倪慧慧 王炳芳

1.江蘇大學附屬昆山市第一人民醫(yī)院感染科 (江蘇 昆山， 215300) 2.江蘇大學附屬昆山市第一人民醫(yī)院消化科

含SH2結構域的肌醇多磷酸5′-磷酸酶-2(SHIP2)是Pesesse等(1997)[1]發(fā)現(xiàn)的一種蛋白酶，屬于肌醇多磷酸5′磷酸酶家族系列，我們采用組織芯片技術和免疫組織化學方法，對42例原發(fā)性肝細胞癌及30例癌旁正常肝組織SHIP2蛋白的表達及其意義進行探討，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2002年至2011年原發(fā)性肝癌標本42例，其中男27例，女15例；年齡范圍(28～75)歲，平均年齡(52.2±14.6)歲，≥60歲18例，<60歲24例；高分化19例，中分化14例 ，低分化9例；有門靜脈癌栓28例，無門靜脈癌栓14例。對照組癌旁正常肝組織30例，男21例，女9例；年齡范圍(26～77)歲，平均年齡(53.4±13.8)歲，≥60歲11例，<60歲19例；其中高分化15例，中分化10例 ，低分化5例；有門靜脈癌栓21例，無門靜脈癌栓9例；兩組人群基本情況比較P>0.05，差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 主要試劑 鼠抗人SHIP2單克隆抗體和免疫組化試劑盒均購自上海今邁生物科技有限公司。

1.3 組織芯片制作 手術切除標本常規(guī)石蠟包埋，首先在HE染色切片上進行定位，應用購自西安艾麗娜生物科技有限公司制作儀取材，制成兩塊組織芯片模塊，選取癌組織84個位點，癌旁正常肝組織60個位點，取樣針直徑2 mm，制作2個芯片蠟塊，以4μm厚度連續(xù)切片，敷貼于經(jīng)1%多聚賴氨酸處理的載玻片，各取1張進行HE染色供形態(tài)學觀察，其余切片行免疫組化檢測。

1.4 試驗方法和結果判斷 免疫組化采用IHC染色方法，觀察整張組織切片，每個芯片在電鏡下隨機選擇四域，并采用免疫組化染色陽性率評分(IHS)。IHS是由染色強度和密度確定評價。染色強度評分如下：0(負)，1(弱陽性)，2(中正)，和3(強陽性)。SHIP2陽性細胞百分率也根據(jù)以下評分分為四類：1分代表0到10%，2分是11%到50%，3分是51%到80%，和4分代表81%到100%。強度的總和的百分比分數(shù)得出最終的IHS：總分低于3的樣本(IHS≤3)被認為是低SHIP2表達，為陰性表達。而以總分4以上(IHS≥4)為高SHIP2表達，為陽性表達。

1.5 統(tǒng)計學方法 統(tǒng)計學處理采用STATA 12.0版統(tǒng)計軟件分析處理，采用統(tǒng)計方法有卡方檢驗、t檢驗等。

2 結果

2.1 肝細胞癌組織與癌旁肝組織中SHIP2表達的比較 肝細胞癌組織中SHIP2陽性表達率顯著高于癌旁肝組織(P<0.01),見表1，及插頁彩圖1。

表1 肝細胞癌組織與癌旁肝組織中SHIP2表達的比較 (n)

2.2 原發(fā)性肝細胞癌5年生存者與死亡者SHIP2表達情況 見表2。

表2 原發(fā)性肝細胞癌5年生存者與死亡者SHIP2表達的比較 [n(%)]

42例肝細胞癌患者中存活5年的有28例，死亡的有14例，發(fā)現(xiàn)死亡患者SHIP2陽性表達率在肝細胞癌五年生存率比較中顯著高于存活患者(P<0.01)。

3 討論

肝細胞癌是消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤，近20年來其發(fā)病率顯著上升。盡管肝癌的治療包括外科治療，放化療及生物治療，但近十年來其5年生存率無顯著提高，這與腫瘤的轉移及術后復發(fā)有密切聯(lián)系[2]。肝癌的產生、發(fā)展和轉移是一個多因素、多基因參與的復雜生物學過程，在此過程中，腫瘤相關基因及其產物的非正常表達可引起細胞異常增殖、分化和凋亡，最終導致癌變發(fā)生[3,4]，因此尋找與肝癌發(fā)生發(fā)展及轉移預后相關的基因具有重要意義。

SHIP2的是一種脂質磷酸酶，全名為SH2域肌醇磷酸酶，最早發(fā)現(xiàn)其作用是負性調節(jié)胰島素敏感性，并且參與磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B (PI3K/Akt)信號途徑。PI3K/Akt參與腫瘤的生長、發(fā)展及轉移[5,6]。SHIP2可在PI3K/Akt下游通路中使3,4,5-三磷酸磷脂酰肌醇去磷酸化而產生異常脂質蛋白產物,從而干擾正常信號通路表達。近年研究表明，SHIP2可能與乳腺癌和非小細胞肺癌預后不良相關[7，8]。以上研究表明SHIP2可作為乳腺癌和非小細胞肺癌的臨床診斷和預后判斷的潛在標志物，而且可作為腫瘤新型靶向治療的候選基因。SHIP2表達與肝細胞癌預后的關系目前尚無報道，SHIP2與肝細胞癌的關系目前仍無統(tǒng)一定論[9]。

組織芯片(TMA)是繼基因芯片和蛋白質芯片之后出現(xiàn)的又一種重要的生物芯片技術，是后基因組時代基因組學和蛋白質組學研究的重要方法之一，具有高通量、節(jié)約組織原材料和檢測試劑、實驗條件一致性及實驗結果可比性好、實驗誤差小等有優(yōu)點，組織芯片技術在腫瘤研究中可用于驗證基因的特異表達、抗腫瘤藥物作用靶點的篩選、突變體和多態(tài)性的檢測以及腫瘤的分子診斷等方面。對于發(fā)生、發(fā)展過程呈多階段性，并涉及多種基因異常的腫瘤如HCC的研究，組織芯片技術有其突出的優(yōu)勢。組織芯片在腫瘤研究中有廣闊的應用前景，免疫組織化學技術目前已廣泛應用于腫瘤病理診斷，具有定位準確、直觀性強，形態(tài)與功能相結合的特點。本研究中，我們選擇SHIP2作為靶基因，通過IHC染色方法分析確認SHIP2在肝細胞癌中的高表達。使用組織芯片免疫組織化學方法觀察SHIP2在肝癌中的表達，并根據(jù)組織芯片建立的肝癌病人數(shù)據(jù)庫，對原發(fā)性肝細胞癌五年生存率中SHIP2表達進行比較，分析SHIP2與腫瘤預后的關系，為臨床治療提供理論依據(jù)。我們發(fā)現(xiàn)42例肝細胞癌組織檢測到21例(50.00%)具有SHIP2高表達，30例匹配的癌旁肝組織中6例(20.00%)。結果顯示統(tǒng)計學意義(χ2=6.7200，P< 0.01),而SHIP2陽性表達率在肝細胞癌五年生存率比較中死亡患者高于存活患者((χ2=6.857，P<0.01)。這表明與乳腺癌細胞一樣，SHIP2的超高表達可能與原發(fā)性腫瘤細胞相關[7]。我們的研究結果顯示在肝癌患者中肝癌組SHIP2高表達與預后不良相關。在肝細胞癌中SHIP2對肝細胞癌的預后和治療價值和作用機制還需要進一步的研究來證實和闡明。