張 武，李二虎，李桂紅，趙 瑞，李 俊，程 媛

(天津市農(nóng)藥檢定所，天津 300061)

噻蟲嗪、吡蟲啉、啶蟲脒是煙堿類殺蟲劑，咪鮮胺和烯酰嗎啉是殺菌劑，具有廣譜、低毒等特點。 已有的液相色譜檢測方法因其干擾性強、靈敏度差，假陽性時有發(fā)生。本文采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，經(jīng)固相萃取柱(SPE)，在Hypersil Gold柱(2.1×100mm)柱經(jīng)梯度洗脫分離，采用選擇離子監(jiān)測(SRM)方式準(zhǔn)確檢測芹菜中的咪鮮胺、噻蟲嗪、吡蟲啉、啶蟲脒、烯酰嗎啉，本方法與以往方法相比，具有更高的選擇性、穩(wěn)定性和靈敏性。

1 實驗方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 TSQ Quantum Access三重四極桿串聯(lián)液質(zhì)聯(lián)用儀(Thermo Fisher Scientific公司)；振蕩器；高速勻漿機(IKA?-WERKE，T25 basic)；水浴氮吹儀(N-EVAP111,Organomation Associates，Jnc.)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(IKA?-WERKE，RV06-ML)。

1.1.2 試劑與材料 甲醇、乙腈均為HPLC級(Merck，Darmstadt，Germany)，二氯甲烷、氯化鈉(140℃烘烤4h)、醋酸銨均為分析純；娃哈哈純凈水;氨基柱(Cleanert NH2-SPE；500mg/6mL)；0.22μm過濾膜。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)品 咪鮮胺、噻蟲嗪、吡蟲啉、啶蟲脒、烯酰嗎啉 (天津環(huán)境監(jiān)測中心)。

將5種標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配置成濃度為100mg/L作為儲備液。系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液由標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液用甲醇配制(現(xiàn)用現(xiàn)配)。

1.1.4 色譜與質(zhì)譜條件 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀，配電噴霧離子源(ESI)；色譜柱：Hyperisil Gold柱，2.1×100mm；柱溫：室溫；流動相采用梯度洗脫，洗脫參數(shù)(表1)；進樣體積：10μL。

表1 梯度洗脫參數(shù)

質(zhì)譜條件：ESI正離子模式；噴霧電壓4 000V；離子傳輸毛細(xì)管溫度：350℃；鞘氣：35psi；采用選擇反應(yīng)監(jiān)測(SRM)掃描模式。質(zhì)量條件參數(shù)(表2)。

表2 質(zhì)譜質(zhì)量條件參數(shù)

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品提取 稱取混勻芹菜樣品20.00g置于125mL的廣口瓶中，加入40mL乙腈，在高速勻漿機上勻漿2min(15 000r/min)，然后過濾到100mL的具塞量筒中，加入6g 氯化鈉，振搖提取2min，靜置分層后，分離有機相和水相，準(zhǔn)確量取有機相8mL于60℃水浴上氮吹至干，用2mL二氯甲烷+甲醇(95∶5,V/V)混合液溶解，待凈化。

1.2.2 樣品凈化 凈化用氨基柱，先用5mL二氯甲烷+甲醇(95∶5,V/V)的混合溶液預(yù)淋柱子，當(dāng)溶液到達吸附層表面時，立即將上述濃縮液加至柱中，并用10mL二氯甲烷+甲醇(95∶5,V/V)的混合溶液分2次洗脫，收集。將收集的洗脫液在50℃水浴濃縮至近干，用甲醇+水(50∶50,V/V)準(zhǔn)確定容至4mL，用0.22μm濾膜過濾，待檢測。

1.2.3 測定步驟 在1.1.4色譜工作條件下，待儀器穩(wěn)定后，按標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進行色譜分析，采用外標(biāo)法對樣品進行定量分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 固相萃取小柱的選擇 凈化過程中利用固相萃取小柱相對于傳統(tǒng)填充柱凈化具有以下幾個優(yōu)勢：一是，凈化效果好，能有效排除雜質(zhì)干擾，可獲得良好目標(biāo)峰型；二是，大大減少了前處理溶劑的用量，減少資源浪費和環(huán)境污染；三是，操作更加方便，效率高，對于大批量的樣品，容易實現(xiàn)自動化和批量操作。

2.2 流動相選擇 對流動相條件進行了優(yōu)化，采用梯度洗脫，使得峰型得到了很好的改善，大大提高了靈敏度。

2.3 分析方法的線性相關(guān)測定 在上述確定的色譜條件下，將5種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液用甲醇+水(50∶50,V/V)溶液逐級稀釋成10、20、40、80、160μg/L系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。將系列濃度分別進樣10μL，在液質(zhì)聯(lián)用儀上測定峰面積，每個濃度測得的峰面積與對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。咪鮮胺的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線方程y=2 846.1x-6 008.9，R2=0.998 1；噻蟲嗪標(biāo)準(zhǔn)工作曲線方程y=8 383.2x-824.58，R2=0.998 6；吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)工作曲線方程y=3 297.1x-7 503.2，R2=0.997 8；啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)工作曲線方程y=4 475.9x+20 341，R2=0.992 6；烯酰嗎啉標(biāo)準(zhǔn)工作曲線方程y=2×106x-9×106，R2=0.995 3。

2.4 最小檢測量 5種農(nóng)藥均為1.0×10-10g。

2.5 相對保留時間 咪鮮胺10.71min、噻蟲嗪3.64min、吡蟲啉5.35min、啶蟲脒5.98min、烯酰嗎啉9.19min。

2.6 實驗譜圖

圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

圖2 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

圖3 樣品添加色譜圖

圖4 樣品空白色譜圖

2.7 精密度、回收率試驗 采用添加法，在空白對照樣品中添加已知含量的5種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加濃度為0.01、0.1、0.5mg/kg 3個水平，各處理重復(fù)5次，咪鮮胺在芹菜添加回收率在81.81%～107.74%之間，變異系數(shù)在4.39～8.26之間；噻蟲嗪在芹菜添加回收率在80.87%～90.83%之間，變異系數(shù)在2.63～5.70之間；吡蟲啉在芹菜添加回收率在78.50%～87.07%之間，變異系數(shù)在1.99～3.46之間；啶蟲脒在芹菜添加回收率在87.35%～95.50%之間，變異系數(shù)在5.00～8.09之間；烯酰嗎啉在芹菜添加回收率在105.50%～113.00%之間，變異系數(shù)在7.24～8.69之間。具體數(shù)據(jù)(表3)。

表3 回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

續(xù)表

3 結(jié)論

本文選用LC-MS/MS法的SRM方式檢測芹菜中咪鮮胺、噻蟲嗪、吡蟲啉、啶蟲脒、烯酰嗎啉 ，用固相萃取柱凈化，過濾后進行分析。采用三重四極桿質(zhì)譜的選擇反應(yīng)監(jiān)測(SRM)方式，確定其母離子，經(jīng)碰撞能量優(yōu)化試驗確定特征離子，獲得極高的檢測靈敏度，本實驗采用的方法滿足多組分、低含量樣品的檢測要求，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高等優(yōu)點。