。8周后，用Y型迷宮刺激器檢測大鼠的學(xué)習(xí)行為能力，24 h后檢測大鼠的記憶能力，測試完成后處死動物，取各組腦組織，采用ELISA 法測定各組腦組織檢測AchE活性、ChAT活性。結(jié)果 與陽性組比較，銀杏葉提取物各劑量組在Y迷宮學(xué)習(xí)能力達標測試次數(shù)和24 h記憶檢測中錯誤反應(yīng)次數(shù)均減少，可提高模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，并能降低模型大鼠腦內(nèi) AchE 活性，提高 ChAT 活性。結(jié)論 銀杏葉提取物可改善T2DM伴AD大鼠模型模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，其機制可能與增強 ChAT 活性、抑制 AchE 活性有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 銀杏葉提取物；2型糖尿??；阿爾茨海默??；學(xué)習(xí)記憶

[中圖分類號] R749.1；R587.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-4062（2018）05（b）-0022-02

糖尿病患者罹患阿爾茨海默病的風險正逐年增加。銀杏葉提取物（Extract of Ginkgo biloba，EGb）能增加腦血流量，改善腦營養(yǎng)，對中樞神經(jīng)損傷有治療作用。但是關(guān)于EGb對T2DM伴AD樣動物模型學(xué)習(xí)記憶能力和中樞膽堿能系統(tǒng)的影響及其機制尚未報道，EGb可能成為治療T2DM合并AD的一種新藥。該研究采用EGb為治療藥物，為臨床治療糖尿病伴學(xué)習(xí)記憶障礙的相關(guān)疾病提供相應(yīng)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 雄性健康SD大鼠，體重150～200 g，所有動物均由山西醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供。

1.1.2 主要試劑及儀器 多聚甲醛、多聚賴氨酸、GBE 注射液、 鏈脲佐菌素（ STZ）、乙酰膽堿酯酶（ AchE） ELISA測試盒、乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（ChAT）ELISA測試盒、血糖儀、Y迷宮刺激器。

1.2 方法

1.2.1 分組及模型的制備 健康雄性SD大鼠大鼠60只，隨機分為6組，分別為正常組，模型組，低劑量銀杏葉提取物組（1.5 g/kg），中劑量銀杏葉提取物組（3 g/kg），高劑量銀杏葉提取物組（6 g/kg）。除正常組外，其他組均以高脂高糖飲食喂養(yǎng)，連續(xù)喂養(yǎng)6周。然后尾靜脈注射STZ后，48～72 h后清晨取空腹尾靜脈血測空腹血糖和空腹胰島素水平，每天檢測1次，連測3 d空腹血糖平均值≥16.7 mmol/L，即為T2DM模型，再用Y迷宮進行行為學(xué)檢測，篩選學(xué)習(xí)記憶行為障礙的大鼠30只，T2DM伴AD大鼠模型模型制備成功。造模后，低、中、高劑量組分別予EGb 1.5、3、6 g/kg腹腔注射，正常組、模型組等體積腹腔注射生理鹽水，均連續(xù)給藥8周。

1.2.2 行為學(xué)檢測 各組動物在給藥8周后，分別用Y迷宮刺激器進行學(xué)習(xí)能力的行為學(xué)測試，并且在24 h后進行記憶能力的行為學(xué)測試。將大鼠連續(xù)10次測試中有9次或9次以上正確反應(yīng)（9/10標準）定為學(xué)會標準[1]。記錄大鼠達到學(xué)會標準所需的訓(xùn)練次數(shù)，將其作為大鼠學(xué)習(xí)能力的觀測指標。學(xué)習(xí)能力測試24 h后，按照以上方法對大鼠連續(xù)進行30次測試，記錄觀察大鼠在30次測試反應(yīng)中的錯誤次數(shù)，將其作為記憶能力的指標。

1.2.3 腦組織 AchE 活性、 ChAT 活性檢測 學(xué)習(xí)記憶功能測試后，將大鼠麻醉，采血后斷頭處死，低溫條件下快速取腦組織，以生理鹽水沖洗，濾紙吸干，稱重后置于勻漿器中勻漿，取上清液，放于4 ℃冰箱保存，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定各組腦組織AchE活性、ChAT 活性，按測試盒說明書操作。

1.3 統(tǒng)計方法

應(yīng)用 SPSS 21.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理實驗數(shù)據(jù)，計量資料均以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠Y-迷宮學(xué)習(xí)和記憶行為能力檢測結(jié)果

模型組與正常組比較，Y迷宮學(xué)習(xí)過程中達標所需的訓(xùn)練次數(shù)和24 h后30次測試中錯誤反應(yīng)次數(shù)均明顯增多（P<0.01）；而各藥物治療組分別與模型組比較，其學(xué)習(xí)達標訓(xùn)練次數(shù)以及24 h后記憶過程測試的錯誤反應(yīng)次數(shù)均明顯減少（P<0.05），見表1。

2.2 大鼠腦組織 AchE 活性、 ChAT 活性表達

大鼠腦組織 ChAT，AChE 活性的影響與正常組比較，模型組大鼠腦組織AChE活性明顯升高、ChAT活性明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；EGb 給藥治療后，各治療組與模型組比較，AChE活性降低、ChAT活性升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

近年來研究結(jié)果顯示T2DM和AD兩者有緊密聯(lián)系，T2DM作為獨立作用血管因素之外的危險因素，增加AD風險的發(fā)生率，甚至有學(xué)者稱為“3型糖尿病”[2]。 T2DM伴AD患者在糖尿病表現(xiàn)的基礎(chǔ)上，認知障礙和癡呆已成為其并發(fā)癥，發(fā)病率逐年增加。乙酰膽堿作為中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)中重要的神經(jīng)遞質(zhì)，在腦組織內(nèi)分布廣泛，與學(xué)習(xí)記憶功能密切相關(guān)[3]。ChAT是合成乙酰膽堿的重要關(guān)鍵酶，主要存在于膽堿能系統(tǒng)神經(jīng)元內(nèi)，在細胞胞體內(nèi)合成，是衡量膽堿能神經(jīng)元功能的重要標志。AChE的作用是分解乙酰膽堿，與ChAT共同作用在調(diào)節(jié)乙酰膽堿過程中存在動態(tài)平衡。在老年糖尿病認知障礙患者腦中ChAT活性下降，且與認知障礙程度呈正相關(guān)[4]。銀杏葉提取物（Extract of Ginkgo biloba，EGb）是以銀杏為原料，分離純化提取的物質(zhì)，其主要活性成分是黃酮類和萜內(nèi)酯類[5]，能增加腦血流量，對中樞神經(jīng)損傷有治療作用。

該研究采探討EGb對T2DM并發(fā)AD的治療作用，研究結(jié)果顯示，EGb 干預(yù)治療后，可以降低T2DM伴AD大鼠 AChE活性，促進ChAT活性，EGb在T2DM伴AD模型大鼠中可以提高模型組大鼠ChAT神經(jīng)元的表達，從而改善T2DM伴AD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。由此可見，EGb具有改善腦營養(yǎng)，調(diào)節(jié)新陳代謝、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、新陳代謝和內(nèi)分泌系統(tǒng)等療效，在臨床應(yīng)用上提供一定的治療價值。

[參考文獻]

[1] 陸利，張衛(wèi)國，楊桂姣.銀杏提取物對自身免疫性腦脊髓炎小鼠脫髓鞘免疫炎性病變的影響[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2011，42（7）：545-546.

[2] Xu WP， Gong S， Jiang XH，et al. Y-Maze learning increases cell proliferation in the hippocampal dentate gyrus of adult rats[J].Suzhou Univ J Med Sci，2005，25（3）：366-369.

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[4] 張曉鋒，陳淅泠，王欣東.鹽酸美金剛對血管性癡呆大鼠海馬 CA1區(qū) BDNF及ERK 表達的影響[J].中國實用神經(jīng)疾病雜志，2010，13（4）：19-21.

[5] Goedert M. Tau protein and the neurofibrillary pathology of Alzheimers disease[J].Trends Neurosci，1993，16（11）：460-465.

（收稿日期：2018-02-27）