賈 瑋，王 菡，石 琳，許秀麗，儲曉剛,

(1.陜西科技大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院，陜西 西安 710021；2.中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院，北京 100123)

隨著許多食品安全事件的發(fā)生，食品安全問題日益受到關(guān)注，我國《“十三五”國家食品安全規(guī)劃》為進(jìn)一步提升食品安全標(biāo)準(zhǔn)管理水平，深入開展了農(nóng)獸藥殘留綜合治理工作，其中獸藥殘留問題是我國食品藥品監(jiān)管部門重點(diǎn)控制的問題之一[1-2]。大環(huán)內(nèi)酯類藥物(Macrolide drugs，MALs)是獸藥中非常重要的一類廣譜抗菌性抗生素，普遍應(yīng)用于治療豬、羊、牛和家禽的呼吸性及傳染性疾病，或在低劑量下作為飼料添加劑促進(jìn)動物生長發(fā)育[3]。但長期食用會導(dǎo)致大環(huán)內(nèi)酯類藥物及其代謝物在動物組織及器官內(nèi)蓄積或儲存，當(dāng)該藥物在人體內(nèi)累積達(dá)一定濃度時，可引起胃腸道不良反應(yīng)和耳蝸神經(jīng)損害，嚴(yán)重者還會造成肝腎的損傷[4-5]，此外，食品中的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留不僅易造成致敏和毒性反應(yīng)，致使細(xì)菌耐藥性升高，引起攜帶耐藥因子菌株的擴(kuò)散[6-7]，殘留的藥物進(jìn)入環(huán)境中還會導(dǎo)致嚴(yán)重的環(huán)境問題[8]。歐盟委員會[9]、我國農(nóng)業(yè)部[10]、美國[11]、日本[12]等均對肉類食品中的大環(huán)內(nèi)酯類藥物及其最大殘留限量(MRL)進(jìn)行了限制(見表1)，但各國監(jiān)管機(jī)構(gòu)均未發(fā)布針對大環(huán)內(nèi)酯類藥物代謝產(chǎn)物的分析方法。開展動物源性食品中大環(huán)內(nèi)酯類藥物及其代謝產(chǎn)物殘留的監(jiān)測工作可為制定和完善國家標(biāo)準(zhǔn)提供參考，對于保障肉類食品的食用安全，保障人類健康及肉類食品產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。本文介紹了大環(huán)內(nèi)酯類獸藥分析檢測的背景現(xiàn)狀，以及大環(huán)內(nèi)酯類藥物進(jìn)入畜禽類動物體內(nèi)形成的代謝產(chǎn)物及其分布部位，對國內(nèi)外肉類食品中大環(huán)內(nèi)酯類獸藥殘留的前處理方法及檢測方法進(jìn)行研究與探討，同時對大環(huán)內(nèi)酯類藥物及其代謝產(chǎn)物殘留分析的研究方向進(jìn)行了展望。

表1 各國及地區(qū)對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的最大殘留限量規(guī)定[9-12]Table 1 MRLs of macrolides in different countries and regions[9-12] w/(μg·kg-1)

EU:歐盟；CHN:中國；USA:美國；JPN:日本

1 大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留檢測研究現(xiàn)狀

目前在Web of science數(shù)據(jù)庫中，以macrolide(and) detection(or) veterinary drugs(and) detection為主題共檢索出10 835篇文獻(xiàn)，近5年約占29%，如圖1A所示。在中國知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫中，以大環(huán)內(nèi)酯為檢索詞全文檢索，共檢索出10 640篇，近5年約占44%，如圖1B所示。總體上，近10年國內(nèi)外對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的研究均明顯增多，近5年國內(nèi)外有關(guān)大環(huán)內(nèi)酯類藥物研究的文獻(xiàn)比例均較高，表明大環(huán)內(nèi)酯類藥物正引起人們的日益關(guān)注。

2 大環(huán)內(nèi)酯類藥物代謝產(chǎn)物及其分布

獸藥殘留是指給動物使用獸藥后，蓄積或貯存在動物細(xì)胞、組織或器官內(nèi)的藥物原形、代謝產(chǎn)物和藥物雜質(zhì)[13]。大環(huán)內(nèi)酯類藥物進(jìn)入動物機(jī)體后，經(jīng)腸胃的消化會產(chǎn)生復(fù)雜的代謝產(chǎn)物，代謝物保留了原有的活性基團(tuán)，仍具有與原藥相似的抗菌活性，部分代謝產(chǎn)物的潛在危害甚至高于原藥形式。藥物原形和代謝產(chǎn)物通常以游離或結(jié)合的形式殘留在畜禽產(chǎn)品中[14]。目前國內(nèi)外對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的研究多為原藥檢測，對其代謝物的檢測報(bào)道較少。為檢測食品中的大環(huán)內(nèi)酯類獸藥殘留總量，需對大環(huán)內(nèi)酯類藥物代謝物及其分布進(jìn)行研究。常見的大環(huán)內(nèi)酯類藥物有泰樂菌素、替米考星、西地霉素、紅霉素、竹桃霉素、螺旋霉素、吉他霉素、交沙霉素等。

西地霉素在機(jī)體內(nèi)易發(fā)生代謝，代謝物有20多種，主要為蘭卡殺菌素C、蘭卡殺菌醇和蘭卡殺菌醇A。西地霉素原藥和代謝產(chǎn)物在動物機(jī)體內(nèi)的滯留期短，畜類肝中的藥物殘留最高，肌肉和脂肪中未檢出殘留[18]。紅霉素廣泛分布于各種組織及體液中，并以在膽汁和肝臟中的含量最高，大部分藥物在肝臟代謝[19]，主要代謝途徑為脫氧糖胺的N-去甲基化,代謝物主要為脫水紅霉素A和紅霉素A烯醇醚等[20]。竹桃霉素內(nèi)服一般用三乙酰竹桃霉素，三乙酰竹桃霉素可在動物機(jī)體內(nèi)代謝，而竹桃霉素在體內(nèi)不代謝，在大部分組織如肝、腎中可檢測到殘留物，主要代謝產(chǎn)物為醋竹桃霉素。因此，檢測大環(huán)內(nèi)酯類藥物的代謝物對監(jiān)控此類藥物殘留更具實(shí)際意義。

螺旋霉素經(jīng)機(jī)體吸收后廣泛分布于體內(nèi)，主要代謝產(chǎn)物為新螺旋霉素。螺旋霉素于肝臟代謝，在動物的肝和腎中殘留最高[21]。吉他霉素的機(jī)體吸收良好，廣泛分布于主要的臟器，尤其以肝臟和腎臟中的濃度最高，主要經(jīng)肝膽系統(tǒng)排泄，在膽汁和排泄物中的濃度高，少量經(jīng)腎臟排泄。吉他霉素的代謝途徑為羥化，其在腸道吸收快，釋出也快，因此是在動物組織中殘留量最低的一種大環(huán)內(nèi)酯類藥物。交沙霉素機(jī)體吸收迅速，殘留物在組織和臟器中濃度高，特別是在膽汁和肺中濃度較高，主要經(jīng)膽汁排泄[22]。

目前為止，僅有少量文獻(xiàn)對同時檢測大環(huán)內(nèi)酯類抗生素及其代謝物進(jìn)行報(bào)道[23-25]。因此，有必要建立多殘留分析方法測定肉類食品中大環(huán)內(nèi)酯類藥物及其代謝產(chǎn)物的殘留。

3 大環(huán)內(nèi)酯類藥物及其代謝產(chǎn)物的分析方法

3.1 樣品前處理

為制備適用于色譜或液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)法的供試液，需對樣品進(jìn)行前處理。首先對樣品進(jìn)行研磨或勻漿處理，然后進(jìn)行提取、凈化、濃縮等步驟。由于肉類食品基質(zhì)的復(fù)雜性，一部分大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留與基質(zhì)中的大分子(蛋白質(zhì)等)結(jié)合，引起嚴(yán)重的基質(zhì)干擾，故前處理必須分離藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合體，以除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì)的干擾，最大限度地提取大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留。目前常見的前處理方法有液-液萃取(Liquid-liquid extraction，LLE)、固相萃取(Solid phase extraction，SPE)、QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)、分子印跡(Molecular imprinting，MI)、加壓溶劑萃取(Pressurised liquid extraction，PLE)、在線固相萃取(Online SPE)等。

3.1.1液-液萃取法液-液萃取通過加入一定的極性或非極性有機(jī)試劑進(jìn)行提取，一般采用乙酸乙酯、氯仿等進(jìn)行提取后過膜處理，除去雜質(zhì)，用流動相溶解后進(jìn)樣分析。岳振峰等[26]在聚丙烯離心管中用乙腈萃取動物組織中的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，然后以正己烷脫脂，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后進(jìn)行測定，得到肉類食品中的回收率為60%～99%。液-液萃取法可用于大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留的定量檢驗(yàn)，對實(shí)驗(yàn)條件和儀器要求不高，但該方法的凈化效果相對較差、操作費(fèi)時、有機(jī)溶劑消耗大。

3.1.2固相萃取法固相萃取法是最常用的凈化方式，該方法是將待測物質(zhì)從不同樣品中分離后，經(jīng)過不同類型的固相萃取進(jìn)行富集、凈化及除雜[27-28]。目前，已有多種SPE柱被用于大環(huán)內(nèi)酯類藥物的純化，如C18柱[29]、HLB柱[30]、PEP柱[31]、Prime HLB柱[32]等，且均能有效地分離純化肉類食品中的大環(huán)內(nèi)酯類藥物。目前常采用液相萃取結(jié)合固相萃取的方法進(jìn)行大環(huán)內(nèi)酯類藥物及代謝產(chǎn)物殘留的檢測，Cao等[33]在檢測家禽肌肉中獸藥殘留物的過程中，采用PSA和NH2去除提取物中的脂質(zhì)和碳水化合物，乙腈-乙醇水溶液萃取，正己烷純化，定量下限為0.05～10 μg/kg。該方法符合歐盟委員會決議2 002/657/EC的標(biāo)準(zhǔn)并已成功用于當(dāng)?shù)厥袌?中國)的家禽肌肉樣品分析。

3.1.3QuEChERS法QuEChERS法因快速、高效、成本低等特點(diǎn)被廣泛用于農(nóng)藥檢測領(lǐng)域，近年來也逐漸應(yīng)用于獸藥殘留檢測，但在肉類食品的大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留檢測中應(yīng)用較少[34-35]。郭海霞等[36]通過一次提取分步凈化的方式，實(shí)現(xiàn)了121種獸藥的同時分析，該方法對C18、PSA、NH2和GCB 4種吸附劑的凈化效果進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)C18和PSA結(jié)合的效果最好，可更好地去除基質(zhì)中的有機(jī)酸、糖類等干擾物，極大地降低了分析費(fèi)用，縮短了檢測周期，對肉類加工企業(yè)的質(zhì)量安全控制具有較高的實(shí)用價值。

3.1.4分子印跡技術(shù)分子印跡技術(shù)在獸藥殘留分析領(lǐng)域是一種新興的分析手段。分子印跡聚合物(MIP)制備簡單，穩(wěn)定性好，能重復(fù)使用，故可用作SPE填料或分子印跡薄膜來分離富集復(fù)雜基質(zhì)中的痕量分析物，已被廣泛應(yīng)用于獸藥殘留的分析[37]。Zhou等[38]以螺旋霉素為模板，制備了對阿奇霉素具有高選擇性的分子印跡聚合物整體式微柱，建立了基于分子印跡聯(lián)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測豬肉中阿奇霉素殘留量的簡便、高靈敏度的方法。該法克服了復(fù)雜基質(zhì)和雜質(zhì)的干擾，比傳統(tǒng)固相萃取法具有更好的凈化效果。

3.1.5加壓溶劑萃取法加壓溶劑萃取通過升溫和加壓提高物質(zhì)的溶解度和溶質(zhì)擴(kuò)散效率，從而提高萃取效率。該方法萃取時間短、萃取溶劑用量少、萃取率高、自動化程度高，可應(yīng)用于食品中大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留的測定。如Juan 等[39]分析了肉類和牛奶中5種大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留，使用不同量的海砂和EDTA研究了提取方法以及固相分散萃取法，并對溶劑、提取時間、溫度和壓力條件進(jìn)行了優(yōu)化。將該方法應(yīng)用于篩查瓦倫西亞社區(qū)市場的牛奶和肉類樣品中的大環(huán)內(nèi)酯和林可酰胺殘留，回收率均在70%以上，4個陽性樣本殘留量均高于歐盟立法規(guī)定的最大殘留量，為食品安全風(fēng)險(xiǎn)事件提供了可靠的技術(shù)保障。

3.1.6在線固相萃取法與傳統(tǒng)固相萃取技術(shù)相比，在線固相萃取具有操作簡便、穩(wěn)定性好、檢出限低、靈敏度高等優(yōu)勢。張曉光等[40]采用在線固相萃取凈化/液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法檢測豬肉中的10種大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留，樣品以乙腈提取，經(jīng)在線固相萃取柱凈化，甲醇洗脫后，轉(zhuǎn)移至色譜柱中進(jìn)行分離，用四極桿質(zhì)譜檢測。通過對固相萃取參數(shù)、液相色譜參數(shù)、質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，有效降低了基質(zhì)效應(yīng)；利用在線固相萃取裝置，克服了傳統(tǒng)固相萃取穩(wěn)定性差、操作繁瑣、成本高、資源消耗大等缺點(diǎn)。該方法實(shí)用性強(qiáng)，后期可對檢測品種進(jìn)行擴(kuò)充。

3.2 檢測方法

目前有關(guān)大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留的檢測技術(shù)主要為高效液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)，表2列出了部分大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留的分析條件。

表2 肉類食品中大環(huán)內(nèi)酯類藥物的分析條件Table 2 Analysis conditions of macrolide in meat food

(續(xù)表2)

Veterinary drugSampleSample preparationStationary phaseMobile phaseScan methodDetection limit/recoveryReference林可霉素、克林霉素、螺旋霉素、紅霉素、替米考星、泰樂菌素豬肉Mcllvaine緩沖液提取,液液分配,HLB固相萃取柱、MCX固相萃取柱、QuEChERS基質(zhì)分散固相萃取凈化Waters Acquity UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)流動相A為1 mol/L pH 5.0乙酸銨10 mL+水990 mL,B為1 mol/L pH 5.0乙酸銨10 mL+甲醇990 mLESI+,MRM10 μg/kg/60%[43]替米考星、泰樂菌素牛肝,肌肉乙腈提取,分散固相萃取凈化Acquity HSS-T3(100×2.1 mm,1.8 μm)流動相A為水-乙腈(體積比98∶2),含10 mmol/L甲酸銨水溶液,B為甲醇-乙腈(體積比75∶25),含0.1%甲酸ESI±,SRM確定限(CCα)為54～1 147 μg/kg,檢測容量(CCβ)為58～1 294 μg/kg[42]克林霉素、紅霉素、吉它霉素、林可霉素等豬肉乙腈提取,液液分配,Prime HLB固相萃取柱凈化Waters Acquity BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)流動相A為甲醇,B為0.1%甲酸溶液ESI+,MRM-/77.9%～122.3%[32]阿奇霉素、羅紅霉素、吉他霉素等豬肉EDTA 溶液,乙腈-甲醇(體積比95∶5) 提取,PEP-2 固相萃取柱凈化Waters UP-LCTM BEH C18(100 mm × 1.0 mm,1.7 μm)流動相A為0.1%甲酸水溶液,B為甲醇,C為水,D為乙腈ESI+,MRM0.2～5 μg/kg/30%～140%[31]林可霉素、托拉菌素、螺旋霉素等豬肉乙腈提取,經(jīng)在線固相萃取柱(HLB柱)富集凈化,甲醇洗脫X Bridge BEH C18色譜柱流動相A為10 mmol/L乙酸銨水溶液,B為乙腈ESI+,MRM0.05～0.3 μg/kg/69.6%～115.2%[39]林可霉素、紅霉素、竹桃霉素牛肝乙腈-甲醇提取,Oasis PRiME HLB凈化ACQUITY UP-LC BEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)流動相A為乙腈,B為2 mmol/L乙酸銨水溶液(含0.2%甲酸)ESI+,MRM0.07～0.78 μg/kg/67.5%～102.0%[47]替米考星、泰樂菌素畜禽肉甲醇洗脫,固相萃取裝置,加入乙腈-乙酸銨UPLC BEH C18色譜柱(50 mm ×2.1 mm,1.7 μm)流動相A為乙腈(含0.2%甲酸),B為0.006 mol/L乙酸銨ESI+,MRM0.83,3.05 μg/kg/78.3%～87%[48]螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、紅霉素A、泰樂菌素、吉他霉素等豬肉5%乙酸乙腈溶液和Na2EDTA提取,液液分配,300 mg C18和400mg NH2吸附劑的50 mL具塞離心管凈化ZORBAXSB-C18色譜柱(100 mm×2.1 mm,3.5 μm)流動相A為乙腈,B為0.1%甲酸水溶液(含5 mmol/L乙酸銨)ESI+,MRM-/67.0%～109.0%[49]交沙霉素、紅霉素、克林霉素、羅紅霉素、阿奇霉素、泰樂菌素等豬肉Na2EDTA-Mcil-vaine緩沖溶液(pH 4.0)和乙腈提取,無水硫酸鈉除水,上清液分兩組,用不同的QuEChERS凈化劑凈化ACQUITY UP-LC HSS T3柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)正離子模式:流動相A為0.1%甲酸-5 mmol/L乙酸銨,B為甲醇;負(fù)離子模式:流動相A為水,B為甲醇ESI+,MRM2.0～10 μg/kg/65.8%～105.7%[36]

紅霉素、交沙霉素、螺旋霉素、泰樂菌素、竹桃霉素動物組織樣品乙腈提取,液液分配,正己烷脫脂,異丙醇凈化Luna C18 色譜柱(150 mm ×2.0 mm,3 μm)流動相A為0.1%甲酸的乙腈-甲醇(1∶1),B為50 mmol/L乙酸銨水溶液ESI+,MRM0.05～5.3 μg/kg/70.3%～102%[26]

(續(xù)表2)

Veterinary drugSampleSample preparationStationary phaseMobile phaseScan methodDetection limit/recoveryReference螺旋霉素、替米考星、阿奇霉素、泰樂菌素、林可霉素、克林霉素動物肌肉0.1%甲酸的乙腈提取,高性能分散儀萃取,離心,在聚丙烯管中低溫純化Agela Durashell RP(100 mm×2.1 mm,5 μm)保護(hù)柱填充C18(Security Guard Phe-nomenex,4.0 mm×3.0 mm,5 μm)流動相A為0.1%甲酸水溶液和5 mmol/L甲酸銨,B為含0.1%甲酸和5 mmol/L甲酸銨的甲醇ESI+,SRMCCβ為1.0～50.0 μg/kg,CCα為120.3 μg/L[45]林可霉素、克林霉素、螺旋霉素、替米考星、泰樂菌素等家禽肌肉正己烷脫脂,使用PSA和NH2的管中的分散固相萃取(D-SPE)除雜Acquity HSS-T3色譜柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)流動相A為0.1%(體積分?jǐn)?shù))甲酸的甲醇,B為0.1%甲酸ESI+,MRM-/60%～139%[33]替米考星、螺旋霉素、紅霉素A、阿奇霉素等動物肌肉乙酸乙酯提取,液液分配,1 mL 5%氨水的甲醇溶液洗脫,MISPE純化Zorbax SB-Aq C18柱(150 mm×2.1 mm,3.5 μm)流動相A為乙腈,B為0.1%甲酸水ESI+,MRM0.1～0.4 μg/g/60.7%～100.3%[44]多拉菌素、伊維菌素牛肉乙腈提取,C18固相萃取柱凈化C18 柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)流動相A為乙腈,B為水熒光檢測器1.5 μg/kg/70.0%～120.0%[41]替米考星、螺旋霉素、紅霉素等牛肉、豬肉、雞肉乙腈、甲酸銨提取,分散固相萃取凈化YMC-Triart C18柱(3.0 mm×100 mm,3 μm)流動相A為水(含0.1%甲酸),B為乙腈(含0.1%甲酸)ESI-,MRMCCβ為17～358 μg/kg/60%～217%[50]

-not reported

3.2.1液相色譜法高效液相色譜適用于極性大、沸點(diǎn)高的化合物分離分析。該法采用一定的提取手段將被分析對象溶于可作為流動相的溶劑中，直接進(jìn)行檢測分析，具有柱效高、選擇性好、價格低、分析速度快、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)勢，被廣泛應(yīng)用于食品中獸藥殘留的檢測。根據(jù)食品基質(zhì)的不同選擇不同的檢測器，常用的檢測器有紫外檢測器(UVD)、熒光檢測器(FLD)、電化學(xué)檢測器(ECD)、二極管陣列檢測器(DAD)等。由于MALs難以氣化，并且多具有強(qiáng)的紫外線吸收，所以高效液相色譜法是MALs殘留的常用測定方法。王梅等[41]采用高效液相色譜法/熒光檢測器測定牛肉組織中多拉菌素、伊維菌素殘留量，兩種待測物在3.0～200.0 μg/L 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，樣品加標(biāo)回收率為70.0%～120.0%，方法檢出限為1.5 μg/kg。該方法有效簡化了現(xiàn)行農(nóng)業(yè)部781號公告標(biāo)準(zhǔn)的繁瑣處理步驟，縮短了衍生時間，有效保護(hù)了色譜柱，且操作簡單，重復(fù)性好，但只能用于已知目標(biāo)化合物的分析，無法進(jìn)行未知化合物的篩查。

3.2.2液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)在獸藥分析領(lǐng)域的應(yīng)用日益廣泛，因能夠以較高強(qiáng)度提供更窄的峰值，從而可顯著提高方法的靈敏度和選擇性，并可加快分析速度，具有較寬的線性范圍，適合于確證分析，故被用于大環(huán)內(nèi)酯類藥物的殘留分析[42]。LC-MS除可分析強(qiáng)極性、難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定的化合物之外，還具有分析范圍廣、分離能力強(qiáng)、定性分析結(jié)果可靠、檢出限低、分析時間快、自動化程度高等優(yōu)點(diǎn)。目前各種食品基質(zhì)中大環(huán)內(nèi)酯類藥物的液質(zhì)聯(lián)用檢測方法均有報(bào)道。

高分辨飛行時間質(zhì)譜(Time of flight mass spectrometry，TOF MS)近年來在食品安全分析領(lǐng)域的應(yīng)用也越來越廣泛，與低分辨的串聯(lián)四極桿質(zhì)譜相比，TOF MS具有定性與定量結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高、質(zhì)量精度高、具有正負(fù)切換掃描功能等優(yōu)勢。郝杰等[43]使用高分辨飛行時間質(zhì)譜對豬肉中包括大環(huán)內(nèi)酯類在內(nèi)的29種抗菌藥物進(jìn)行同時檢測，并比較了不同固相萃取柱的凈化效果，選用HLB固相萃取柱，建立了基于精確質(zhì)量數(shù)的篩查數(shù)據(jù)庫和優(yōu)化的定量方法，29種抗菌藥物的定量下限為0.5～10 μg/kg，平均回收率為50.10%～118.33%。該方法滿足食品安全風(fēng)險(xiǎn)突發(fā)事件快速應(yīng)急處理工作中高通量、高可靠性確證和定量分析的要求，為相關(guān)工作提供了可靠的技術(shù)保障。

Song等[44]以泰樂菌素作為模板，甲基丙烯酸作為功能單體合成分子印跡聚合物(MIPs)，采用分子印跡固相萃取與液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用的方法測定動物肌肉樣品中10種大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留。結(jié)果表明，MIP對大環(huán)內(nèi)酯類藥物具有良好的識別性能，比傳統(tǒng)固相萃取具有更好的凈化效果。藥物的回收率為60.7%～100.3%，檢出限為0.1～0.4 μg/kg，該方法可用于動物肌肉中大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留的常規(guī)監(jiān)測。Jank等[45]建立了肉類食品中大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留的篩查方法，該方法采用2002/657/EC標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了驗(yàn)證，確定了特異性驗(yàn)證參數(shù)，檢測容量(CCβ)為1.0～50.0 μg/L，確定限(CCα)為120.3 μg/L。該方法快速、簡便，適用于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室的高通量分析，已應(yīng)用于巴西國家殘留控制計(jì)劃，用于抗生素殘留確定。

4 結(jié) 論

近年來我國在獸藥殘留檢測領(lǐng)域發(fā)展迅速，對藥物殘留的檢測能力也大大提升。但隨著藥物結(jié)構(gòu)的逐漸復(fù)雜化、低劑量化和新型藥物研發(fā)數(shù)量的日益增多，對檢測技術(shù)的要求也越來越高。然而國內(nèi)關(guān)于快速檢測大環(huán)內(nèi)酯類藥物及其代謝產(chǎn)物的相關(guān)研究尚不完善，有待于進(jìn)一步開發(fā)探索，以實(shí)現(xiàn)快速準(zhǔn)確地從復(fù)雜基質(zhì)中分離大環(huán)內(nèi)酯類藥物及其代謝產(chǎn)物，并獲得較高的回收率和較好的測定結(jié)果。如何高效地將大環(huán)內(nèi)酯類藥物及代謝產(chǎn)物從復(fù)雜基質(zhì)中分離，并建立動物源性食品中多類獸藥殘留及其代謝產(chǎn)物的非定向篩查方法，將成為新的研究趨勢。