羅小葉，王曉丹，邱樹毅*

（1.貴州大學(xué) 釀酒與食品工程學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2.貴州大學(xué) 貴州省發(fā)酵工程與生物制藥重點實驗室，貴州 貴陽 550025）

醬香大曲是一種高溫大曲，通過傳統(tǒng)固態(tài)發(fā)酵的方法，在65℃條件下，用小麥加母曲經(jīng)過60 d的發(fā)酵自然形成的一個含有多種微生物體系的發(fā)酵制品[1-3]。多種微生物富集在大曲里在制曲過程中自然生長起來，整個大曲微生物復(fù)雜而多樣。目前采用純培養(yǎng)技術(shù)及分子生物學(xué)手段對茅臺大曲中的細(xì)菌、霉菌及酵母進(jìn)行了深入的研究，證實了細(xì)菌的生香動力、霉菌的糖化主力以及酵母的酒醅發(fā)酵原動力的作用，詮釋了大曲中微生物在大曲酒的品質(zhì)及風(fēng)味呈現(xiàn)方面的重要作用[4-6]。

在大曲中“菌系”中的放線菌是一類具有高鳥嘌呤（G）和胞嘧啶（C）含量的革蘭氏陽性細(xì)菌，其因產(chǎn)生豐富的活性次生代謝產(chǎn)物而著名，是一種重要的微生物類群。對于傳統(tǒng)白酒生產(chǎn)領(lǐng)域有關(guān)放線菌研究，主要集中在白酒發(fā)酵過程中酒醅、大曲、窖泥、發(fā)酵池、曲房和窖房空氣中放線菌的分離及鑒定，如崔福來等[7-9]對酒醅中的放線菌進(jìn)行分離篩選研究。并有少量文獻(xiàn)如王濤等[10-11]對釀造相關(guān)的放線菌揮發(fā)性物質(zhì)及代謝酶活性進(jìn)行了研究報道。放線菌作為抗生素的主要生產(chǎn)菌種，在其他領(lǐng)域的研究較為深入，但作為白酒釀造的四大菌類之一，放線菌某些獨(dú)特代謝產(chǎn)物具有土味等特征，對白酒風(fēng)味的影響不可忽視[12]，在白酒釀造過程中影響著酒體的風(fēng)味、風(fēng)格，相對于其他三大類微生物，還沒被引起足夠的重視。目前，研究人員僅對醬香大曲生產(chǎn)過程中周圍土壤及糟醅中的放線菌進(jìn)行了研究，對醬香大曲中放線菌的種類及功能鮮有研究報道。

本研究旨在建立了一種有效的放線菌分離篩選方法，通過形態(tài)學(xué)、生理生化及26S rDNA分子生物學(xué)對篩選的放線菌進(jìn)行了鑒定，并采用大曲酶系酶活力測定方法對其酶活性質(zhì)及通過固態(tài)微萃取與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（gas chromatography-mass spectrometer，GC-MS）技術(shù)對發(fā)酵代謝產(chǎn)物成分進(jìn)行了分析，為了解放線菌在醬香大曲中的作用奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料

醬香大曲來源于貴州茅臺鎮(zhèn)某醬香型白酒企業(yè)車間生產(chǎn)用高溫大曲，大曲樣品為已經(jīng)在車間貯存半年且準(zhǔn)備用于生產(chǎn)的已經(jīng)粉碎至20目的曲粉，在混合好的曲粉袋中按上、中、下層分別隨機(jī)取20個樣品，再經(jīng)過充分混合后，迅速放入無菌保鮮袋中，于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 試劑

細(xì)菌基因組脫氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid，DNA）提取試劑盒：美國BIOMIGA公司；萘啶酮酸、制霉菌素：上海源葉生物科技有限公司；新生霉素：北京索萊寶科技有限公司；其他試劑均國產(chǎn)分析純。

1.1.3 培養(yǎng)基

分離培養(yǎng)基采用高氏一號培養(yǎng)基（M1）、國際鏈霉菌計劃（international streptomyces project，ISP）指定的鏈霉菌固體培養(yǎng)基ISP2（M2）、ISP3培養(yǎng)基（M3）、ISP4培養(yǎng)基（M4）、ISP5培養(yǎng)基（M5）、R2A培養(yǎng)基（M6）、淀粉-甘油培養(yǎng)基（M7）、GYM培養(yǎng)基（M8）、GTY培養(yǎng)基（M9）、HV培養(yǎng)基（M10）。上述培養(yǎng)基均自配，121℃滅菌20 min。

純化及菌種保藏培養(yǎng)基采用ISP2培養(yǎng)基：酵母提取物4 g，麥芽提取物1 g，葡萄糖4 g及瓊脂15 g，用1 L蒸餾水溶解，然后用5 mol/L NaOH溶液調(diào)pH值為7.3，121℃滅菌20 min。

液體發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖10 g、酵母膏4 g、蛋白胨4 g、酵母浸粉4 g、K2HPO44 g、KH2PO42 g、MgSO4·7H2O 0.5 g，用1L蒸餾水溶解，然后用5mol/LNaOH溶液調(diào)pH值為7.2～7.4，然后121℃滅菌20 min。

生理生化實驗培養(yǎng)基：明膠培養(yǎng)基、淀粉瓊脂培養(yǎng)基、硝酸鹽液體培養(yǎng)基、纖維素分解培養(yǎng)基。

酶活力測定培養(yǎng)基采用麩皮培養(yǎng)基：稱取麩皮15 g，用15 mL蒸餾水?dāng)嚢杈鶆?，然?21℃滅菌20 min。

固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)香培養(yǎng)基：將粉碎的高粱與未粉碎的高粱按3∶1（g∶g）進(jìn)行混合，然后將混合的高粱與粉碎的小麥按1∶1（g∶g）進(jìn)行混合，加入40%的水混合均勻，潤糧24h后用瓶進(jìn)行分裝（50g/瓶），用8層紗布進(jìn)行封口，121℃滅菌20min。

1.2 儀器與設(shè)備

庫爾特BECKMAN離心機(jī)：美國貝克曼庫爾特中國有限公司；Flex cycler多功能PCR儀：德國耶拿分析儀器股份公司；DYCP44P電泳儀：北京欣惠澤奧科技有限公司；ZF25凝膠成像儀：上海方畦儀器有限公司；S3400N掃描電鏡：日本日立有限公司；FD-1C-80冷凍干燥機(jī)：上海喬躍電子有限公司；HP6890/5975C氣質(zhì)聯(lián)用儀：美國安捷倫公司。

1.3 方法

1.3.1 篩選方法

（1）樣品預(yù)處理

干熱處理（a1）：用滅菌的燒杯稱取10 g茅臺大曲樣品，然后將燒杯封口并置于100℃烘箱中加熱1 h；最后將大曲樣品放入含有90 mL無菌稀釋液并帶有玻璃珠的三角瓶中振蕩培養(yǎng)30 min備用；

濕熱處理（a2）：稱取10 g茅臺大曲樣品放入含有90 mL無菌稀釋液并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，在50℃恒溫水浴鍋中熱處理10 min，再振蕩培養(yǎng)30 min備用；

先干熱后濕熱處理（a3）：用滅菌的燒杯稱取10 g茅臺大曲樣品，然后將燒杯封口并置于100℃烘箱中加熱1 h，再將大曲樣品放入含有90 mL無菌稀釋液并帶有玻璃珠的三角瓶中，在50℃恒溫水浴鍋中熱處理10 min，最后振蕩培養(yǎng)30 min備用；

CaCO3富集培養(yǎng)（a4）：按照大曲樣品與CaCO3為10∶1（g∶g）的比例在無菌燒杯中混合，添加適量無菌水，在濕度為30%、溫度為28℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，然后放入含有90 mL無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中振蕩培養(yǎng)30 min后備用；

先CaCO3富集培養(yǎng)后再進(jìn)行濕熱處理（a5）：在a4處理基礎(chǔ)上在振蕩培養(yǎng)之前將三角瓶放在50℃恒溫水浴鍋中熱處理10 min，再振蕩培養(yǎng)30 min備用。

（2）分離培養(yǎng)基的選擇

在28℃條件下，比較5種預(yù)處理方法的樣品在10種分離培養(yǎng)基上的生長狀況。

（3）稀釋液的篩選

分別選擇無菌生理鹽水（質(zhì)量濃度為9 g/L）及羧甲基纖維素鈉（carboxyl methyl cellulose-Na，CMC-Na）水溶液（質(zhì)量濃度為2.5 g/L）作為稀釋液[13]。

（4）抑制劑的添加

表1 抑制劑的添加組合Table 1 Addition combinations of inhibitors

用0.1 mol/L NaOH溶液將萘啶酮酸配制成質(zhì)量濃度為50 mg/L（A1）、100 mg/L（A2）及150 mg/L（A3）的溶液；用二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）溶液將制霉菌素配制成質(zhì)量濃度為20 mg/L（B1）、40 mg/L（B2）及60 mg/L（B3）的溶液；用無菌水將新生霉素配制成質(zhì)量濃度為30 mg/L（C1）、40 mg/L（C2）及50 mg/L（C3）的溶液；用無菌水將重鉻酸鉀配制成質(zhì)量濃度為25 mg/L（D1）、50 mg/L（D2）及75 mg/L（D3）的溶液。同時，抑制劑均用0.22 μm的無菌濾膜過濾，然后加入滅菌培養(yǎng)基中混勻，倒入培養(yǎng)皿中[14]。其中，抑制劑的添加組合如表1所示。

（5）分離涂布的方法

稱取10 g茅臺大曲樣品加入含有90 mL無菌稀釋液并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，將三角燒杯置于28℃、200r/min的恒溫水浴鍋中振蕩培養(yǎng)30 min。然后取1 mL上述樣品懸浮液進(jìn)行10倍梯度稀釋，分別取0.2 mL各稀釋度菌懸液涂布于分離培養(yǎng)基上，將培養(yǎng)基置于28℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，并進(jìn)行分離純化，分離得到的菌株用ISP2培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)，并在4℃冰箱中保藏備用。

1.3.2 菌種的鑒定

（1）形態(tài)培養(yǎng)特征觀察

菌株的培養(yǎng)特征觀察參照ISP中有關(guān)放線菌的培養(yǎng)特征進(jìn)行觀察[15]。

（2）掃描電鏡觀察

用液體培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)48 h后，離心后棄上清，加入1.5 mL 0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer solution，PBS）洗滌菌體3次；向菌體沉淀中加入2.5%戊二醛固定液1.5 mL，4℃固定過夜；用體積分?jǐn)?shù)30%、50%、70%、90%的叔丁醇/乙醇混合液進(jìn)行脫水，每次5 min，再用100%叔丁醇脫水2次，每次5 min；然后冷凍干燥4 h，干燥后的粉末樣品鍍金膜，用掃描電鏡進(jìn)行觀察[16-17]。

（3）生理生化特征鑒定

對放線菌進(jìn)行明膠液化實驗、淀粉水解實驗、碳源利用實驗、纖維素分解實驗、硝酸鹽實驗及牛奶凝固與胨化實驗，并參照《鏈霉菌鑒定手冊》推薦的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基和常用生理生化方法培養(yǎng)、觀察和記錄[14]。

（4）分子生物學(xué)鑒定

采用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取DNA，以F（5'-CCTACGGGAGGCAGCAG-3'）及R（5'-CCGTCAATTCMTTTRAGT-3'）為引物進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechain reaction，PCR）擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增程序為94℃預(yù)變性5 min，然后94℃變性1 min，56℃退火1 min，72℃延伸1.5 min，共30個循環(huán)，最后72℃延伸9 min；取2 μLPCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠檢測DNA提取效果；PCR產(chǎn)物在上海立菲生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行測序；將測序數(shù)據(jù)在美國國家生物技術(shù)信息中心（national center of biotechnologyinformation，NCBI）數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行同源序列搜索，用MEGA5.05軟件進(jìn)行多序列比對，然后用鄰接法（neighbor-joining，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.3.3 放線菌粗酶液的制備及酶活力的測定

（1）粗酶液的制備

用接菌環(huán)取兩環(huán)活化的菌株接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，28℃培養(yǎng)48 h，然后以10%的接種量接種到麩皮培養(yǎng)基中，再28 ℃培養(yǎng)5 d，所得培養(yǎng)物與水按照1∶10（g∶mL）的比例混合攪勻，40℃水浴1 h，每隔15 min攪拌1次，最后進(jìn)行過濾，所得濾液為粗酶液。

（2）酶活力的測定

糖化型淀粉酶與纖維素酶活力的測定采用3,5-二硝基水楊酸（dinitrosalicylic acid，DNS）法；酸性蛋白酶活力的測定根據(jù)商業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10317—1999《蛋白酶活力測定法》中的方法進(jìn)行測定；脂肪酶活力的測定根據(jù)國標(biāo)GB/T 23535—2009《脂肪酶制劑》中的動態(tài)滴定法進(jìn)行測定；果膠酶活力的測定根據(jù)輕工業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)QB1502—1992《食品添加劑——果膠酶制劑》中的方法進(jìn)行測定。

糖化型淀粉酶酶活定義：在40℃、pH4.6條件下，1 h水解淀粉產(chǎn)生1 mg葡萄糖作為一個酶活力單位。纖維素酶酶活定義：50℃條件下，1 min催化纖維素水解成1 μmol葡萄糖的酶量為一個酶活力單位。蛋白酶酶活定義：在40℃下1 min水解酪蛋白產(chǎn)生1 μg酪氨酸，定義為1個蛋白酶活力單位。脂肪酶酶活定義：在40℃，pH7.5條件下，粗酶液1 min水解底物生成1 μmol可滴定的脂肪酸為一個酶活力單位。果膠酶酶活定義：在50℃、pH3.5的條件下，粗酶液1 h分解果膠產(chǎn)生l mg半乳糖醛酸為一個酶活單位。

1.3.4 放線菌固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的香氣成分測定

放線菌固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的香氣成分測定采用氣質(zhì)聯(lián)用法。用接菌環(huán)取兩環(huán)活化的菌株接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，28℃培養(yǎng)48 h，以10%的接種量接入高粱與小麥固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，28℃培養(yǎng)7 d。

氣相色譜條件：色譜柱為Zebron ZB-5MSI彈性石英毛細(xì)管柱（30 cm×0.25 mm×0.25 μm），柱溫為40℃，保留時間為2 min，以5℃/min升溫至270℃，運(yùn)行時間為48 min，汽化室溫度為250℃，載氣為高純氦氣（He）（99.999%），載氣流量為1 mL/min，不分流進(jìn)樣，溶劑延遲時間為1 min。

質(zhì)譜條件：離子源為電子電離（electronic ionization，EI）源，離子源溫度為230℃，四極桿溫度為150℃，電子能量為70 eV，發(fā)射電流為34.6 μA，倍增器電壓為1 294 V；接口溫度為280℃，質(zhì)量范圍為20～450 amu，用峰面積歸一化法測定各化學(xué)成分的相對含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 分離篩選條件的確定

5種預(yù)處理方法的樣品在10種分離培養(yǎng)基上，28℃條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)果表明在常溫條件下先干熱處理再濕熱處理能夠有效抑制分離平板上非目的菌主要是細(xì)菌的生長，大大促進(jìn)分離平板上放線菌的生長。高氏一號培養(yǎng)基（M1）、ISP2培養(yǎng)基（M2）、淀粉-甘油培養(yǎng)基（M7）上均能生長出具有放線菌菌落形態(tài)特征的菌落，其余各培養(yǎng)基及各預(yù)處理方法均未見任何菌落生長。

2.2 放線菌的鑒定

從醬香大曲中分離純化出3株具有放線菌菌落形態(tài)特征菌株，本實驗室保藏編號分別為FBKL4.001、FBKL4.002、FBKL4.003。菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)特征、生理生化實驗及分子生物學(xué)鑒定。

2.2.1 形態(tài)學(xué)特征

由3株菌單菌落形態(tài)及顯微鏡特征（圖1）可知，F(xiàn)BKL4.001菌落形狀缺刻狀圓形，基內(nèi)菌絲淡黃色，氣生菌絲白色，菌落凸起、干燥致密，無可溶性色素產(chǎn)生；FBKL4.002菌落形狀缺刻狀圓形，基內(nèi)菌絲淡灰色，氣生菌絲白色，菌落凸起、干燥致密，無可溶性色素產(chǎn)生；FBKL4.003菌落形狀橢圓形，基內(nèi)菌絲淡黃色，氣生菌絲白色，菌落中間凸起半干燥，無可溶性色素產(chǎn)生。3株菌在顯微鏡下的特征結(jié)合《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》，F(xiàn)BKL4.001、FBKL4.002、FBKL4.003菌絲分散度好，相互交叉重疊，菌絲表面光滑飽滿，有明顯孢子鏈[15]，F(xiàn)BKL4.001和FBKL4.002的孢子鏈較為相似。

圖1 3株菌株的菌落形態(tài)及顯微鏡特征Fig.1 Colonial morphology and microscope features of 3 strains

2.2.2 生理生化特征

各菌株的生理生化試驗結(jié)果見表2。

表2 3株菌株的生理生化特征Table 2 Physiological and biochemical property of 3 strains

由表2可知，3株菌株能利用碳源范圍較廣，能利用葡萄糖、蔗糖、甘露醇、麥芽糖、棉子糖等，F(xiàn)BKL4.003能使淀粉水解，但不能分解纖維素，明膠液化實驗中所有菌株使明膠液化，使牛奶胨化產(chǎn)酸。

2.2.3 分子生物學(xué)鑒定

以3株菌株基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果見圖2。

圖2 3株菌株16S rDNA PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖Fig.2 Electrophoretogram of 16S rDNA PCR amplification products of 3 strains

由圖2可知，3株菌株P(guān)CR擴(kuò)增結(jié)果在400 bp處出現(xiàn)明顯條帶。基因序列測定后，測序結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行同源序列搜索（BLAST search），用MEGA5.05軟件進(jìn)行多序列比對，鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹如圖3。

圖3 菌株FBKL4.004的16S rDNA基因序列系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.3 Phylogenetic tree of strain FBKL4.004 based on 16S rDNA gene sequence

根據(jù)《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》、《鏈霉菌鑒定手冊》，結(jié)合菌株形態(tài)、生理生化特征及分子生物學(xué)比對分析，F(xiàn)BKL4.001、FBKL4.002鑒定為可可鏈霉菌（Streptomyces cacaoi）；FBKL4.003為沙阿霉素鏈霉菌（Streptomyces zaomyceticus）。Streptomyces cacaoi最先是從尼日利亞發(fā)霉的可可豆發(fā)現(xiàn)的，后來從海洋沉積物中也能分離到，且該菌一些代謝產(chǎn)物可提供有治療價值的先導(dǎo)化合物，其變種發(fā)酵產(chǎn)生多氧霉素B（polyoxin B）[18]，抗生素KA08[19-20]。Streptomyces zaomyceticus最先是從日本的沙阿山（Mt.Zao）的土壤中分離到，可產(chǎn)生一種新的雙功能酶幾丁質(zhì)酶并應(yīng)用在殼寡糖抗氧化劑生產(chǎn)中[21-22]。

2.3 放線菌的產(chǎn)酶特性

表3 3株菌株酶活力測定結(jié)果Table 3 Determination results of enzymatic activity of 3 strains

由表3可看出，各種酶的酶活力差異較大，菌株FBKL4.001、FBKL4.002、FBKL4.003的果膠酶活力均為最高，F(xiàn)BKL4.001和FBKL4.003所產(chǎn)果膠酶均高于醬香大曲細(xì)菌所產(chǎn)果膠酶最高酶活（259 U/g）和霉菌所產(chǎn)果膠酶最高酶活（260 U/g）[23]，表明放線菌也能產(chǎn)生酶活力水平相對較高的果膠酶；其次是糖化酶活力，但3株菌糖化酶酶活均低于細(xì)菌和霉菌所產(chǎn)果膠酶酶活。其中菌株FBKL4003不產(chǎn)脂肪酶，3株菌剩余酶活種類的酶活力相對較弱，其中纖維素酶活力最弱，說明該3株放線菌對纖維素的分解能力比較弱。

2.4 放線菌固態(tài)發(fā)酵香氣成分分析

對從醬香大曲中分離得到的3株放線菌進(jìn)行了固態(tài)發(fā)酵，并通過固態(tài)微萃取與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對其揮發(fā)性成分組成及成分風(fēng)味進(jìn)行了測定，結(jié)果見圖4及表4。從圖4及表4可以看出，研究報道從釀造環(huán)境、土壤、空氣等分離出的放線菌固態(tài)發(fā)酵揮發(fā)性成分分析主要以萜烯類物質(zhì)為主[10-11]，而從大曲中分離得到的菌株FBKL4.001固態(tài)發(fā)酵揮發(fā)性成分組成看出，代謝產(chǎn)物種類豐富，主要以酯類物質(zhì)為主，占62.80%，其次包括13.86%醇類、6.17%萜烯類物質(zhì)，此外該菌還能代謝產(chǎn)生5.39%吡嗪類物質(zhì)。菌株FBKL4.003揮發(fā)性成分組成與菌株FBKL4.001相似，主要以酯類物質(zhì)為主，占46.77%，其次萜烯類物質(zhì)占23%，也能產(chǎn)生4.49%吡嗪類物質(zhì)，此外能產(chǎn)生少量酮類、醛類、酚類等代謝產(chǎn)物。

圖4 3株菌株固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物揮發(fā)性成分總離子流色譜圖Fig.4 Total ions chromatogram of the volatile components of solid-state fermentation products of 3 strains

表4 3株菌株揮發(fā)性成分組成分析Table 4 Composition analysis of volatile components produced by 3 strains

3 結(jié)論

本研究建立了一種有效的分離放線菌的方法，從醬香大曲中分離篩選出3株放線菌，其中FBKL4.001、FBKL4.002為可可鏈霉菌（Streptomyces cacaoi）、FBKL4.003為沙阿霉素鏈霉菌（Streptomyces zaomyceticus）。通過對其酶活和固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物揮發(fā)性成分進(jìn)行探討，發(fā)現(xiàn)放線菌產(chǎn)果膠酶較為突出，分別高達(dá)299.66 U/g、216.52 U/g、294.86U/g；同時，通過對其固態(tài)發(fā)酵揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)酯類物質(zhì)含量最高，分別占62.80%、59.23%、46.77%；均能代謝產(chǎn)生吡嗪類物質(zhì)，此外能產(chǎn)生少量酮類、醛類、酚類等物質(zhì)。本研究為發(fā)現(xiàn)固態(tài)發(fā)酵更多的微生物資源及其在白酒發(fā)酵生產(chǎn)中的作用及應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。