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        采后苯并噻重氮處理對厚皮甜瓜細胞膜磷脂代謝的影響

        2018-08-24 08:01:46胡妍蕓李霽昕張國祥張瑞君蔣玉梅
        食品科學 2018年15期
        關(guān)鍵詞:磷脂酶磷脂細胞膜

        胡妍蕓,李霽昕,王 雨,王 博,張國祥,張瑞君,蔣玉梅,*

        (1.甘肅農(nóng)業(yè)大學食品科學與工程學院,甘肅省葡萄與葡萄酒工程學重點實驗室,甘肅省葡萄酒產(chǎn)業(yè)技術(shù)研發(fā)中心,甘肅 蘭州 730070;2.甘肅省蘭州市紅古區(qū)食品藥品檢驗檢測中心,甘肅 蘭州 730070)

        呼吸躍變型‘玉金香’甜瓜(Cucumis melo L. cv.Yujinxiang)采后貯藏期間的品質(zhì)易因病原微生物侵染而劣變,苯并噻重氮(benzothiadiazole,BTH)可通過激活系統(tǒng)獲得性抗性通路誘導厚皮甜瓜產(chǎn)生抗性[1]。活性氧自由基代謝[2]、苯丙烷代謝[3]和病程相關(guān)蛋白的積累[4]是BTH誘導植物產(chǎn)生抗病性機制研究的熱點。

        磷脂是生物體細胞膜的主要組分,是細胞質(zhì)與外界的屏障,也是細胞對外界刺激應答的物質(zhì)基礎(chǔ)[5],在植物生長發(fā)育過程中具有結(jié)構(gòu)和信號傳導的雙功能[6-7]。在磷脂酶的作用下磷脂可水解為甘油、脂肪酸、磷脂等,進而參與次生代謝[8]。逆境脅迫會促進細胞膜不飽和脂肪酸的過氧化,產(chǎn)生活性氧和脂質(zhì)過氧化物,從而改變細胞膜結(jié)構(gòu),導致細胞膜流動性下降和通透性增強,影響磷脂代謝的穩(wěn)定性[9];乙烯處理會提高磷脂酶活力,加速脂質(zhì)降解[10];冷害使磷脂酶活力升高,進而加速細胞膜磷脂降解,不飽和脂肪酸含量及比例改變[11]。然而,誘抗劑誘抗對甜瓜磷脂代謝的影響機理目前鮮見報道。

        本研究以‘玉金香’甜瓜為實驗材料,采后BTH浸泡處理,以水處理組為條件對照,未處理組為對照,檢測磷脂酶(phospholipase A2,PLA2)、磷脂酶C(phospholipase C,PLC)和磷脂酶D(phospholipase D,PLD)活力的變化及其基因表達特性,分析誘抗劑處理對磷脂代謝底物、產(chǎn)物以及磷脂酶活力的影響,探討采后BTH處理和條件因子(水因子)對甜瓜果實細胞膜磷脂代謝的影響機理。以期為BTH處理誘導果實抗病性代謝機理研究及其對次生代謝產(chǎn)物的影響分析提供數(shù)據(jù)參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        ‘玉金香’厚皮甜瓜,2016年6月(花后45 d)采自甘肅省皋蘭縣什川鎮(zhèn),單果發(fā)泡袋包裝裝箱(35 個/箱),當天運抵實驗室。參照李軒[1]的方法,選擇成熟度、大小相近且無損傷和蟲咬的果實,于100 mg/L的BTH溶液中浸泡10 min,為BTH處理組;蒸餾水浸泡10 min為條件對照(condition control,CC)組,不作處理的空白樣為對照(CK)組,室溫((22±2)℃)、相對濕度55%~65%貯藏。

        BTH(純度98%)、磷脂酰膽堿(phosphatidyl cholines,PC)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)、磷脂酸(phosphatidic acid,PA)(均為標準品)美國Sigma Aldrich公司;PLA2檢測試劑盒、PLC檢測試劑盒、PLD檢測試劑盒 上海酶聯(lián)生物科技有限公司;UNIQ-10柱式TRIzol總RNA抽提試劑盒 生工生物工程(上海)股份有限公司;EP0733型第一鏈cDNA合成試劑盒 美國Thermo Scientific公司。

        1.2 儀器與設(shè)備

        iMar全自動酶標儀 美國Bio-Rad公司;UltiMate 3000系列高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)儀、Genesis 10s紫外-可見分光光度計 美國Thermo Scientific公司;PHS-3C pH計上海雷磁儀器有限公司;HPLC流動相過濾裝置 上海陸納生物科技有限公司。

        1.3 方法

        1.3.1 取樣

        貯藏期間,在第0、2、4、6、8、10、12天分別于CK、CC和BTH處理組各選取10 個果實,取“赤道”部位果皮(皮下2~5 mm)和果肉組織(皮下5~8 mm),切成小塊混勻。用于測定酶活力和磷脂組分的樣品,每2.0 g用錫箔紙包裹,共包裹24 組,液氮冷凍,于-80 ℃保存待測;用于測定脂肪酸含量和與酶活力相關(guān)的基因表達的樣品,每5.0 g用錫箔紙包裹,共包裹18 組,液氮冷凍,于-80 ℃保存待測。

        1.3.2 指標測定

        1.3.2.1 細胞膜完整率和丙二醛含量的測定

        細胞膜完整率的測定參照曹建康等[12]的方法并修改,分別取果實赤道部位果皮和果肉組織5.0 g,去離子水沖洗3 次,40 mL去離子水25 ℃下浸泡3 h,測初始電導率(P0/(S/m)),沸水浴30 min,冷卻至25 ℃,測最終電導率(P/(S/m))。細胞膜完整率的計算如下式所示。

        丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的測定參照曹建康等[12]的方法,采用硫代巴比妥酸比色法測定。

        1.3.2.2 PC、PI、PA含量的測定

        參照Yang Wenlong等[13]的方法。2.0 g樣品液氮冷凍研磨后置于50 mL三角瓶中,加15 mL Folch試劑(V(氯仿)∶V(甲醇)=2∶1)。超聲提取1 h,4 ℃、10 000×g離心20 min。上層清液于4 ℃、10 000×g再離心20 min。棄水相,取氯仿相于10 mL試管中,加入1 mL丙酮,漩渦振蕩2 min。氮氣吹干后加入2 mL Folch試劑,過0.45 μm膜,HPLC檢測。色譜柱ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相A:V(乙腈)∶V(甲醇)∶V(85%磷酸)=130∶370∶1,進樣量10 μL,柱溫30 ℃,流速1.0 mL/min,紫外檢測波長205 nm。PC、PI和PA外標定性,HPLC相同儀器條件制標準曲線定量。結(jié)果以鮮質(zhì)量計。

        1.3.2.3 脂肪酸含量的測定

        參照李巖[14]的方法。甲酯化:取甜瓜樣品5.0 g,液氮冷凍充分研磨,加入10 mL石油醚-乙醚(4∶3,V/V)混合液,于0~4 ℃下浸提24 h,加10 mL 0.4 mol/L的氫氧化鉀-甲醇溶液,室溫下甲酯化2 h,重蒸餾水分離得到有機相,氮氣吹干,1 mL氯仿溶解,無水硫酸鈉除水,過0.45 μm膜,氣相色譜分析。色譜柱TG-WAXMS(60 m×0.25 mm,0.5 μm),進樣口溫度240 ℃,分流進樣,分流比為30∶1,F(xiàn)ID檢測器,溫度250 ℃,載氣為高純度N2,流速1 mL/min。初溫150 ℃保持1 min,10 ℃/min升至230 ℃,保持1 min,3 ℃/min至240 ℃,保持10 min。外標定性定量。

        1.3.2.4 磷脂酶活力的測定

        PLA2活力的測定參照Alferez等[15]的方法。取2.0 g樣品液氮冷凍充分研磨,8 mL提取緩沖液(含1 mmol/L EDTA、100 mmol/L Tris-HCl(pH 7.5)、體積分數(shù)2%交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮(crosslinking polyvingypyrrolidone,PVPP)和0.15 mol/L山梨糖醇)浸提,4 ℃、11 000×g離心15 min,懸浮蛋白加硫酸銨過夜沉淀、離心,沉淀洗滌3 次。于2 mL酶反應體系(80 mmol/L pH 7.4 4-羥乙基哌嗪乙磺酸(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid,HEPES)緩沖液、150 mmol/L NaCl、10 mmol/L CaCl2、4 mmol/L聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、體積分數(shù)30%丙三醇和1 mg/mL牛血清白蛋白)中加入1 mL粗酶液。PLA2檢測試劑盒檢測,酶標儀450 nm波長處讀取吸光度,對照標準曲線確定酶活力,單位:μmol/(min·kg)。

        PLC活力的測定參照文獻[10,16]的方法。取5.0 g樣品液氮冷凍充分研磨,加入10 mL HEPES緩沖液(pH 7.0,含0.32 mol/L蔗糖、1 mmol/L二硫蘇糖醇、1 mmol/L苯甲基磺酰氟、1 mmol/L EGTA),制成體積分數(shù)20%的勻漿,4 ℃、12 000 ×g離心45 min,沉淀為細胞膜的膜性組分,溶于100 mmol/L pH 6.5的二甲基戊二酸(dimethylglutaric acid,DMG),得PLC粗酶提取液。于2 mL酶反應體系(含0.25 mol/L Tris-HCl(pH 7.2)、0.001 mol/L ZnCl2、60 g/100 mL山梨醇、10 nmol/L對硝基苯磷酸膽堿)中加入100 μL粗酶液,37 ℃下反應30 min。PLC試劑盒檢測,酶標儀450 nm波長處讀取吸光度,對照標準曲線確定酶活力,單位:μmol/(min·kg)。

        PLD活力的測定參照王國澤[17]、張紅宇[18]等的方法。取5.0 g樣品制備粗酶液,方法同PLC粗酶液的制備。200 μL酶反應體系由0.1 mmol/L DMG(pH 6.5)、10 mmol/L MgCl2、10 mmol/L CaCl2、5 mmol/L亞油酸、20 μL粗酶液(對照用DMG替代)組成,加入12 mmol/L PC,封口后30 ℃保溫反應30 min,沸水浴10 min終止反應。冷卻后加入0.8 mL顯色液(含45 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)、0.8單位膽堿氧化酶、2.4單位辣根過氧化物酶、0.24 mg 4-氨基安替比林和0.16 mg重蒸酚),30 ℃反應90 min,色澤穩(wěn)定后加1 mL Tris-HCl(含2 g/L Triton X-100,pH 8.0),0.22 μm濾膜濾去蛋白質(zhì),用酶標儀于450 nm波長處測定吸光度,對照標準曲線確定酶活力,單位:μmol/(min·kg)。

        1.3.2.5 磷脂酶基因表達水平的測定

        TRIzol總RNA抽提試劑盒提取樣品總RNA,第一鏈cDNA合成試劑盒完成cDNA第一鏈的合成。實時熒光定量聚合酶鏈式反應(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)測定磷脂酶的表達水平,引物序列設(shè)計見表1。qRT-PCR采用20 μL反應體系,包括10.0 μL SYBR Green qPCR Master Mix、0.4 μL上游引物(10 μmol/L)、0.4 μL下游引物(10 μmol/L)、7.2 μL ddH2O、2 μL模板(cDNA)。qRT-PCR程序:95 ℃ 7 s、57 ℃ 10 s、72 ℃ 15 s,45 個循環(huán)。數(shù)據(jù)于LightCycler480 Software Setup中分析。2-??Ct方法計算基因相對表達量,設(shè)定各基因在0 d的表達量為1.0。

        表 1 所測基因引物設(shè)計Table 1 Primers used for PCR

        1.4 數(shù)據(jù)處理

        Excel 2013軟件計算平均值和標準偏差并繪制圖表。IBM SPSS 19.0軟件統(tǒng)計分析,Duncan’s進行多重比較,P<0.05表示差異顯著。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 BTH處理對厚皮甜瓜細胞膜穩(wěn)定性的影響

        細胞膜完整率和MDA含量反映細胞膜的穩(wěn)定性和完整性,是衡量采后甜瓜果實耐貯性的重要指標。

        圖 1 采后BTH處理對甜瓜果實細胞膜完整率的影響Fig. 1 Effect of postharvest BTH treatment on muskmelon membrane integrity

        圖 2 采后BTH處理對甜瓜果實MDA含量的影響Fig. 2 Effect of postharvest BTH treatment on MDA content in muskmelon

        采后貯藏期間甜瓜果實細胞膜完整率整體呈下降趨勢,CC組細胞膜完整率略低于CK組,BTH處理能明顯延緩其下降(圖1),12 d時BTH處理組果實細胞膜完整率比CK組高8.82%(果皮)和17.13%(果肉)。甜瓜果實貯藏期間,MDA含量開始上升(圖2),CC和CK組第10天到達最高積累,隨后下降,BTH處理組MDA含量則持續(xù)緩慢上升;第6天開始,CC組果皮樣MDA含量高于CK組;第8天開始,CC組果肉樣MDA含量高于CK組;而BTH處理組MDA含量始終低于CC和CK組(P<0.05)。由此可見,BTH誘抗處理可減少甜瓜樣品采后貯藏期間MDA的積累,抑制細胞膜降解;而水因子在采后貯藏期間會導致甜瓜細胞膜完整率降低,在貯藏后期促進MDA的積累。

        2.2 BTH處理對厚皮甜瓜PC、PA、PI含量的影響

        圖 3 采后BTH處理對甜瓜果實PC、PI、PA含量的影響Fig. 3 Effect of postharvest BTH treatment on PC, PI and PA contents in muskmelon

        貯藏期間,樣品膜磷脂成分PC含量總體呈不斷下降趨勢(圖3A1、A2)。CC組果皮樣PC含量低于CK組,貯藏結(jié)束時其含量為(13.66±1.23)μg/g,比CK組低20.97%。BTH處理組果皮樣PC含量在貯藏第2天開始就比CK高,貯藏結(jié)束時(12 d)較采收當天PC含量下降29.61%,比CK組高5.24%。果肉樣與果皮樣的PC含量變化趨勢一致,貯藏結(jié)束時,CK組果肉樣PC含量較采收當天下降36.14%,而果皮樣中12 d時PC含量較采收當天低33.12%。BTH處理組和CC組的PC含量下降率則比果皮樣低5.48%、2.58%。

        樣品膜磷脂組分PI含量貯藏期間總體呈下降趨勢(圖3B1、B2)。CC組果皮樣貯藏前6 d PI含量下降急劇,之后含量趨于平衡,貯藏結(jié)束時比CK組低8.34%。BTH處理組果皮樣PI含量在整個貯藏期間無明顯變化,且均比CK組高,貯藏結(jié)束時(12 d)比CK組高2.08%。果肉樣與果皮樣PI含量的變化趨勢基本一致,貯藏結(jié)束時(12 d)CC組則比CK組低9.47%,而BTH處理組果肉樣PI含量比CK組高2.90%。

        CK和CC組磷脂代謝產(chǎn)物PA含量貯藏期間呈上升趨勢(圖3C1、C2)。貯藏前6 d,CC組果皮樣PA含量迅速增加至(15.79±0.78)μg/g,比CK組高30.01%,貯藏后期PA含量增加速率減慢,第12天時比CK組高27.70%。BTH處理組果皮樣PA含量無明顯變化,貯藏結(jié)束時(12 d)比CK組低20.72%。果肉樣與果皮樣PA含量變化基本一致,貯藏期間果肉樣PA含量的增加率比果皮低11.05%(CK組)、10.01%(CC組);貯藏結(jié)束時(12 d)CC組果肉樣PA含量比CK組高31.54%;而BTH處理組果肉樣在貯藏前6 d PA含量持續(xù)下降,至(7.22±0.10)μg/g(6 d),比CK組低9.98%,之后PA含量逐漸增加,第12天時比CK組低8.51%。

        總體來看,采后BTH處理可抑制膜磷脂成分PC、PI的降解及磷脂代謝產(chǎn)物PA的生成,而水因子則在一定程度上促進了PC、PI的降解和PA的積累。

        2.3 BTH處理對厚皮甜瓜脂肪酸含量的影響

        磷脂酶水解代謝的多不飽和脂肪酸可作為脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)的底物,產(chǎn)生活性氧和脂質(zhì)過氧化物導致細胞膜的損傷[19],也可代謝生成香氣物質(zhì)。因此,脂肪酸的含量以及不飽和脂肪酸與飽和脂肪酸比例(不飽和度)[20]對細胞膜的穩(wěn)定性、完整性及果實香氣品質(zhì)均有影響。

        表 2 采后BTH處理對甜瓜果實果皮組織脂肪酸含量的影響Table 2 Effect of postharvest BTH treatment on contents of fatty acids in peel of muskmelon μg/g

        實驗樣品中檢出的主要脂肪酸為不飽和脂肪酸油酸、亞油酸和亞麻酸,果皮樣脂肪酸含量明顯高于果肉(表2、3)。隨著貯藏時間的延長,CK組不飽和脂肪酸含量顯著降低(P<0.05),而飽和脂肪酸(棕櫚酸、硬脂酸)含量則顯著增加(P<0.05)。BTH處理組各種脂肪酸含量均較CK組明顯降低,貯藏結(jié)束(12 d)時,果皮樣中BTH處理組的棕櫚酸較CK組低40.16%,硬脂酸較CK組低31.05%,油酸較CK組低28.43%,亞油酸較CK組低38.47%,亞麻酸較CK組低13.81%;CC組樣品各脂肪酸含量顯著高于CK組(P<0.05),果肉樣較CK組高出18.35%(棕櫚酸,10 d)、18.58%(硬脂酸,6 d)、9.15%(油酸,2 d)、25.20%(亞油酸,6 d)、10.34%(亞麻酸,6 d)。

        表 3 采后BTH處理對甜瓜果實果肉組織脂肪酸含量的影響Table 3 Effect of postharvest BTH treatment on contents of fatty acids in pulp of muskmelonμg/g

        表 4 采后BTH處理對甜瓜果實果皮和果肉組織脂肪酸總量的影響Table 4 Effect of postharvest BTH treatment on contents of total fatty acids in peel and pulp of muskmelon μg/g

        貯藏結(jié)束時BTH處理組果皮樣不飽和脂肪酸含量較采收當天下降49.99%(表4),而飽和脂肪酸含量則較采收當天上升2.66%;BTH處理對果肉樣中脂肪酸含量及比例的影響與果皮樣基本一致。由此可見采后BTH處理可減少脂肪酸的生成和積累,水因子則增加脂肪酸含量,進而影響果實香氣物質(zhì)的生成。

        2.4 BTH處理對厚皮甜瓜磷脂酶活力及其基因表達的影響

        采后貯藏期間果皮和果肉試樣中PLA2、PLC和PLD活力均呈單峰型變化,基因相對表達量與酶活力變化趨勢基本一致(圖4)。

        圖 4 采后BTH處理對甜瓜果實PLA2、PLC、PLD活力及其基因相對表達量的影響Fig. 4 Effect of postharvest BTH treatment on relative gene expression levels and activities of PLA2, PLC and PLD in muskmelon

        由圖4A1、A2可知,貯藏第2天,BTH處理組PLA2活力比CK組低,但高于CC組;第6天時,CC組和CK組PLA2活力達到高峰,BTH處理組PLA2活力均比CK組和CC組低;第8天時,BTH處理組PLA2活力達到峰值,之后高于CK組和CC組。果皮樣CK組和CC組PLA2活力峰值分別為(128.96±6.90)和(129.58±2.12)μmol/(min·kg),差異不顯著(P>0.05),而BTH處理組PLA2活力峰值比CK組低7.11%。CK組和CC組果肉組織PLA2活力峰值分別為(112.19±1.11)和(121.04±3.83)μmol/(min·kg),BTH處理組PLA2活力峰值分別比CK組和CC組低1.49%和8.69%。果肉樣PLA2活力整體比果皮樣低。對于果肉組織,CC組PLA2活力值在處理4 d后高于CK組,峰值比CK組高7.89%。貯藏前6 d果皮樣PLA2基因的相對表達量均被BTH處理抑制,第6天時BTH處理組比CK組低35.42%,第8天開始上調(diào)(圖4B1)。由圖4B可知,果肉樣品中,BTH組PLA2基因的相對表達量高于CK組,第6天時,較CK組低41.82%。

        由圖4C1、C2可知,PLC活力第6天達到峰值,BTH處理組貯藏期間PLC活力始終低于CK組和CC組果實,第8天后CC組果實果皮樣中的PLC活力高于CK組。CK組果皮樣的PLC活力峰值為(102.12±3.40)μmol/(min·kg),BTH處理組峰值較CK組低10.24%;果肉組織BTH處理組峰值為(77.20±1.95)μmol/(min·kg),比CK組低7.95%。果皮樣PLC活力整體較果肉樣高,CK組和BTH處理組果皮樣活力峰值較果肉組織高出21.77%和18.74%。由圖4D1、D2可知,BTH處理組PLC基因相對表達量比CK組低,第10天時,果皮樣中BTH處理組較CK組高47.66%,果肉樣中BTH處理組較CK組高48.50%;CC組的PLC基因相對表達量較CK組上調(diào),峰值較CK組高出26.72%(果皮,10 d)、18.33%(果肉,10 d)。

        由圖4E1、E2可知,BTH處理組PLD活力比CK組低,而CC組活力則比CK組高。CK組和BTH處理組果皮樣于第6天達到峰值,分別為(705.83±14.77)、(655.00±12.75)μmol/(min·kg),BTH處理組峰值較CK組低7.20%;CC組則在第8天達到峰值,比CK組峰值高6.14%。果肉組織CK組峰值為(769.17±27.79)μmol/(min·kg),BTH處理組峰值比CK組峰值低9.43%,CC組峰值則比CK組峰值高14.30%。果肉樣PLD活力整體較果皮組織高,CK組和BTH處理組果肉樣PLD活力峰值分別比果皮樣中CK組和BTH處理組的PLD活力峰值高8.97%、6.36%。

        由圖4F1、F2可知,CC組PLD基因相對表達量較CK組上調(diào)了46.91%(果皮,0 d)、21.02%(果肉,12 d);BTH處理組則較CK組下調(diào)了46.29%(果皮,4 d)、36.56%(果肉,6 d)。

        由此可見,采后BTH處理延緩了PLA2活力高峰出現(xiàn)時間,抑制了PLC和PLD的活力,基因表達水平和酶活水平基本一致;水因子則局部促進了PLA2、PLC和PLD基因相對表達量,激發(fā)了PLA2、PLC和PLD的活力,但水因子的作用規(guī)律不明顯。

        2.5 采后BTH處理對磷脂代謝的影響和磷脂組分、酶活力及產(chǎn)物的相關(guān)性

        植物的衰老、病害以及外界因子的影響往往伴隨著細胞膜的改變和脂質(zhì)降解,磷脂酶PLA2、PLC和PLD是參與其中的重要酶類[19,21]。細胞膜的改變、脂質(zhì)降解代謝產(chǎn)物與細胞衰老、程序性死亡密切相關(guān)[22]。實驗中,甜瓜果實PLA2、PLC和PLD活力和基因表達水平呈單峰型變化趨勢,作為底物的膜磷脂成分PC、PI含量下降,而產(chǎn)物PA含量則略有上升,酶活力變化與Mao Linchun等[10]的研究結(jié)果一致;Munnik等[23]使用32P標記衣藻細胞分析其磷脂代謝的結(jié)果表明,PA來自于PLD代謝;PA作為信號傳導信使可調(diào)節(jié)PLC、PLD、PLA2和二?;视图っ傅幕盍24-26]。Zhao Yuying等[24]的研究結(jié)果表明,黃瓜果實受到機械損傷后磷脂酶活力增加,PC、PI含量減少而PA得到積累。本實驗中甜瓜果實經(jīng)BTH處理后,磷脂酶PLC、PLD活力被抑制,PC、PI因酶活力降低而有所積累;產(chǎn)物PA含量則降低。PA是逆境脅迫、氧化應激等引起植物激素(乙烯、脫落酸等)變化的第二信使[27],BTH處理能夠延緩果實成熟衰老、抑制乙烯的釋放[28],且影響PA生成。水因子則會在一定程度上促進磷脂酶活力增加,導致PC、PI含量顯著降低。由此可推斷BTH處理中作為溶劑的水因子可能會抵消BTH的部分作用,影響磷脂酶活力及其底物和產(chǎn)物的變化規(guī)律。

        細胞衰老及惡化的特征是磷脂含量的減少[29],同時還伴隨游離脂肪酸水平的下降[30]??偟膩砜?,BTH處理后脂肪酸的積累被抑制,BTH對不飽和脂肪酸的抑制效果低于對飽和脂肪酸的抑制效果。Cao Shifeng[31]、李輝[32]等的研究結(jié)果表明,不飽和脂肪酸的含量及比例影響細胞膜流動性,對植物衰老、冷害等生理反應有著重要意義,本實驗BTH處理甜瓜果實后脂肪酸不飽和度有所上升,與BTH處理抑制磷脂組分降解、保持細胞膜完整性相一致。已有報道證明BTH可抑制厚皮甜瓜揮發(fā)性物質(zhì)的釋放[33],PLA2活力的變化可影響香氣代謝前體物質(zhì)不飽和脂肪酸的釋放,可見,PLA2活力可能也是控制甜瓜果實香氣物質(zhì)代謝的環(huán)節(jié)之一,BTH不僅可通過影響LOX途徑影響甜瓜果實香氣物質(zhì)代謝[34],其通過磷脂代謝的影響同樣不容忽視。

        3 結(jié) 論

        BTH誘抗處理可減少厚皮甜瓜‘玉金香’采后貯藏期間MDA的積累,降低磷脂酶PLC和PLD的基因相對表達量和活力,延緩PLA2活力峰值出現(xiàn)時間;促進膜磷脂成分PC、PI的積累,抑制磷脂代謝產(chǎn)物PA的生成,減緩細胞膜降解。而水因子則促進了MDA在貯藏后期積累,局部激發(fā)了PLA2、PLC和PLD基因相對表達量和活力,水因子處理促進PC、PI的降解和PA的積累,樣品細胞膜完整率降低。作為磷脂代謝產(chǎn)物和香氣代謝前體物質(zhì)之一的不飽和脂肪酸,BTH處理后含量減少,水因子對不飽和脂肪酸含量卻有一定的促進作用,進而影響了甜瓜的香氣代謝。可見,采后BTH處理可通過抑制磷脂組分降解和PLC基因、PLD基因相對表達量及相關(guān)酶活力,從而減少PA和不飽和脂肪酸的生成,進而影響細胞膜完整性及厚皮甜瓜果實的香氣代謝。

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