王健 牛云圃 崔佳 王磊 樊婷婷 張維

中圖分類號(hào) R441.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）19-2617-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.19.06

摘 要 目的：研究胰高血糖素樣肽1受體（GLP-1R）在大鼠慢性炎性痛發(fā)生機(jī)制中的作用。方法：取大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、生理鹽水1組和完全弗氏佐劑（CFA）1組，另取大鼠隨機(jī)分為生理鹽水2組、CFA2組和（GLP-1R激動(dòng)藥）GLP-1組（5 ?g/kg），采用左后足趾側(cè)注射CFA復(fù)制大鼠慢性炎性痛模型，后3組大鼠建模后第7天腹腔注射相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥1周。采用Hargreaves熱痛儀測(cè)定前3組大鼠建模前1 d（-1 d）、建模當(dāng)天（0 d）和建模后1、3、7、14 d的舔足潛伏期，后3組大鼠建模后8、10、12、14 d的舔足潛伏期，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只大鼠。建模后第7天，采用免疫熒光組織化學(xué)染色觀察模型組大鼠GLP-1R分子的分布情況。采用Western blot法檢測(cè)前3組大鼠建模后1、3、7、14 d背根神經(jīng)節(jié)（DRG）中GLP-1R蛋白的表達(dá)水平，后3組大鼠建模后14 d DRG中GLP-1R、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素6（IL-6）及IL-1β蛋白的表達(dá)水平，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)3只大鼠。結(jié)果：與正常對(duì)照組和生理鹽水1組比較，CFA1組大鼠建模后1、3、7、14 d的舔足潛伏期明顯縮短（P<0.01），DRG中GLP-1R蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.01），-1、0 d的舔足潛伏期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。GLP-1R分子與NeuN雙重標(biāo)記明顯，且與降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）陽性神經(jīng)元雙重標(biāo)記明顯，與植物凝集素B4 （IB4）陽性神經(jīng)元未見明顯雙重標(biāo)記。與生理鹽水2組比較，CFA2組大鼠建模后8、10、12、14 d的舔足潛伏期明顯縮短（P<0.01），建模后14 d DRG中GLP-1R蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.01），TNF-α、IL-6及IL-1β蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.01）。與CFA2組比較，GLP-1組大鼠建模后8、10、12、14 d的舔足潛伏期明顯延長(zhǎng)（P<0.05或P<0.01），建模后14 d DRG中GLP-1R蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.01），TNF-α、IL-6及IL-1β蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：GLP-1R分子主要表達(dá)于DRG中的CGRP陽性神經(jīng)元，其表達(dá)水平隨慢性疼痛的發(fā)生與發(fā)展而逐漸降低，且升高GLP-1R表達(dá)能夠有效緩解慢性炎性痛，其可能與降低DRG中炎癥因子的表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞 胰高血糖素樣肽1受體；完全弗式佐劑；慢性炎性痛；炎癥因子；大鼠

ABSTRACT OBJECTIVE： To study the role of glucagon-like peptide 1 receptor （GLP-1R） on chronic inflammatory pain mechanism in rats. METHODS： The rats were randomly divided into normal control group， normal saline group 1 and complete Freunds adjuvant （CFA） group 1. Other rats were randomly divided into normal saline group 2， CFA 2 group and （GLP-1R agonist） GLP-1 group （5 ?g/kg）. Chronic inflammatory pain model was induced by left hind toe side injection of CFA. The latter 3 groups were given relevant medicine intraperitoneally on the 7th day after modeling， for consecutive a week. The licking incubation of the former 3 groups were determined by Hargreaves thermal pain instrument 1 d before modeling （-1 d）， on modeling day （0 d）， 1， 3， 7， 14 d after modeling； the licking incubation of the latter 3 groups were determined 8， 10， 12， 14 d after modeling； those of each 6 rats were determined at each time point. 7 d after modeling， distribution of receptor GLP-1R molecule in model group was observed by immunofluorescence double labeling. Western blot method was used to detect the expression of GLP-1R protein in dorsal root ganglia （DRG） of rats in former 3 groups 1， 3， 7 and 14 d after modeling. The expression of GLP-1R， TNF-α， IL-6 and IL-1β protein in DRG of rats were also determined in latter 3 groups 14 d after modeling； those of each 3 rats were determined at each time point. RESULTS： Compared with normal control group and normal saline group 1， licking incubation of CFA group 1 was shortened significantly 1， 3， 7， 14 d after modeling （P<0.01）， and the protein expression of GLP-1R in DRG was decreased significantly （P<0.01）； there was no statistical significance in licking incubation -1 and 0 d （P>0.05）. GLP-1R molecules were double labeled with NeuN and calcitonin gene-related peptide （CGRP）-positive neurons no significant double marker was found between GLP-1R molecules and phytohemagglutinin B4 positive neurons. Compared with normal saline group 2， licking incubation of CFA group 2 was shortened significantly 8， 10， 12， 14 d after modeling （P<0.01）； the protein expression of GLP-1R in RG was decreased significantly 14 d after modeling （P<0.01）； the protein expression of TNF-α， IL-6 and IL-1β were increased significantly （P<0.01）. Compared with CFA group 2， licking incubation of GLP-1 group was prolonged significantly 8， 10， 12， 14 d after modeling （P<0.05 or P<0.01）； the protein expression of GLP-1R in DRG was increased significantly 14 d after modeling （P<0.01）， and the protein expression of TNF-α， IL-6 and IL-1β were decreased significantly （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS： GLP-1R molecule is mainly expressed in CGRP-positive neurons of DRG. The expression level of GLP-1 receptor gradually decreases with the occurrence and development of chronic pain. The increase of GLP-1R expression can effectively relieve chronic inflammatory pain， which is related with reducing reduce the expression of inflammatory factors in DRG.

KEYWORDS Glucagon-like peptide 1 receptor； Complete Freunds adjuvant； Chronic inflammatory pain； Inflammatory factor； Rat

疼痛（Pain）是許多疾病的并發(fā)癥之一，尤其慢性痛的發(fā)生是當(dāng)前困擾人類健康的頑疾，如組織損傷、神經(jīng)長(zhǎng)期壓迫、慢性感染等導(dǎo)致的神經(jīng)病理性痛和慢性炎性痛[1-2]。然而目前在臨床上對(duì)疼痛的治療缺乏有效的手段[3-4]，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量和精神狀況，既影響疾病預(yù)后，又加重患者思想負(fù)擔(dān)，因此對(duì)慢性痛發(fā)生的機(jī)制研究迫在眉睫。既往研究表明，當(dāng)慢性痛發(fā)生時(shí)，背根神經(jīng)節(jié)（Dorsal root ganglion，DRG）內(nèi)的衛(wèi)星細(xì)胞會(huì)釋放大量的促炎癥細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）以及能夠增強(qiáng)脊髓背角神經(jīng)元興奮性的神經(jīng)生長(zhǎng)因子（Nerve growth factor，NGF）、一氧化氮（NO）等，進(jìn)而促進(jìn)疼痛的發(fā)生和慢性化[5-8]。

胰高血糖素樣肽1受體（Glucagon-like peptide 1 receptor，GLP-1R）是一種G蛋白偶聯(lián)受體，通過Ca2+和蛋白激酶A信號(hào)通路傳遞信息，并且在神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛分布。新近研究表明，在脊髓背角，GLP-1R主要表達(dá)于小膠質(zhì)細(xì)胞上，并且給予GLP-1R激動(dòng)藥如GLP-1能夠有效緩解神經(jīng)病理性痛、炎性痛和癌痛[9]。亦有研究報(bào)道，鞘內(nèi)給予GLP-1R激動(dòng)藥WB4-24能夠促進(jìn)β-內(nèi)啡肽的釋放，激活內(nèi)源性鎮(zhèn)痛系統(tǒng)從而發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用[10]。

DRG作為外界信息向中樞傳遞的樞紐，在慢性痛的發(fā)生與發(fā)展過程中扮演著重要的角色。DRG主要由神經(jīng)元胞體組成，外面包繞衛(wèi)星細(xì)胞。DRG中的神經(jīng)元包括肽能神經(jīng)元和非肽能神經(jīng)元兩類。在炎癥、外周神經(jīng)損傷等病理?xiàng)l件下，DRG（受損的或未受損的）內(nèi)組胺受體、P2X家族受體等及通道的表達(dá)會(huì)發(fā)生相應(yīng)變化。在炎性痛狀態(tài)下[11-12]，DRG鈉離子通道（如NaV1.3、NaV1.7～NaV1.9）以及瞬時(shí)感受器電位通道（TRP通道，如TRPV1、TRPA1等）均會(huì)出現(xiàn)顯著的表達(dá)上調(diào)，給予這些通道相應(yīng)的抑制劑或阻滯藥均能夠顯著降低炎癥誘導(dǎo)的疼痛行為學(xué)改變。已有研究證實(shí)，在基因敲除小鼠實(shí)驗(yàn)中，這些通道對(duì)于生理疼痛以及炎癥疼痛的傳遞都發(fā)揮著極為關(guān)鍵的作用[12]。新近研究表明[13]，DRG中衛(wèi)星細(xì)胞分泌的基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1（SDF-1）與降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）能與神經(jīng)元上的趨化因子受體CXCR4結(jié)合，參與疼痛的演變。這些結(jié)果表明，DRG離子通道/受體對(duì)炎性痛有著重要的作用，但對(duì)于廣泛分布于DRG中的GLP-1R的研究尚無文獻(xiàn)報(bào)道，因此本文將研究GLP-1R在慢性炎性痛發(fā)生機(jī)制中的作用，以期為鎮(zhèn)痛藥的開發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Hargreaves熱痛儀（美國Stoeling公司）；Leica CM1950冷凍切片機(jī)（德國Leica公司）；3K30低溫離心機(jī)（美國Sigma公司）；BX-60共聚焦激光顯微鏡（日本Olympus株式會(huì)社）。

1.2 試劑

完全弗氏佐劑（CFA）、GLP-1（粉末狀晶體，批號(hào)：G8048，純度：99.5%）、4′ ，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）和小鼠抗β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）免疫球蛋白G（IgG）均購自美國Sigma公司；小鼠抗神經(jīng)元核抗原（NeuN） IgG和兔抗GLP-1R IgG均購自英國Abcam公司；山羊抗CGRP IgG和Alexa488結(jié)合的驢抗小鼠 IgG均購自美國Invitrogen公司；Alexa594結(jié)合的驢抗兔IgG（美國Jackson Immuno Research公司）；兔抗白細(xì)胞介素6（IL-6）IgG、羊抗IL-1β IgG和小鼠抗TNF-α IgG抗體均購自美國Santa Cruz公司；辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的驢抗小鼠、兔、羊IgG均購自北京中杉金橋生物技建模有限公司；10%十二烷基硫酸鈉（SDS）-聚丙烯酰胺凝膠（美國Bio- Rad公司）；聚偏氟乙烯（PVDF）膜（美國Millipore公司）。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠，♂，體質(zhì)量為220～250 g，是由第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的二級(jí)清潔動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（軍） 2012-0007。所有大鼠均在22～25 ℃的恒定溫度下飼養(yǎng)，每天保證12 h的光照，可自由攝取水和食物。所有的實(shí)驗(yàn)均在第四軍醫(yī)大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)下進(jìn)行。

2 方法

2.1 分組與建模

2.1.1 GLP-1R與慢性炎性痛的相關(guān)性實(shí)驗(yàn) 取大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、生理鹽水1組和CFA1組。正常對(duì)照組大鼠不作任何處理；CFA1組大鼠在乙醚麻醉狀態(tài)下于左后足趾側(cè)注射CFA 50 μL建立慢性炎性痛模型；生理鹽水1組大鼠同法注射等量生理鹽水。

2.1.2 機(jī)制研究實(shí)驗(yàn) 另取大鼠隨機(jī)分為生理鹽水2組、CFA2組和GLP-1組。前2組大鼠分別在乙醚麻醉狀態(tài)下于左后足趾側(cè)注射生理鹽水或CFA 50 μL。GLP-1組大鼠在CFA2組基礎(chǔ)上，建模后第7天腹腔注射GLP-1，給藥量為每天5 ?g/kg（前期研究確定的劑量），每天同一時(shí)刻給藥，生理鹽水2組和CFA2組同時(shí)腹腔注射同等劑量的生理鹽水，均連續(xù)給藥1周。

2.2 熱痛行為學(xué)測(cè)試

采用行為學(xué)測(cè)試方法，測(cè)試前將Hargreaves熱痛儀基礎(chǔ)溫度調(diào)至37 ℃。于建模前1 d（-1 d）、建模當(dāng)天（0 d）和建模后1、3、7、14 d，分別取正常對(duì)照組、生理鹽水1組和CFA1組大鼠各6只，放入罩有玻璃罩的有機(jī)材料檢測(cè)板上，待大鼠適應(yīng)30 min后，將熱光源對(duì)準(zhǔn)大鼠左側(cè)足底并開始計(jì)時(shí)，若大鼠出現(xiàn)縮足、舔足或撤足行為則被視為痛感陽性，否則視為痛感陰性。記錄大鼠的舔足潛伏期，舔足潛伏期的誤差值控制在0.1 s范圍內(nèi)，并且舔足時(shí)間不能超過30 s，以免損傷大鼠后足。同法記錄生理鹽水2組、CFA2組和GLP-1組大鼠建模后8、10、12、14 d的舔足潛伏期。

2.3 免疫熒光組織化學(xué)染色觀察GLP-1R分布

建模后第7天，取CFA1組大鼠4只，腹腔注射水合氯醛（280 mg/kg）麻醉，用200 mL 0.01 mol/L的磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.2～7.4）經(jīng)主動(dòng)脈沖洗血液至肝臟變白，之后灌注含4%多聚甲醛和50%飽和苦味酸的磷酸緩沖液（PB）。灌注完畢后立即取出大鼠腰椎L5 DRG，置于上述相同固定液中常溫?fù)u床后固定1 h，之后移至含30%蔗糖的PB溶液中4 ℃脫水24 h直至組織塊沉底，再經(jīng)恒冷箱切片機(jī)橫切背根節(jié)，片厚15 μm，切片在PBS中漂洗3次（每次10 min）后，分別用一抗[（兔抗GLP-1R IgG、小鼠抗NeuN IgG），（兔抗GLP-1R IgG、山羊抗CGRP IgG），兔抗GLP-1R IgG，稀釋比例均為1 ∶ 200]于4 ℃孵育切片36 h；隨后PBS沖洗3次（每次10 min），滴加對(duì)應(yīng)二抗[（Alexa 594結(jié)合的驢抗兔 IgG、Alexa 488結(jié)合的驢抗小鼠 IgG、DAPI）、Alexa 594結(jié)合的驢抗兔 IgG、Alexa 488結(jié)合的驢抗羊 IgG、DAPI）、（Alexa 594結(jié)合的驢抗兔 IgG、IB4、DAPI），稀釋比例均為1 ∶ 500]，室溫下孵育4 h；PBS沖洗3次（每次10 min）后，在暗光下裱片，待自然風(fēng)干后使用熒光封片液封片，激光共聚焦顯微鏡拍照，所有的切片都在相同染色和拍照條件（紅光波長(zhǎng)：559 nm，綠光波長(zhǎng)：488 nm，藍(lán)光波長(zhǎng)：405 nm）下進(jìn)行。

2.4 Western blot法檢測(cè)GLP-1R、IL-6、IL-1β和TNF- α蛋白表達(dá)

建模后第7天，腹腔注射水合氯醛 （280 mg/kg） 麻醉大鼠，用200 mL 4 ℃預(yù)冷的0.01 mol/L的PBS經(jīng)左心室灌注，沖血完畢后，將大鼠于冰塊上快速取出腰椎L5 DRG，加入含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的裂解液中，超聲勻漿機(jī)將組織超聲（1.5 Hz，間隔30 s）勻漿裂解，將勻漿裂解液移入1.5 mL離心管，4 ℃下12 000 r/min離心5 min，吸取上清液，用BCA法進(jìn)行蛋白濃度測(cè)定，確定含10 μg蛋白的上樣量。蛋白樣品采用10% SDS-聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳分離，加入預(yù)染標(biāo)準(zhǔn)物marker，根據(jù)預(yù)染marker的位置確定所需蛋白GLP-1R及β-actin 的位置，將膠上蛋白電轉(zhuǎn)到PVDF膜上進(jìn)行免疫雜交反應(yīng)（PVDF膜預(yù)先在甲醇中浸泡1 min）。用含5%脫脂奶粉的封閉液封閉2 h，然后加入相應(yīng)抗體[兔抗GLP-1R IgG（稀釋比例為1 ∶ 200）、兔抗IL-6 IgG（稀釋比例為1 ∶ 500）、小鼠抗IL-1β IgG（稀釋比例為1 ∶ 500）、小鼠抗TNF-α IgG（稀釋比例為1 ∶ 500）、小鼠抗β-actin IgG（稀釋比例為1 ∶ 500）]，4 ℃孵育過夜后使用TBST緩沖液洗膜3次（每次10 min），分別加入HRP標(biāo)記的驢抗兔、小鼠IgG（稀釋比例為1 ∶ 1 000）室溫下孵育1 h；TBST洗膜3次（每次10 min）后，使用化學(xué)發(fā)光液激發(fā)熒光并在Bio-Rad成像系統(tǒng)中進(jìn)行熒光條帶的掃描，分析光密度（OD）值，以目標(biāo)蛋白與β-actin的OD值之比計(jì)算各組大鼠目標(biāo)蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以x±s表示。采用單因素方差分析比較各組大鼠熱痛行為學(xué)數(shù)據(jù)及蛋白定量數(shù)據(jù)的差異，邦弗朗尼（Bonferroni）事后檢定/檢驗(yàn)法檢驗(yàn)組間差異。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠建模后足底的熱痛行為學(xué)變化

與正常對(duì)照組和生理鹽水1組比較，CFA1組大鼠建模后1、3、7、14 d的舔足潛伏期明顯縮短（P<0.01），而-1、0 d的舔足潛伏期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)的舔足潛伏期見表1。

3.2 GLP-1R的分布

免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示，GLP-1R與NeuN雙重標(biāo)記明顯（見圖1A），GLP-1R與CGRP神經(jīng)元雙重標(biāo)記明顯（見圖1B），而GLP-1R在IB4陽性神經(jīng)元中未見明顯雙重標(biāo)記（見圖1C）。GLP-1R與DRG神經(jīng)元免疫熒光雙重標(biāo)記染色圖見圖1。

3.3 大鼠建模后DRG上GLP-1R蛋白表達(dá)水平

與正常對(duì)照組和生理鹽水1組比較，CFA1組大鼠建模后1、3、7、14 d的DRG上GLP-1R蛋白表達(dá)水平明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。各組大鼠DRG上GLP-1R蛋白表達(dá)的電泳圖見圖2，相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)結(jié)果見表2。

3.4 GLP-1干預(yù)后大鼠痛感行為學(xué)變化

與生理鹽水2組比較，CFA2組大鼠建模后8、10、12、14 d的舔足潛伏期明顯縮短（P<0.01）。與CFA2組比較，GLP-1組大鼠建模后8、10、12、14 d的舔足潛伏期明顯延長(zhǎng)（P<0.05或P<0.01）。GLP-1干預(yù)后各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)的舔足潛伏期見表3。

3.5 GLP-1干預(yù)后大鼠DRG上GLP-1R、IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白表達(dá)水平

與生理鹽水2組比較，CFA2組大鼠建模后7 d DRG上GLP-1R蛋白表達(dá)水平明顯降低，IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白表達(dá)水平明顯提高（P<0.01）。與CFA2組比較，GLP-1組大鼠建模后7 d DRG上GLP-1R蛋白表達(dá)水平明顯提高，IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.05或P<0.01）。GLP-1干預(yù)后各組大鼠DRG上GLP-1R、IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白表達(dá)的電泳圖見圖3，相對(duì)表達(dá)量的檢測(cè)結(jié)果見表4。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)通過足底注射CFA構(gòu)建慢性炎性痛模型，由結(jié)果可觀察到CFA可以明顯誘導(dǎo)大鼠建模側(cè)后足熱痛敏；之后通過免疫熒光組織化學(xué)染色觀察到在DRG中GLP-1R分子與NeuN存在大量共存，并且在DRG神經(jīng)元中，GLP-1R分子主要表達(dá)于CGRP陽性神經(jīng)元。Western blot結(jié)果顯示，CFA可以明顯誘導(dǎo)DRG中GLP-1R分子的低表達(dá)，給予GLP-1可以觀察到DRG中GLP-1R分子的表達(dá)水平明顯增加，并且TNF-α、IL-6及IL-1β表達(dá)水平明顯降低。以上結(jié)果提示，GLP-1R分子在慢性炎性痛的發(fā)生與發(fā)展過程中扮演者重要的角色，因此，激活GLP-1R分子有望成為疼痛治療的新靶點(diǎn)，為鎮(zhèn)痛新藥的研制提供了參考。

既往研究顯示，當(dāng)外周組織受到損傷或者炎癥反應(yīng)的持續(xù)刺激時(shí)，損傷區(qū)域會(huì)釋放大量的炎癥因子，如組胺、促炎癥細(xì)胞因子（如IL-1β、IL-6、TNF-α等）以及趨化因子（CXCL家族）等，這些炎癥因子會(huì)進(jìn)一步引起DRG中神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的活化，激活的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)不斷向相鄰的神經(jīng)元釋放炎癥因子，促進(jìn)DRG中神經(jīng)元所處的微環(huán)境炎癥化，改變神經(jīng)元的感受性，促進(jìn)疼痛的發(fā)生[14-16]。本研究中，模型大鼠DRG中TNF-α、IL-6及IL- 1β水平明顯降低，提示GLP-1R分子可能介導(dǎo)DRG中炎癥反應(yīng)，加劇了慢性痛信號(hào)的傳遞，但具體的機(jī)制還需進(jìn)一步探究。

亦有研究表明，GLP-1R是一種內(nèi)源性鎮(zhèn)痛受體，其在脊髓主要表達(dá)于小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元上[9]。當(dāng)GLP-1與GLP-1R結(jié)合時(shí)，相當(dāng)于內(nèi)源性鎮(zhèn)痛系統(tǒng)被激活，達(dá)到鎮(zhèn)痛的目的。新近研究證實(shí)，鞘內(nèi)給予GLP-1R的激動(dòng)藥WB4-24可以有效緩解大鼠慢性痛行為，其作用的機(jī)制可能與β-內(nèi)啡肽的釋放有關(guān)[10]。在本研究中，GLP-1R主要表達(dá)于DRG上的CGRP陽性神經(jīng)元上，而CGRP陽性神經(jīng)元作為DRG中的肽能小神經(jīng)元，參與疼痛的發(fā)生與發(fā)展，由此可見，GLP-1R分子的下調(diào)可能與DRG中肽能神經(jīng)元的功能改變密切相關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，給予GLP-1可以觀察到DRG中GLP-1R的表達(dá)水平明顯增加，再結(jié)合促炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-6及IL-1β表達(dá)水平的明顯降低，提示上調(diào)GLP-1R的表達(dá)對(duì)逆轉(zhuǎn)DRG中肽能小神經(jīng)元的功能變化具有十分重要的意義。

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（收稿日期：2018-03-08 修回日期：2018-08-03）

（編輯：鄒麗娟）