甄佩玲 唐國權(quán)

摘 要：氣相色譜法是農(nóng)作物中有機(jī)磷農(nóng)藥測定的常用方法之一。本文利用氣相色譜法，快速測定番茄中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，結(jié)果表明，該方法具有快速、精確、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，可供類似農(nóng)作物有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測定參考。

關(guān)鍵詞：氣相色譜法；有機(jī)磷農(nóng)藥；測定

有機(jī)磷農(nóng)藥在當(dāng)前我國農(nóng)業(yè)市場中占據(jù)著較大的份額，被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。與此同時，因農(nóng)作物有機(jī)磷農(nóng)藥殘留導(dǎo)致的中毒事件也時有發(fā)生，引起了社會各界的廣泛關(guān)注。因此，研究農(nóng)作物有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測定方法十分必要。基于此，筆者以番茄為例，對其有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測定展開了介紹。

一、材料與方法

1.儀器與試劑

GC-2010 plus氣相色譜儀（配氣相色譜火焰光度檢測器（FPD），自動進(jìn)樣器，分流/不分流進(jìn)樣口），HSC-24A水浴氮吹儀（中國天津市恒奧科技發(fā)展有限公司），電子天平（感量分別為0.0001g和0.01g），分散勻漿機(jī)IKA-T18basic（德國IKA公司），3-18k臺式冷凍離心機(jī)（德國Sigma），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（中國上海亞榮生化儀器廠），THZ-82水浴恒溫振蕩器（中國金壇市精達(dá)儀器制造有限公司）；GL-88B漩渦混合器（中國海門市麒麟醫(yī)用儀器廠）。

有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：甲拌磷、二嗪磷、毒死蜱、甲基對硫磷（100μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所），氯化鈉（分析純，使用前140℃烘烤4h，在干燥器中冷卻至室溫），乙腈（分析純），丙酮（色譜純），25OμL微型進(jìn)樣針，濾膜（0.22μm，有機(jī)系），高純氮?dú)猓兌却笥?9.999%），高純氫氣（純度大于99.999%），空氣（純度大于99.9%），各種玻璃儀器若干。

2.色譜條件

RTX?-1701石英毛細(xì)管色譜柱（RESTEK，30m×0.25mmID×0.25μm）；以高純氮?dú)鉃檩d氣，壓力77.7KPa，總流量30.0mL/min，線速模式，線速26.1cm/sec，流速8.0mL/min，載氣色譜柱流量1.00mL/min；氫氣流速62.5mL/min，空氣流速90mL/min，氮?dú)馕泊盗魉?3mL/min；檢測器溫度250℃；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量1.0μL，進(jìn)樣口溫度：220℃。程序升溫：120℃（保持2min），以10℃/min升溫至220℃（保持2min），再以40℃/min升溫至260℃（保持4min）。

3.標(biāo)準(zhǔn)溶液配置

分別準(zhǔn)確吸取1.0mL的100μg/mL甲拌磷、二嗪磷、毒死蜱、甲基對硫磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于25mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，得到濃度為4μg/mL的農(nóng)藥混標(biāo)儲備液。

準(zhǔn)確吸取1.0mL的100μg/mL甲拌磷、二嗪磷、毒死蜱、甲基對硫磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于25mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，得到濃度為4μg/mL的農(nóng)藥單標(biāo)儲備液。使用時，準(zhǔn)確吸取適量的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用丙酮稀釋配制成所需的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

4.前處理操作步驟

攪拌混勻樣品盒中組織搗碎后的番茄樣品，并準(zhǔn)確稱取15.00g于85mL聚四氟離心管中，加入4g氯化鈉和20mL乙腈，以14000r/min高速勻漿提取1min，蓋上離心管蓋，在15℃，7000r/min（相對離心力RCF=5369g）離心5min，使乙腈相和水相分層。然后從離心管中吸取10.0mL上層有機(jī)相于100mL茄形瓶中，50℃旋蒸至近干，用4mL丙酮分3次沖洗茄形瓶，并轉(zhuǎn)移至10mL比色管中，最后定容至5.0mL，在漩渦混合器上混勻，過0.22μm濾膜裝瓶（約1.0mL）上機(jī)。

二、結(jié)果與討論

1.升溫程序參數(shù)優(yōu)化

氣相色譜儀設(shè)置參數(shù)比較多，有柱溫度、進(jìn)樣口汽化溫度、升溫程序、載氣流速，尾吹流量等，在眾多影響因素中，以柱溫、升溫程序的影響最大。首先進(jìn)行了恒溫條件試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)恒溫條件下不適合這4種有機(jī)磷農(nóng)藥混合樣的分析，各組份出峰時間長，峰形差，故采用程序升溫的方式進(jìn)行條件摸索，分別以2，6，10，20℃/min，從120℃升溫至220℃，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)柱溫以2℃/min升溫時峰形改善不明顯，以6℃/min升溫雖然峰形有所改善但出峰時間仍較長，而以20℃/min升溫時毒死蜱和甲基對硫磷分離度較差，綜合考慮以10℃/min升溫較為合適。考慮到實際樣品檢測過程中，基質(zhì)中高沸點(diǎn)雜質(zhì)的影響，在4種物質(zhì)依次出峰分離后設(shè)置了以較快的速率升高到了色譜柱能承受的較高柱溫，并保持一定時間，以減少高沸點(diǎn)雜質(zhì)在色譜柱中的殘留。最終優(yōu)化的程序升溫條件為120℃（保持2min），以10℃/min升溫至220℃（保持2min），再以40℃/min升溫至260℃（保持4min），整個過程耗時20min，這4種農(nóng)藥在15min內(nèi)全部出峰，且分離效果良好，如圖1所示。

2.提取液的用量對回收率的影響

提取液的選擇首先要考慮農(nóng)藥的特性，依據(jù)農(nóng)藥極性強(qiáng)弱選擇合適的提取液。本實驗選擇乙腈作為提取液，乙腈極性大能與水混溶，穿透力強(qiáng)，且容易用鹽析出]；按照相似相溶原理，極性強(qiáng)的機(jī)磷農(nóng)藥容易被乙腈提取出來，且一些非極性雜質(zhì)如蠟質(zhì)、葉綠素等不容易被乙腈一起被提取出來，這樣提取出來的樣品雜質(zhì)干擾較少。本實驗以毒死蜱為例，用微型進(jìn)樣針將187.5μL，4μg/mL的毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)液添加到15g番茄樣品中制備成含0.05mg/kg毒死蜱的番茄樣品，按照1.4的前處理步驟處理，乙腈用量分別為15mL、20mL、25mL、30mL、35mL。實驗結(jié)果如圖2所示，使用15mL的乙腈回收率只有59.8%，不能滿足農(nóng)殘測定要求。乙腈從20mL增加35mL回收率從83.2%增加到84.9%，僅增加1.7%，變化不大。從節(jié)約試劑、環(huán)保角度和后續(xù)濃縮步驟的處理出發(fā)選取提取液用量為20mL。

3.離心機(jī)轉(zhuǎn)速（相對離心力）對回收率的影響

鹽含量和離心機(jī)轉(zhuǎn)速（相對離心力）決定了乙腈與含水溶液能否快速分層及分層后乙腈的體積。本實驗根據(jù)番茄本身含水量，加入了4g氯化鈉進(jìn)行鹽析，在高速離心后水相層中仍可見未溶解的氯化鈉沉淀，能夠滿足飽和氯化鈉水相溶液鹽析要求。同樣以毒死蜱為例，用微型進(jìn)樣針將187.5μL，4μg/mL的毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)液添加到15g番茄樣品中制備成含0.05mg/kg毒死蜱的番茄樣品，按照1.4的前處理步驟處理，分別以5000r/min（RCF=2739g），6000r/min（RCF=3944g），7000r/min（RCF=5369g），8000r/min（RCF=7012g），9000r/min（RCF=8875g）離心5min，結(jié)果如圖3所示。隨著離心機(jī)轉(zhuǎn)速（相對離心力）的增加，乙腈和水相分離效果越來越好，當(dāng)轉(zhuǎn)速為5000r/min（RCF=g）時，乙腈和水相分離較差，回收率僅49.2%；當(dāng)轉(zhuǎn)速增加至7000r/min（RCF=5369g），回收率達(dá)到83.8%。隨著轉(zhuǎn)速的繼續(xù)增加回收率變化不大，故本實驗選擇最終離心轉(zhuǎn)速為7000r/min（RCF=5369g）。

4.相關(guān)系數(shù)和檢出限

臨用前用番茄空白樣品基質(zhì)液將濃度為4μg/mL的農(nóng)藥混標(biāo)儲備液稀釋成濃度分別為0.1μg/L、0.25μg/L、0.5μg/L、1μg/L、2.5μg/mL的基質(zhì)加標(biāo)工作曲線。每份工作液平行測定6次。以峰面積對相應(yīng)被測組分的質(zhì)量濃度做線性回歸分析，檢出限以3倍信噪比結(jié)合檢測方法確定。結(jié)果見表1，可以看出用該方法4種農(nóng)藥最低檢出限在0.02～0.04mg/kg之間。2.5加標(biāo)回收率和精密度在經(jīng)組織搗碎的番茄樣品中分別添加3個不同質(zhì)量濃度水平的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，應(yīng)用試驗確定的最佳條件進(jìn)行測定，每個質(zhì)量濃度水平測定3次，加標(biāo)回收率和精密度試驗結(jié)果見表1所示，可以看出用該方法4種農(nóng)藥基質(zhì)標(biāo)液標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)在0.9941～0.9988之間。

三、結(jié)語

綜上所述，氣相色譜法具有分析速度快、靈敏度高、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，在農(nóng)作物有機(jī)磷農(nóng)藥測定中具有良好的應(yīng)用價值。本文建立了一種快速、精確、靈敏的有機(jī)磷農(nóng)藥測定方法，該方法能夠快速、準(zhǔn)確地測定番茄中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，各項參數(shù)指標(biāo)滿足農(nóng)藥殘留分析的要求。

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