何燊 孔之華 黃義方

乳腺癌在我國的發(fā)病率不斷增加, 對女性的生存質(zhì)量造成嚴重影響。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)在腫瘤組織中的血管形成中有著重要作用［1］。增殖細胞核抗原Ki-67是一種和細胞周期有關(guān)的蛋白質(zhì), 是評估腫瘤細胞增殖活性的重要標志物。本文研究了不同分期乳腺癌組織中VEGF、Ki-67表達情況。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 將2013年8月~2017年2月本院接診的134例乳腺癌患者納入本研究, 患者均為女性, 年齡33~75歲,平均年齡(51.34±8.77)歲。根據(jù)患者臨床分期分為Ⅰ~Ⅱ期100例和Ⅲ~Ⅳ期34例, 臨床分期標準參考1997年國際抗癌聯(lián)盟 (UICC)TNM分期標準。患者病理類型均為浸潤性導(dǎo)管癌。Ⅰ~Ⅱ期患者：年齡33~74歲, 平均年齡(50.24±8.14)歲。Ⅲ~Ⅳ期患者：年齡33~75歲, 平均年齡(52.01±8.31)歲。

1. 2 納入及排除標準 納入標準：女性；經(jīng)粗針穿刺組織病理及免疫組化結(jié)果證實為乳腺癌；首次診斷的原發(fā)性乳腺癌, 入組前未經(jīng)過任何治療；臨床分期為Ⅰ~Ⅳ期；對術(shù)前化療有依從性；簽署知情同意書者。排除標準：年齡＞75歲；Karnofsky評分＜80分者；癡呆或完全不合作者；妊娠、哺乳期乳腺癌、炎性乳腺癌；有重要臟器(如心、肝、腎等)功能障礙不能耐受化療及手術(shù)者。

1. 3 方法 主要選取的試劑為Ki-67、VEGF鼠抗人單克隆抗體濃縮液, 免疫組織化學(xué)法采取試劑盒檢測。所有試劑均購自巨能世紀信息科技(蘇州)有限公司。

操作方法：經(jīng)10%甲醛將組織標本固定24 h, 常規(guī)石蠟包埋, 制作組織芯片, 切片厚4 μm, 經(jīng)APES處理載玻片, 將切片貼附于載玻片上, 60℃烤片2 h。根據(jù)試劑盒操作進行免疫組化檢驗。陽性對照：已知陽性組織切片。陰性對照：磷酸緩沖鹽溶液(PBS)緩沖液代替一抗。

1. 4 觀察指標及判定標準 觀察患者乳腺癌組織和癌旁正常組織中Ki-67、VEGF陽性表達情況, Ki-67、VEGF表達和乳腺癌臨床病理因素關(guān)系, Ki-67、VEGF共同表達和乳腺癌臨床病理因素關(guān)系。結(jié)果判斷：根據(jù)著色部位不同判斷,Ki-67在細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性, VEGF在細胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。

1. 5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理。計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 134例患者乳腺癌組織和癌旁正常組織Ki-67、VEGF表達情況比較 134例患者乳腺癌組織中Ki-67、VEGF陽性表達率分別為74.63%、76.87%, 高于癌旁正常組織的0和10.45%, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 134例患者乳腺癌組織和癌旁正常組織Ki-67、VEGF表達情況比較［n(%)］

2. 2 Ki-67、VEGF表達和乳腺癌臨床病理因素關(guān)系 不同TNM分期的Ki-67陽性表達、VEGF陽性表達對比, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的VEGF陽性表達對比, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

2. 3 Ki-67、VEGF共同表達和乳腺癌臨床病理因素關(guān)系 不同TNM分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Ki-67、VEGF均未表達、至少一項表達、共同表達情況比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表 3。

表2 Ki-67、VEGF表達和乳腺癌臨床病理因素關(guān)系［n(%)］

表3 Ki-67、VEGF共同表達和乳腺癌臨床病理因素關(guān)系［n(%)］

2. 4 Ki-67、VEGF共同表達和乳腺癌臨床病理因素關(guān)系分析乳腺癌組織中, Ki-67表達和患者的臨床分期呈顯著正相關(guān)(P＜0.05), Ki-67表達和年齡、腫瘤大小、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無顯著相關(guān)(P＞0.05)。VEGF表達和患者臨床分期、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)(P＜0.05), VEGF表達和年齡、腫瘤大小無顯著相關(guān)(P＞0.05)。Ki-67、VEGF共同表達和乳腺癌腫瘤大小、臨床分期表現(xiàn)呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)。

3 討論

乳腺癌是全世界女性最常見的惡性腫瘤。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究中心(IARC)統(tǒng)計, 乳腺癌占全部女性惡性腫瘤發(fā)病的22.9%；而死亡病例中, 乳腺癌占所有女性惡性腫瘤死亡的13.7%, 占所有女性死亡的1.7%［2］。近幾年對乳腺癌的研究進展中, 對研究多系統(tǒng)的實體腫瘤血管生成與其復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系予以相當重視［3,4］。多項研究已表明, 腫瘤血管的形成與腫瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)密切相關(guān), 是影響腫瘤患者預(yù)后的重要因素［5-8］。

VEGF是一種重要的血管生成刺激因子, 該因子表現(xiàn)為雙重功能, 一種是通過其受體直接刺激血管內(nèi)皮細胞增殖,誘導(dǎo)產(chǎn)生蛋白水解酶、間質(zhì)膠原酶和組織因子來促進血管形成, 另一種是促進腫瘤組織中內(nèi)皮細胞增殖形成結(jié)構(gòu)不良的新生血管網(wǎng), 血管通透性明顯增加, 促進血漿蛋白、纖維蛋白原外滲導(dǎo)致腫瘤間質(zhì)水腫, 引起細胞外基質(zhì)改變有利干腫瘤細胞的進入和侵出, 在合適的微環(huán)境形成新的轉(zhuǎn)移灶, 從而為腫瘤浸潤及轉(zhuǎn)移提供基礎(chǔ)［9-12］。

Ki-67 能準確地反映腫瘤細胞的增殖活性, 并與多種腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)。Ki-67 和其他的腫瘤分子標志物相結(jié)合, 能較好的反映腫瘤增殖活性、對判斷腫瘤的惡性程度、預(yù)后和指導(dǎo)腫瘤的術(shù)后輔助治療有著凋亡和增殖的有價值的標志物［13,14］。Ki-67 在多種惡性腫瘤如乳腺癌中的表達均高于相應(yīng)的正常組織, Ki-67 的陽性表達說明了腫瘤細胞增殖活躍、惡性程度高、容易轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。Ki-67陽性表達說明腫瘤對化療敏感。因此, Ki-67可作為乳腺癌的治療靶標和預(yù)后指標。本文研究結(jié)果顯示, 134例患者乳腺癌組織中Ki-67、VEGF陽性表達率分別為74.63%、76.87%, 高于癌旁正常組織的0和10.45%, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。不同TNM分期的Ki-67陽性表達、VEGF陽性表達比較, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的VEGF陽性表達比較, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。不同TNM分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Ki-67、VEGF均未表達、至少一項表達、共同表達情況比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。乳腺癌組織中, Ki-67表達和患者的臨床分期呈顯著正相關(guān)(P＜0.05), Ki-67表達和年齡、腫瘤大小、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無顯著相關(guān)(P＞0.05)。VEGF表達和患者臨床分期、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)(P＜0.05), VEGF表達和年齡、腫瘤大小無顯著相關(guān)(P＞0.05)。Ki-67、VEGF共同表達和乳腺癌腫瘤大小、臨床分期表現(xiàn)呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)。

總之, 臨床分期和乳腺癌組織中VEGF、Ki-67表達有相關(guān)性。