季沈杰

(江蘇省啟東市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 226200)

子宮內(nèi)膜異位癥(EMT)又叫內(nèi)異癥，主要由于具有生長(zhǎng)功能的異位子宮內(nèi)膜所致，是婦科一種常見(jiàn)的良性疾病[1-2]。其發(fā)病率在育齡女性中高達(dá)30%，且近年來(lái)逐漸上升[3-4]。目前EMT的發(fā)病機(jī)制說(shuō)法不一，最經(jīng)典的理論為1921年SAMPSON提出的經(jīng)血逆流種植學(xué)說(shuō)理論。該理論解釋?zhuān)愇坏膬?nèi)膜源于子宮內(nèi)膜組織，而這些組織通過(guò)經(jīng)血逆流、血管播散、淋巴傳播、醫(yī)源性種植等方式轉(zhuǎn)移到宮腔外各部位再生長(zhǎng)[5]。

雖然病理組織學(xué)表明EMT是一種良性疾病，但也存在浸潤(rùn)、增生、轉(zhuǎn)移等不良風(fēng)險(xiǎn)，所以揭示EMT的發(fā)病機(jī)制是為了更好地進(jìn)行預(yù)防和治療[6]。較多研究者發(fā)現(xiàn)EMT患者的免疫水平可能會(huì)改變，但目前無(wú)系統(tǒng)研究?，F(xiàn)探討EMT患者的免疫水平，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和研究。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年12月至2017年6月該院收治的EMT患者49例作為觀(guān)察組，均經(jīng)病理學(xué)檢查確證，按照修正的AFS分期標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ～Ⅱ期為輕度，20例患者，Ⅲ～Ⅳ期為重度，29例患者。對(duì)照組為同期住院因輸卵管因素不孕行腹腔鏡手術(shù)患者48例。2組患者的年齡、產(chǎn)次等一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見(jiàn)表1。

表1 2組患者一般資料結(jié)果比較

注：―表示無(wú)數(shù)據(jù)

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：育齡期女性，月經(jīng)規(guī)律；術(shù)前未接受雌、孕激素治療；取得患者及家屬同意，并簽署知情同意書(shū)者。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并子宮腺肌癥患者；結(jié)核性疾病、免疫性疾病及代謝性疾病患者。

1.3標(biāo)本采集 分別取同一患者標(biāo)本，同時(shí)進(jìn)行相應(yīng)處理，術(shù)前晨起采集患者外周血、靜脈血，使用肝素鈉管采血，手術(shù)直視下采集無(wú)血液污染的腹腔液，采集標(biāo)本應(yīng)嚴(yán)格按照無(wú)菌操作進(jìn)行，避免影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

1.4觀(guān)察指標(biāo)及操作方法 (1)抗苗勒管激素(AMH)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法(法國(guó)Immunotech Beckman Coulter公司)，測(cè)定范圍0.06～18.0 ng/mL，相關(guān)系數(shù)(r)≥0.990 0。(2)輔助性T細(xì)胞17 (Th17)及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)細(xì)胞所占比例：細(xì)胞流式儀[賽百慷(上海)生物技術(shù)股份有限公司]，取全血100 μL加入CD3 FITC、CD8 APC-CY7、CD127 PEMAB抗體各10 μL，避光孵育20 min，溶解紅細(xì)胞，固定、破膜50 min，其次加入白細(xì)胞介素-17(IL-17)ALEXA647標(biāo)記的抗體10 μL，繼續(xù)避光孵育50 min，洗滌細(xì)胞后在PBS液重懸上機(jī)檢測(cè)Th17及Treg細(xì)胞占CD4細(xì)胞比例。(3)血清和腹腔液白細(xì)胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平：分別取外周血及腹腔液3～5 mL，室溫下3 000 r/min離心10 min，采用ELISA法(上海酶研生物技術(shù)有限公司)，按照說(shuō)明書(shū)一次性檢測(cè)血清及腹腔液IL-6和TNF-α水平。

2 結(jié) 果

2.12組患者血清AMH水平結(jié)果比較 不同組別不同年齡段EMT患者的血清AMH水平不同，隨年齡增長(zhǎng)其下降。2組AMH水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 2組患者AMH水平結(jié)果比較

注：與對(duì)照組比較,bP<0.05

2.22組患者免疫細(xì)胞Th17及Treg所占CD4+T細(xì)胞比例結(jié)果比較 觀(guān)察組患者Th17所占CD4+T細(xì)胞比例高于對(duì)照組，Treg所占CD4+T細(xì)胞比例低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 2組患者外周血Th17及CD4+T細(xì)胞比例

注：與對(duì)照組比較,bP<0.05

2.32組患者血清及腹腔液IL-6、TNF-α水平結(jié)果比較 觀(guān)察組血清及腹腔液IL-6、TNF-α水平均高于對(duì)照組，且Ⅲ～Ⅳ期患者水平高于Ⅰ～Ⅱ期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 2組患者血清和腹腔液IL-6、TNF-α水平結(jié)果比較

注：與對(duì)照組比較,bP<0.05;與對(duì)照組比較，cP<0.01

3 討 論

近年來(lái)，許多研究表明免疫因素參與了EMT的發(fā)病，患者血清中很多細(xì)胞因子發(fā)生了變化，并在疾病中發(fā)揮了作用，如AMH、Th17、Treg、IL-6、TNF-α等[7]。AMH是一種新型的、能預(yù)測(cè)卵巢儲(chǔ)備功能的指標(biāo)，許多研究通過(guò)對(duì)AMH指標(biāo)評(píng)估其對(duì)EMT的影響。有研究報(bào)道，年齡和血清AMH水平密切相關(guān)，隨年齡增加患者AMH基礎(chǔ)水平逐漸降低[8]。本研究結(jié)果顯示，觀(guān)察組Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期患者血清AMH水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且Ⅲ～Ⅳ期患者水平低于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)。同時(shí)隨年齡的增長(zhǎng)患者AMH水平會(huì)降低，說(shuō)明EMT患者AMH水平會(huì)降低，同時(shí)年齡越大AMH水平越低。

Th17是新發(fā)現(xiàn)的一種能夠分泌IL-17的T細(xì)胞亞群，在機(jī)體防御反應(yīng)和自身免疫性疾病中具有重要的意義。Th17的特異轉(zhuǎn)錄因子為ROR-γt，參與機(jī)體炎性反應(yīng)和適應(yīng)性免疫反應(yīng)過(guò)程，并在對(duì)抗胞外特定病原體上發(fā)揮重要作用[8-9]。Treg是一種控制體內(nèi)自身免疫反應(yīng)性的T細(xì)胞亞群,主要分泌IL-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)。Treg的特異轉(zhuǎn)錄因子為FoxP3，參與體內(nèi)自身抗原耐受，保持機(jī)體免疫平衡，進(jìn)而抑制機(jī)體免疫疾病的發(fā)生。當(dāng)機(jī)體Th17與Treg之間的動(dòng)態(tài)平衡打破，導(dǎo)致自身免疫疾病[10]。本研究結(jié)果表明，觀(guān)察組患者Th17所占CD4+T細(xì)胞比例高于對(duì)照組(P<0.05)，Treg所占CD4+T細(xì)胞比例低于對(duì)照組(P<0.05)，且Th17/Treg觀(guān)察組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明EMT患者Th17/Treg比例更大，更易使機(jī)體免疫失衡。

IL-6是參與造血、免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)及炎性等反應(yīng)的細(xì)胞因子，其能活化T細(xì)胞，使B細(xì)胞前體成為產(chǎn)生抗體的細(xì)胞，能促進(jìn)原始骨髓源細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞的裂解功能，并在內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用[11-12]。TNF-α是一種由激活的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的、能抑制成刺激破骨細(xì)胞和骨細(xì)胞的細(xì)胞因子。具有殺傷腫瘤細(xì)胞、調(diào)節(jié)代謝，同時(shí)還能對(duì)女性經(jīng)期排卵有所調(diào)節(jié)。另一方面，有研究證實(shí)TNF-α通過(guò)降低芳香化酶活性抑制雌二醇及酮的生成，影響卵泡發(fā)育[13]。本研究檢測(cè)2組患者IL-6和TNF-α水平，觀(guān)察組患者血清、腹腔液IL-6、TNF-α水平均高于對(duì)照組(P<0.05)，且Ⅲ～Ⅳ期患者IL-6、TNF-α水平高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)，說(shuō)明EMT患者血清、腹腔液IL-6、TNF-α水平升高，且EMT后期較前期升高。

綜上所述，EMT患者機(jī)體AMH水平隨年齡增長(zhǎng)逐漸下降，免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞Th17及Treg存在紊亂現(xiàn)象。