（黑龍江八一農(nóng)墾大學動物科技學院動物藥學系，黑龍江大慶 163000）

婦女保健是醫(yī)療發(fā)展中的重要研究項目，在婦科病癥研究中，逐漸將中草藥滲透其中，因為植物中包含大量雌激素，補骨脂素對人體具有重要作用。雌激素其活性化學成本具有明顯生物學研究效應。比如補需藥其主要選擇補骨脂，屬于豆科草本植物果實，具有很好的補腎壯陽功效。對補骨脂素中的植物雌激素作用展開實驗研究，針對乳腺癌細胞分析其作用，為婦科臨床治療的發(fā)展提供更多幫助。

1 補骨脂素的植物雌激素內(nèi)涵

所謂植物雌激素，主要是植物在光合條件下因為弱雌激素作用所產(chǎn)生的化合物。因為雌激素在低親和度條件下，與植物產(chǎn)生雌激素樣效應，所以產(chǎn)生植物雌激素。從分子結構上分析，補骨脂素的植物雌激素與哺乳動物身體中所包含的雌激素結構具有相似之處，都屬于生物活性成分，都對婦女保健具有治療作用。在植物雌激素其本身并不屬于激素，補骨脂素的植物雌激素包含大豆、亞麻籽等。

2 補骨脂素的植物雌激素作用

補骨脂素的植物雌激素屬于外源性激素類型，其不需要其他途徑能夠直接在機體內(nèi)參與內(nèi)分泌調(diào)節(jié)程序。雌激素在一定劑量條件下，將其結合ER，能夠很好地激發(fā)出雌激素的作用。實驗研究發(fā)現(xiàn)其相似于身體中雌二醇17β的功效，因為食物中包含的雌激素劑量充足，其對婦科炎癥與更年期病癥具有很好的治療作用，同時也能夠緩解絕經(jīng)后的骨質(zhì)疏松病癥，主要治療方法是代替治療手段。因為雌激素類型不同，所產(chǎn)生的治療效果也存在很多差別，比如內(nèi)源性的雌激素，尤其是異黃酮中的雌激素，其治療功效明顯，并且能夠代替子宮切除后的作用。對于補骨脂素的植物雌激素研究，很多發(fā)達國家針對其功效，采取人工合成的方式，利用雌激素為原材料制作雌激素代用品依普黃酮，主要治療病癥為骨質(zhì)疏松。

如果應用低劑量的植物雌激素，將其與ER相結合，繼而形成復合物，其本身會受到結合部位的影響，幫助人體很好的組織過多雌激素分子與身體中的受體結合，從而削減靶細胞的應答效率，不僅能夠達到抗刺激素的目的，還能增強人體抵抗能力。補骨脂素的植物雌激素，將其結合乳腺細胞，提升ER競爭地位，并且球蛋白在刺激性激素刺激下形成，這樣一來很好的抑制絡氨酸酶活性變化，降低促細胞增殖效果，很好的組織了子宮癌以及乳腺癌病癥的出現(xiàn)。

植物雌激素對于乳腺疾病的治療，還體現(xiàn)在乳腺癌細胞增殖方面，當然這方面內(nèi)容還處于研究狀態(tài)，很多機制并不清晰。相關研究資料顯示，因為補骨脂素的植物雌激素具有亞型ERα、ERβ，這與雌激素關系緊密。乳腺組織中兩種受體本身都處于正常狀態(tài)，其中優(yōu)勢方為ERβ，但是一旦比例發(fā)生變化，作為優(yōu)勢方的ERβ將會提升腫瘤出現(xiàn)的可能性。這期間需要補骨脂素的植物在雌激素利用ERα為載體進行細胞增殖，防止細胞繼續(xù)惡變。

3 某實驗室補骨脂素的植物雌激素實驗操作

①細胞培養(yǎng)

在細胞培養(yǎng)中，具體培養(yǎng)對象為乳腺癌細胞與子宮內(nèi)膜癌細胞，以常規(guī)細胞培養(yǎng)的方式，選擇小牛血清，含量為10%，融入高糖溶液之后，注意培養(yǎng)的溫度必須為37℃，同時含有5%的CO2，飽和度濕度也必須符合試驗標準。具體細胞培養(yǎng)之前，需要提前4d洗滌細胞，應用PBS，之后培養(yǎng)先選擇無酚紅DMEM培養(yǎng)，這樣就能將細胞中的雌激素消耗殆盡。

②細胞增殖試驗

細胞增殖步驟操作期間，首先T47D細胞傳代必須滿足3次，完成上一培養(yǎng)步驟之后，選擇處于生長期的細胞，同時以胰蛋白酶進行消化，含量為0.25%，利用PBS洗滌，確保洗滌次數(shù)在2次以上，及時往其中加入無血清DMEM，將細胞密度控制在有限的孔板內(nèi)，并且保證培養(yǎng)液的體積控制在200μL。等到24h培養(yǎng)結束之后，細胞會發(fā)生明顯變化，緊貼細胞壁，這樣需要將細胞轉(zhuǎn)換為1×10-8mol·L-1ICI182，780，在此條件下受試物必須設置不同復孔，滿足試驗需要。將其中的培養(yǎng)液吸去，以酶聯(lián)免疫檢測儀為主要檢測手段進行吸光度測定，并且計算具體的增殖率。具體增殖率計算公式如下：

PR（%）=（實驗組A/溶劑對照組A）×100%

根據(jù)具體試驗計算獲得計算數(shù)據(jù)，同時測定期間因為T47D細胞相同，所以補骨脂素藥物主要為1×10-7mol·L-1，或者是1×10-6mol·L-1。

③細胞株培養(yǎng)與計算之后，需要測定PRmRNA，主要以RTPCR法進行檢測。需要選擇無酚紅DMEM，含量為5%，將已經(jīng)培養(yǎng)了4d的細胞進行試驗，以培養(yǎng)瓶為設備，進行無血清借種，靜置24h之后觀察細胞的貼壁情況，隨即進行試劑提取，根據(jù)藥物說明書應用，將試驗情況詳細記錄。

④流式細胞術檢測步驟中，仔細觀察細胞中ER-α，ER-β變化情況，并且準確記錄。與此同時還需要與上述的細胞培養(yǎng)銜接，觀察靜置24h后的細胞壁變化。時間加到48h，并且洗滌細胞，用PBS洗滌次數(shù)為2，進行細胞重懸，以5%血清為輔助，將ER-α，ER-β抗體進行冰孵，時間為40min。避光放置，以免因為光照影響試驗結果。最后利用細胞儀進行細胞檢測。

⑤試驗操作期間必須仔細進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，所有數(shù)據(jù)結果都必須以±s的形式表示，同時利用數(shù)據(jù)處理軟件將數(shù)據(jù)專業(yè)處理，參考統(tǒng)計學原理展開檢驗分析。