湯勇 吳升德 胡天良

摘要 采用高效液相色譜法，以甲醇+乙腈+水（用磷酸調(diào)pH=3.0）溶液為流動(dòng)相，使用ZORBAX SB-C18 5 μm為填料的不銹鋼柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm，對(duì)丁蟲腈乳油進(jìn)行定量分析。結(jié)果表明，該方法的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.91%，平均回收率為99.17%，丁蟲腈的檢測(cè)濃度在0.01～0.50 mg/mL范圍內(nèi)的線性相關(guān)系數(shù)為0.999 7。

關(guān)鍵詞 高效液相色譜；丁蟲腈乳油；分析方法

中圖分類號(hào) S657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）12-0118-02

Abstract To establish a HPLC method for determination of flufiprole EC，methanol，acetonitrile and water（pH was adjusted to 3.0 with phosphoric acid）were used as mobile phase，with a ZORBAX SB-C18 5 μm as chromatographic column，and UV detection wavelength was set at 220 nm. The standard deviation of this method was 0.14， the variation coefficient was 0.91%，and the average recovery rate was 99.17%.The standard curve was linear over the range of 0.01-0.50 mg/mL with linear correlation coefficient as 0.999 7.

Key words HPLC；flufiprole EC；analysis method

丁蟲腈（flufiprole，CAS號(hào)：704886-18-0）是一種新型苯基吡唑類廣譜殺蟲劑，對(duì)半翅目、鱗翅目、纓翅目害蟲具有優(yōu)異防效。其殺蟲機(jī)理新穎獨(dú)特、活性高，具有胃毒、觸殺及一定的內(nèi)吸作用，與菊酯類、有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類等農(nóng)藥無交互抗性，可用于防治水田稻飛虱、二化螟、稻縱卷葉螟以及蔬菜田中的小菜蛾[1-2]。目前，關(guān)于丁蟲腈乳油的分析方法未見公開報(bào)道。本文采用高效液相色譜法測(cè)定乳油制劑中的丁蟲腈含量，該方法操作簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確，可用于產(chǎn)品生產(chǎn)過程質(zhì)量控制。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

1.1.1 儀器設(shè)備。Agilent 1260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），具有可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器；Agilent色譜工作站；色譜柱：150.0 mm×4.6 mm（i.d.）不銹鋼柱，內(nèi)裝ZORBAX SB-C18 5 μm填充物；Milli-Q超純水儀。

1.1.2 試劑。甲醇、乙腈為色譜純；磷酸為分析純；丁蟲腈標(biāo)樣（購于德國Dr Ehrenstorser GmbH，純度99.0%）；丁蟲腈乳油（企業(yè)提供）。

1.2 色譜條件

流動(dòng)相為甲醇∶乙腈∶水=40∶30∶30（v/v/v，用磷酸調(diào)pH=3.0），檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣體積20 μL，柱溫30 ℃。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制。準(zhǔn)確稱取丁蟲腈標(biāo)準(zhǔn)品50 mg（精確至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，用乙腈定容搖勻。

1.3.2 供試品溶液的配制。準(zhǔn)確稱取0.07 g（精確至0.000 2 g）丁蟲腈乳油試樣，置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解定容搖勻后待測(cè)。

1.3.3 測(cè)定。在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針標(biāo)樣溶液峰面積相對(duì)變化<1.5%后按標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液順序進(jìn)行分析。

通過比較標(biāo)樣和樣品的保留時(shí)間進(jìn)行定性分析，將測(cè)得的2針試樣溶液及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中丁蟲腈的峰面積分別進(jìn)行平均，試樣中丁蟲腈的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（X）按下式計(jì)算：

式中，m1為試樣的質(zhì)量（g）；m2為標(biāo)樣的質(zhì)量（g）；A1為2針試樣溶液中丁蟲腈峰面積的平均值；A2為2針標(biāo)樣溶液中丁蟲腈峰面積的平均值；P為標(biāo)樣中丁蟲腈的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）。

1.4 方法學(xué)驗(yàn)證

1.4.1 檢出限及定量限。按照1.3.1所述，逐級(jí)稀釋丁蟲腈標(biāo)樣溶液進(jìn)行測(cè)定，按3倍信噪比和10倍信噪比分別計(jì)算檢出限和定量限[3]。

1.4.2 線性關(guān)系。將1.3.1 所述配制的標(biāo)樣溶液，用乙腈稀釋成分別含0.01、0.05、0.10、0.20、0.50 mg/mL丁蟲腈的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，按上述的色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定峰面積。以標(biāo)準(zhǔn)品峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以5個(gè)不同濃度點(diǎn)的供試液的濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)（X），擬合回歸線性方程[3]。

1.4.3 精密度。從同一批丁蟲腈乳油樣品中準(zhǔn)確稱取5個(gè)試樣，按1.3.2配制試樣溶液，按上述色譜條件注入高效液相色譜儀，計(jì)算平均峰面積及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）[3]。

1.4.4 回收率。準(zhǔn)確稱取5份已知含量的樣品，分別加入不同量丁蟲腈標(biāo)準(zhǔn)品，在上述操作條件下測(cè)定加標(biāo)回收率[3]。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

用紫外檢測(cè)器對(duì)相同條件下分離后的丁蟲腈及其雜質(zhì)在190～370 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)丁蟲腈的最大吸收波長(zhǎng)在220 nm，此時(shí)雜質(zhì)響應(yīng)也較靈敏，故選擇220 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)[4]。

根據(jù)丁蟲腈的理化性質(zhì)，選擇ZORBAX SB-C18為分析柱。先后考察了以甲醇-水、甲醇-磷酸溶液、乙腈-水、乙腈-磷酸溶液、甲醇-乙腈-水為流動(dòng)相。當(dāng)以甲醇-乙腈-水為流動(dòng)相時(shí)，在保證較好分離的同時(shí)獲得了較好的峰型。經(jīng)優(yōu)化，當(dāng)甲醇∶乙腈∶水=40∶30∶30（v/v/v）時(shí)，并用磷酸優(yōu)化流動(dòng)相溶液pH=3.0，流速為1.0 mL/min時(shí)，試樣溶液中丁蟲腈和雜質(zhì)分離度和峰型較好，丁蟲腈的保留時(shí)間為8.099 min。丁蟲腈標(biāo)樣和乳油樣品的高效液相色譜圖如圖1、2所示。

2.2 檢出限及定量限

將標(biāo)樣溶液經(jīng)過逐級(jí)稀釋后進(jìn)樣分析，最終得出丁蟲腈的檢出限為 2.19 μg/mL，定量限為 6.98 μg/mL。

2.3 線性關(guān)系

由圖3可知，經(jīng)回歸分析得到丁蟲腈的線性方程為Y=85 255X+1 714，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 7，表明丁蟲腈在0.01～0.50 mg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度

精密度試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14，RSD為0.91%，表明該方法精密度良好，滿足檢測(cè)要求。

2.5 加標(biāo)回收率

該檢測(cè)方法加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果如表1所示，可以看出，測(cè)得方法的平均回收率為99.17%，表明在添加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液后回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差符合檢測(cè)要求。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)建立了高效液相色譜法測(cè)定丁蟲腈乳油含量的分析方法，結(jié)果表明，本方法準(zhǔn)確可靠，專屬性強(qiáng)，精密度較高，線性關(guān)系和回收率良好，可用于丁蟲腈乳油產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 李彥龍.創(chuàng)制殺蟲劑丁蟲腈[J].農(nóng)藥，2014，53（2）：126-128.

[2] 何健，由宗政，廖云燕，等.丁蟲腈在土壤中的吸附及移動(dòng)特性[J].農(nóng)藥，2012，51（10）：720-723.

[3] 國家藥典委員會(huì).《中華人民共和國藥典》2015版二部附錄[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2016.

[4] 曹磊，顧愛國，王莉.高效液相色譜法測(cè)定0.06%甾烯醇微乳劑中有效成分含量方法研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2018（2）：125-126.