張 強(qiáng)，王勝翔，黃 偉，郭海霞，姜宜飛*

(1.山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院，山東 濟(jì)南 250100； 2.農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所，北京 100125)

1 前言

氯氟醚菌唑(Mefentrifluconazole，CAS號(hào)：1417782-03-6,分子式：C18H15ClF3N3O2)是巴斯夫公司研發(fā)的一種三唑類(lèi)殺菌劑,其廣譜、高效、內(nèi)吸，具有鏟除和保護(hù)作用，對(duì)一系列較難防治的病害具有顯著的生物活性，適用于世界范圍內(nèi)許多大田作物和特種作物，如甜玉米、谷物、甜菜、花生、油菜、大豆等。由于氯氟醚菌唑分子中含有異丙醇結(jié)構(gòu)，與丙硫菌唑等三唑類(lèi)殺菌劑不同，其能夠很好地抑制殼針孢的菌株轉(zhuǎn)移，減少該病菌突變。氯氟醚菌唑優(yōu)異的生物性能，使其有望成為高效控制病害的重要工具，并將用來(lái)減緩殺菌劑的抗性發(fā)展，是巴斯夫具有劃時(shí)代意義的新產(chǎn)品[1]。吡唑醚菌酯(Pyraclostrobin，CAS號(hào)：175013-18-0，分子式C19H18ClN3O4)是巴斯夫公司開(kāi)發(fā)的兼具吡啶結(jié)構(gòu)的甲氧基丙烯酸酯類(lèi)廣譜殺菌劑[2]。其為線粒體呼吸抑制劑，即通過(guò)在細(xì)胞色素合成中阻止電子轉(zhuǎn)移，使線粒體不能產(chǎn)生和提供細(xì)胞正常代謝所需的能量(ATP)，而使細(xì)胞死亡。吡唑醚菌酯具有保護(hù)、治療、葉片滲透?jìng)鲗?dǎo)作用，可用于小麥、花生、水稻、蔬菜、果樹(shù)、煙草、茶樹(shù)、觀賞植物、草坪等作物。

目前國(guó)內(nèi)有關(guān)氯氟醚菌唑及氯氟醚菌唑·吡唑醚菌酯復(fù)配制劑的分析方法未見(jiàn)報(bào)道。本文采用高效液相色譜法，對(duì)240g/L氯氟醚菌唑·吡唑醚菌酯乳油進(jìn)行定量分析，該方法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求。

2 試驗(yàn)部分

2.1 試劑和溶液 乙腈(色譜純)；超純水(電阻率18.2MΩ·cm，25℃)；氯氟醚菌唑標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.4%)，吡唑醚菌酯標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.8%)，由農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所提供；240g/L氯氟醚菌唑·吡唑醚菌酯乳油(由某公司提供)。

2.2 主要儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1200，具有二極管陣列檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器；Agilent色譜工作站；Millipore超純水制備系統(tǒng)；色譜柱：150mm×2.1mm(id)不銹鋼柱，內(nèi)裝Zorbax Eclipse XDB-C185μm填充物；電子天平：德國(guó)Sartorius，LE225D，d=0.01mg (100g)。

2.3 液相色譜操作條件 流動(dòng)相：ψ(乙腈:水)=50:50；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm及275nm；進(jìn)樣體積：5μL；保留時(shí)間：氯氟醚菌唑約2.2min、吡唑醚菌酯約4.9min。

氯氟醚菌唑及吡唑醚菌酯標(biāo)樣和240g/L氯氟醚菌唑·吡唑醚菌酯乳油的高效液相色譜圖(圖1、2)。

圖1 氯氟醚菌唑及吡唑醚菌酯標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖2 240g/L氯氟醚菌唑·吡唑醚菌酯乳油高效液相色譜圖

2.4 測(cè)定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的配制 稱(chēng)取氯氟醚菌唑、吡唑醚菌酯標(biāo)樣各0.01g(精確至0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.4.2 試樣溶液的配制 稱(chēng)取含氯氟醚菌唑(吡唑醚菌酯)0.01g的試樣(精確至0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.4.3 測(cè)定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對(duì)變化<1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

2.4.4 計(jì)算 將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中氯氟醚菌唑(吡唑醚菌酯)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中氯氟醚菌唑(吡唑醚菌酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(%)，按式(1)計(jì)算：

(1)

式中：

A1──標(biāo)樣溶液中氯氟醚菌唑(吡唑醚菌酯)峰面積的平均值；

A2──試樣溶液中氯氟醚菌唑(吡唑醚菌酯)峰面積的平均值；

m1──標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2──試樣的質(zhì)量，g；

P──標(biāo)樣中氯氟醚菌唑(吡唑醚菌酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件的選擇 通過(guò)Agilent 1200高效液相色譜儀的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得氯氟醚菌唑、吡唑醚菌酯的紫外波長(zhǎng)掃描圖(圖3、4)。從圖中可以看到氯氟醚菌唑的最大吸收波長(zhǎng)在230nm處，吡唑醚菌酯的最大吸收波長(zhǎng)在275nm處。由于兩者在最大吸收波長(zhǎng)上有較大差異，經(jīng)過(guò)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，選擇兩者各自最大吸收波長(zhǎng)時(shí)，兩者均有較理想的吸收，且吸收比例恰當(dāng)，溶劑干擾弱，各種雜質(zhì)不影響主成分的測(cè)定。因此，綜合考慮各種因素，將檢測(cè)波長(zhǎng)分別定為氯氟醚菌唑230nm和吡唑醚菌酯275nm。

圖3 氯氟醚菌唑紫外吸收?qǐng)D譜

圖4 吡唑醚菌酯紫外吸收譜圖

色譜柱選擇常規(guī)的Zorbax Eclipse XDB-C18反相柱。依據(jù)氯氟醚菌唑、吡唑醚菌酯物化性質(zhì)，用乙腈作為溶劑溶解樣品，并選擇乙腈和水作為流動(dòng)相。將流動(dòng)相按不同比例在色譜柱上進(jìn)行試驗(yàn)，最終確定流動(dòng)相為ψ(乙腈:水)=50:50，在流速1.0 mL/min時(shí)，有效成分與雜質(zhì)能得到很好的分離，峰形對(duì)稱(chēng)，基線平穩(wěn)，能在短時(shí)間能得到滿(mǎn)意的分析結(jié)果，提高了工作效率。

3.2 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn) 將2.4.1中配制的標(biāo)樣溶液在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，進(jìn)樣量分別為1、3、5、10、20μL，以質(zhì)量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制校正曲線。試驗(yàn)測(cè)得氯氟醚菌唑線性方程為y=49 071.940 6x+6.959 3，相關(guān)系數(shù)為1.000 0；吡唑醚菌酯線性方程為y=66 684.169 9x+9.775 5，相關(guān)系數(shù)為1.000 0。結(jié)果表明氯氟醚菌唑、吡唑醚菌酯在測(cè)試的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.3 分析方法的精密度試驗(yàn) 從同一產(chǎn)品中準(zhǔn)確稱(chēng)取5個(gè)試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)得氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.04和0.08，變異系數(shù)分別為0.41%和0.60%(表1)?？梢?jiàn)該方法的精密度能滿(mǎn)足定量分析要求。

表1 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.4 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn) 從已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的240g/L氯氟醚菌唑·吡唑醚菌酯乳油中稱(chēng)取5個(gè)試樣，分別加入一定量的氯氟醚菌唑(99.4%)和吡唑醚菌酯(99.8%)標(biāo)樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)得氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯的平均回收率分別為100.40%和101.23%(表2)。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)論

試驗(yàn)建立了高效液相色譜法檢測(cè)240g/L氯氟醚菌唑·吡唑醚菌酯乳油中有效成分的分析方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，氯氟醚菌唑、吡唑醚菌酯在測(cè)試濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法準(zhǔn)確度和精密度較高，具有操作簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)，是產(chǎn)品質(zhì)量控制和應(yīng)用研究中較為理想的分析方法。