張阿娥 泉州市洛江區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心 福建泉州 362011

沙門氏菌屬是一群寄生于人和動(dòng)物腸道內(nèi)的無(wú)芽孢革蘭氏陰性桿菌[1]，雞的沙門氏菌?。ˋvian Salmonellosis）是由多種沙門氏菌引起的一類傳染病的總稱。主要有雞白痢沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌[2]，雞源沙門氏菌能在雞群中垂直感染，造成被感染成年雞產(chǎn)蛋性能下降、雛雞大批死亡，已成為危害養(yǎng)禽業(yè)的首要傳染病之一[3]?？咕幍膽?yīng)用，對(duì)控制和預(yù)防沙門氏菌病發(fā)揮了巨大作用，但因使用不當(dāng)或?yàn)E用，沙門氏菌的耐藥性有上升趨勢(shì)[4]，致使該病的治療難度越來(lái)越大。加強(qiáng)對(duì)該菌耐藥性的監(jiān)測(cè)，以減少養(yǎng)殖損失，已迫在眉睫。本文從洛江區(qū)部分養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)病雞中分離鑒定沙門氏菌，并分析分離菌株對(duì)多種藥物的敏感性，為預(yù)防控制洛江區(qū)當(dāng)前流行的沙門氏菌，在臨床合理科學(xué)選擇用藥上提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料 來(lái)自洛江區(qū)4個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)，從2018年3月至2018年4月疑似患沙門氏菌病的發(fā)病雞，采集剖檢后的內(nèi)臟。

1.1.2 培養(yǎng)基 營(yíng)養(yǎng)瓊脂、SS瓊脂、三糖鐵瓊脂（TSI）培養(yǎng)基均購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司。

1.1.3 HBI沙門氏菌生化鑒定條 （GB） 購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司。

1.1.4 沙門氏菌屬診斷血清 沙門氏菌A～F群“O”多價(jià)診斷血清購(gòu)自蘭州生物制品研究所。

1.1.5 藥敏紙片 購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司。1.2 方法

1.2.1 分離、純化 將剖檢采集的雞心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟組織，劃線接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h觀察，挑取直徑約0.5 mm單菌落進(jìn)行革蘭氏染色，將革蘭氏陰性短桿菌接種于TSI。

1.2.2 血清型鑒定 挑取TSI中呈陽(yáng)性的菌落進(jìn)行沙門氏菌A～F群“O”診斷血清玻片凝集試驗(yàn)，設(shè)生理鹽水對(duì)照。

1.2.3 生化鑒定 取一內(nèi)盛2 mL無(wú)菌水或無(wú)菌生理鹽水試管，用接種針從平板上挑取單個(gè)菌落至無(wú)菌生理鹽水中研磨制成均一細(xì)菌懸液，在HBI沙門氏菌生化鑒定條的每孔加入100 μL菌懸液，其中衛(wèi)矛醇半固體采用穿剌接種，賴氨酸和氨基酸對(duì)照加滅菌石蠟覆蓋液面，37℃培養(yǎng)18～48 h，觀察生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果。

1.2.4 藥敏試驗(yàn) 采用Kirby-Bauer紙片法，挑取單個(gè)菌落接種于營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)24 h；用無(wú)菌生理鹽水稀釋制成0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)的菌懸液，吸取適量菌液于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板內(nèi)，在其表面均勻涂布，蓋上平板，室溫放置5 min，用無(wú)菌小鑷子夾取各種藥敏紙片，平貼于瓊脂表面，然后倒置于37℃培養(yǎng)16～18 h。觀察測(cè)量藥敏紙片周圍抑菌圈直徑（d），d＞15 mm為高度敏感，10.1 mm＜d≤15 mm為中度敏感，d≤10 mm為耐藥。

2 結(jié) 果

2.1 分離培養(yǎng)特性 在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，菌落呈針尖大小“露珠狀”，圓形、微隆起、光滑濕潤(rùn)、半透明或灰白色、邊緣整齊；在SS營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，菌落透明、邊緣灰白、中心為黑色；三糖鐵培養(yǎng)基斜面為紅色，底層產(chǎn)硫化氫為黑色；取單個(gè)菌落涂片，革蘭氏染色鏡檢，可見菌體呈紅色、兩端鈍圓、短桿狀，單個(gè)、成對(duì)或成叢排列。以上分離菌株的選擇性培養(yǎng)特性均符合沙門氏菌特征。

2.2 玻片凝聚試驗(yàn) 將分離菌株與沙門氏菌 A～F多價(jià)血清進(jìn)行玻片凝集反應(yīng)，有6株呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性。

2.3 生化特性 從生化反應(yīng)結(jié)果可以看出 （見表1），分離的菌株能分解山梨醇、甘露醇，不發(fā)酵水楊苷和衛(wèi)矛醇；不能利用丙二酸鹽，不能分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚，不分解尿素，在氰化鉀培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，具有賴氨酸脫羧酶，ONPG反應(yīng)陰性。以上生化試驗(yàn)結(jié)果均符合沙門氏菌特性。

表1 分離菌株的生化反應(yīng)結(jié)果

表2 12株沙門氏菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

2.4 藥物敏感性試驗(yàn) 從表2可以看出，沙門氏菌對(duì)不同藥物的敏感度不同。其中，對(duì)恩諾沙星、阿米卡星最敏感，敏感率分別為100%、91.7%；其次為頭孢克洛，敏感率為83.3%；對(duì)氟苯尼考、林可霉素、慶大霉素、泰妙菌素、替米考星、阿莫西林的敏感率范圍較寬，在8.3%～41.7%；對(duì)強(qiáng)力霉素、阿奇霉素、青霉素、氨芐西林敏感率為零，產(chǎn)生耐藥性。

3 討 論

3.1 細(xì)菌分離鑒定 從洛江區(qū)部分養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)病雞的內(nèi)臟進(jìn)行細(xì)菌分離，通過(guò)在選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)、細(xì)菌學(xué)形態(tài)觀察、細(xì)菌生化試驗(yàn)及血清學(xué)鑒定，結(jié)果顯示分離的細(xì)菌各項(xiàng)指標(biāo)符合雞沙門氏菌特性。同時(shí)，結(jié)合發(fā)病雞出現(xiàn)的排漿糊狀糞便、“糊肛”及剖檢時(shí)觀察到肝臟有灰白色針尖狀壞死點(diǎn)等特征，也符合雞感染沙門氏菌的臨床表現(xiàn)，確定洛江區(qū)部分養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)病雞內(nèi)臟分離出的細(xì)菌為雞沙門氏菌。

3.2 科學(xué)有效用藥 一直以來(lái)，抗生素都是用于治療沙門氏菌病的首選方法，由于飼料中抗生素含量過(guò)高和臨床上長(zhǎng)期盲目使用同一種抗生素等因素，導(dǎo)致沙門氏菌對(duì)部分藥物敏感性下降、產(chǎn)生了耐藥性。從藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果可以看出，從洛江區(qū)不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)分離出的雞沙門氏菌，對(duì)藥物的敏感率從0到100%不等，值得關(guān)注的是，分離的細(xì)菌對(duì)強(qiáng)力霉素、青霉素、氨芐西林和阿奇霉素產(chǎn)生了耐藥，與De O-liveira等報(bào)道的結(jié)果基本一致[6]。因此，在洛江區(qū)臨床上不應(yīng)再選擇前述4種藥物用于治療雞沙門氏菌病，可將恩諾沙星、阿米卡星作為預(yù)防和治療該病的首選藥物。

4 結(jié) 論

臨床上選擇藥物用于治療沙門氏菌病，宜先進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，選出敏感藥物后再進(jìn)行有效治療，同時(shí)，要注意定期進(jìn)行交叉和輪換用藥，避免產(chǎn)生耐藥性。此外，因雞沙門氏菌可垂直傳播，杜絕雞群發(fā)生雞沙門氏菌病最直接、最有效的辦法，還是要建立健全檢疫制度，堅(jiān)決嚴(yán)格淘汰帶菌雞，建立無(wú)菌雞群，消滅傳染源，切斷垂直傳播鏈條，以徹底消滅雞沙門氏菌病。同時(shí)，在日常的養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中，應(yīng)注重做好雞沙門氏菌病的預(yù)防控制工作，定期做好雞舍消毒，加強(qiáng)溫度、濕度、通風(fēng)等飼養(yǎng)條件的管控，不斷改善飼養(yǎng)環(huán)境，提高雞群健康水平，減少用藥，減輕對(duì)沙門氏菌的選擇性壓力，延緩細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的進(jìn)程，降低細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性幾率。