周建偉 ，孔翠 ，蔡淑靜 ，張昭才 ，楊永軍 ，申愛華

（1.濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東 濟(jì)寧 272000；2.濟(jì)寧市皮膚病防治院，山東 濟(jì)寧 272000）

梅毒是由蒼白螺旋體（TP）感染所致的一種慢性性傳播疾病，可通過血液、胎盤及性傳播，并可侵犯全身多個(gè)器官，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣。近年來，梅毒感染人數(shù)在我國呈逐年上升趨勢(shì)。TP對(duì)人體的致病機(jī)制尚不完全清楚。近年來，有報(bào)道認(rèn)為TP感染后可誘發(fā)自身免疫應(yīng)答[1-2]。本文通過檢測(cè)梅毒患者血清中抗核抗體（ANA）和抗心磷脂抗體（ACA），探討TP患者自身免疫應(yīng)答狀態(tài)，為梅毒發(fā)病機(jī)制研究提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月—2014年12月本院皮膚性病門診確診的梅毒患者200例為研究對(duì)象，梅毒血清學(xué)證實(shí)試驗(yàn)血清梅毒螺旋體明膠顆粒凝集（TPPA）檢測(cè)呈陽性，男136例，女64例，年齡 21～72歲，平均（32.5±9.2）歲。另選健康對(duì)照組200例，均為本院健康體檢者新鮮血清標(biāo)本，男148例，女 54例，年齡 20～65歲，平均（30.6±8.4）歲，TPPA呈陰性。所有參與者均排除乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病病毒等病原體感染，無腫瘤性疾病及6個(gè)月內(nèi)未服用免疫抑制或增強(qiáng)藥物。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑 TPPA試劑盒購自MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司，甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）診斷試劑盒購自上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，ANA間接免疫熒光（IIF）法檢測(cè)試劑、ACA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）盒購自江蘇HOB生物科技有限公司。

1.2.2 儀器 奧林巴斯BX51熒光顯微鏡，芬蘭雷勃MK3酶標(biāo)儀。

1.3 方法 取患者和健康體檢者血清標(biāo)本進(jìn)行TRUST、ANA、ACA檢測(cè)。TRUST采用環(huán)狀卡片法將血清對(duì)倍稀釋到1∶32進(jìn)行檢測(cè)；ANA采用IIF法，基質(zhì)為Hep-2細(xì)胞，將血清以緩沖液分別按1∶100、1∶320、1∶1 000、1∶3 200 稀釋，實(shí)驗(yàn)步驟參照相關(guān)報(bào)道進(jìn)行[3]。以熒光顯微鏡觀察結(jié)果，≥1∶100視為陽性；ACA采用ELISA法測(cè)定IgG和IgM；具體操作嚴(yán)格按照各試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件，以χ2檢驗(yàn)對(duì)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ACA陽性率和ANA陽性率及其核型分布如表1所示，梅毒患者ANA陽性率為22.5%，與健康對(duì)照組陽性率2.5%比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。ACA-IgM的陽性率為29.5%，ACA-IgG的陽性率為12.5%。與健康對(duì)照組陽性率（4.5%）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

例（%）表1 梅毒患者ANA和ACA的陽性率

2.2 ANA核型分布 45例ANA陽性標(biāo)本中，染色體型最高，陽性率為7.0%；其次為胞漿顆粒型（6.5%）；再次為核顆粒型（5.0%），見表2。ANA陽性以低滴度陽性為主，1∶100滴度的陽性例數(shù)為33例，占總陽性例數(shù)的73.3%，其次為10例1∶320滴度，比例為22.2%；1∶1000滴度的陽性僅為2例，比例約為4.5%。

表2 200例ANA陽性老年梅毒感染患者核型分布 例

2.3 ACA和ANA陽性率與TRUST滴度的相關(guān)性200例梅毒患者中，TRUST試驗(yàn)陽性為79例，陽性率為39.5%。ANA陽性率與TRUST滴度的相關(guān)系數(shù)僅為0.393（P>0.05）；ACA-IgM陽性率與TRUST滴度的相關(guān)系數(shù)為0.762（P<0.05）；ACA-IgG陽性率與TRUST滴度的相關(guān)系數(shù)為0.417（P>0.05），見表3。

表3 梅毒患者ANA和ACA陽性率與TRUST滴度相關(guān)性 例（%）

3 討論

至今，TP感染人體后的致病機(jī)制仍不甚明確。近年來研究發(fā)現(xiàn)，TP感染可引起免疫系統(tǒng)紊亂從而導(dǎo)致免疫損傷[4]。有學(xué)者報(bào)道，機(jī)體在TP的感染刺激下導(dǎo)致器官組織損傷，釋放自身免疫原性成分，誘導(dǎo)機(jī)體對(duì)自身成分發(fā)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生自身抗體，從而引起自身免疫病，造成組織或器官損傷[5]。

本研究中，TPPA陽性的梅毒患者ANA的陽性率為22.5%，顯著高于健康對(duì)照組的健康體檢者（P<0.01）。這提示梅毒患者產(chǎn)生自身抗體的概率顯著高于健康對(duì)照組的健康體檢者[6]。TP感染人體后確實(shí)可以刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，造成自身免疫。在朱浩穩(wěn)等[5]的報(bào)道中，ANA陽性率約為30.4%，數(shù)據(jù)略有差異，究其原因，一方面可能是不同檢驗(yàn)者判讀結(jié)果的誤差造成的，不同檢驗(yàn)者即使對(duì)同一標(biāo)本判讀仍會(huì)有誤差，況且兩研究是不同的研究者檢測(cè)不同的標(biāo)本；另一方面可能與執(zhí)行的ANA判定標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)，本實(shí)驗(yàn)采用的是100-320-1 000判定標(biāo)準(zhǔn)，而后者采用的則是40-80-160的報(bào)告系統(tǒng)[7]。在本研究進(jìn)一步的分析中，發(fā)現(xiàn)在ANA陽性標(biāo)本中，染色體型最高，其次為胞漿顆粒型，再次為核顆粒型。ANA陽性以低滴度（1∶100）陽性為主，中等滴度（1∶320）所占比例較低，高滴度陽性者（>1∶320）很是罕見。這可能提示TP刺激機(jī)體引起的免疫應(yīng)答較弱，機(jī)體的免疫損傷可能是由于這種較弱的自身免疫應(yīng)答的長(zhǎng)期作用造成的。與蔡淑靜等[8]的報(bào)道相比較，雖然各核型高低順序基本一致，但所占百分比明顯略低，這可能與研究對(duì)象、結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)的不同有關(guān)。

ACA可分為兩大類，第一類為β-糖蛋白Ⅰ依賴性ACA，該類ACA和抗原性心磷脂的結(jié)合需要β2-糖蛋白Ⅰ的參與，主要采用ELISA法檢測(cè)；第二類為非β-糖蛋白Ⅰ依賴性ACA或反應(yīng)素性，常用TRUST試驗(yàn)來檢測(cè)。本研究結(jié)果顯示，ACA-IgM在梅毒患者中的陽性率高為27.0%，ACA-IgG為12.5%。雖然兩數(shù)值均顯著高于健康對(duì)照（P<0.01），但與其他文獻(xiàn)比較[5]，顯著偏低，這可能與本文獻(xiàn)將ACA-IgM和Ig-G分開統(tǒng)計(jì)有關(guān)，也可能受試劑敏感度及參考范圍的影響。TRUST試驗(yàn)結(jié)果顯示，其陽性例數(shù)約占TPPA陽性例數(shù)的1/3。TRUST試驗(yàn)陽性率與ANA陽性率進(jìn)行相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)僅為0.393，說明TRUST試驗(yàn)檢測(cè)的非特異性ACA與抗核抗體的產(chǎn)生不具備明顯的相關(guān)關(guān)系。TRUST試驗(yàn)主要用于活動(dòng)性梅毒的確定或梅毒分期，對(duì)早起梅毒具有一定的診斷意義。而ANA的產(chǎn)生是一個(gè)慢性的過程，梅毒患者的多器官損傷或疾病的多樣化多是由于抗核抗體對(duì)宿主組織器官長(zhǎng)期免疫損傷的結(jié)果[5]。因此，二者并無明確的相關(guān)性。TRUST試驗(yàn)陽性結(jié)果與ACA-IgM有較高的相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)高達(dá)0.762，提示二者具較為密切的相關(guān)關(guān)系，ACA-IgM可能在梅毒感染分期和療效觀察方面具有一定的作用[9]。

綜上所述，TP感染機(jī)體后容易引起自身免疫反應(yīng)。ANA檢測(cè)有助于臨床評(píng)估梅毒患者自身免疫反應(yīng)損傷，ACA檢測(cè)連同TRUST試驗(yàn)結(jié)果則有益于觀察療效。因此，臨床將ANA和ACA作為梅毒患者的實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)具有一定的實(shí)用性和必要性。