□ 吳國輝 王柳玲 鄧偉恒 廣州檢驗(yàn)檢測認(rèn)證集團(tuán)有限公司

糖主要包括單糖（葡萄糖、果糖等）、雙糖（蔗糖、乳糖等）和多糖（淀粉、纖維素等），不同類型的酒含有不同的糖，葡萄酒、果酒主要含果糖、葡萄糖；黃酒主要含葡萄糖；而大部分的配制酒添加了白砂糖，即主要含蔗糖，所以酒的總糖主要為果糖、葡萄糖、蔗糖三者的加和。糖在酒中發(fā)揮著重要作用，如改善口感，但糖會(huì)帶來一定的健康問題，如肥胖、糖尿病、高血壓等?？偺鞘鞘称返闹匾煞种唬偺呛恳彩鞘称沸袠I(yè)中評(píng)價(jià)產(chǎn)品質(zhì)量、營養(yǎng)、風(fēng)味的指標(biāo)之一[1]，因此為了保證和控制酒的質(zhì)量，建立簡單、可靠且快速的糖類物質(zhì)成分分析及含量測定方法具有重要意義。

目前，國內(nèi)對(duì)酒的總糖檢測方法主要是滴定法——直接滴定法[2]適用于果酒、葡萄酒、露酒；亞鐵氰化鉀滴定法[3]適用于干、半干黃酒；廉愛農(nóng)法[3]適用于甜、半甜黃酒。以上方法都有一個(gè)共通點(diǎn)，就是對(duì)樣品中總糖含量、實(shí)驗(yàn)過程中的加熱溫度、滴定操作、滴定速度以及實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)等要求嚴(yán)格[4]。滴定法操作步驟多、費(fèi)時(shí)長，影響因素也多，特別是含糖量較多的色酒、配料雜的酒，此類產(chǎn)品終點(diǎn)難判定，容易導(dǎo)致測量結(jié)果產(chǎn)生誤差，而通過加入活性炭對(duì)有顏色的酒吸附脫色再測定，可以使樣品變?yōu)闊o色，從而使滴定終點(diǎn)容易判定。但有結(jié)果表明，不論在何種條件下，隨著活性炭添加量的增加,吸附色素效果增強(qiáng)的同時(shí)吸附的糖也隨之增加，吸附時(shí)間越長，活性炭吸附的糖越多，致使測得結(jié)果偏低[5]。此外，不同類型的酒采用不同的滴定法，也會(huì)導(dǎo)致每天處理的樣品量少，效率低。高效液相色譜法具有普及率高、操作簡便、快速、分離效果好等優(yōu)點(diǎn)，是目前檢測糖類物質(zhì)的主要手段。本文將通過優(yōu)化液相色譜分離的條件檢測酒類中的幾種糖，結(jié)合酒類中糖的主要成分，建立高效液相色譜法測定酒類中總糖的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters e2695高效液相色譜儀，配備Waters 2414示差檢測器；果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖標(biāo)準(zhǔn)品，來源于Dr.Ehrenstorfer GmbH；超純水（18.2MΩ），實(shí)驗(yàn)室自制；乙腈（色譜純）；酒樣購自本地超市。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制[6]

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖標(biāo)準(zhǔn)品各0.25g（精確至0.1mg）于50mL燒杯中，用超純水溶解，轉(zhuǎn)移并定容至25mL容量瓶中，保存在4℃冰箱中。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別取1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10mL容量瓶中，用超純水定容至刻度。

1.3 樣品前處理

酒類樣品基質(zhì)相對(duì)簡單，不含蛋白質(zhì)、脂類等復(fù)雜物質(zhì)，可直接過0.45 μ m微孔濾膜至進(jìn)樣瓶，供高效液相色譜分析。

1.4 液相色譜條件

色譜柱：Athena NH2，120A，4.6×150mm，3 μm。

流動(dòng)相：乙腈+水=75+25（V/V）。

流速：1.0mL/min。

進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30℃；采集時(shí)間：15min。

檢測器溫度：35℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

2.1.1 流動(dòng)相的選擇

在70%～80%范圍內(nèi)考察不同比例的（乙腈+水）流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，增加乙腈的比例時(shí)，峰形有效改善，有利于各組份的分離，但分析時(shí)間會(huì)延長；當(dāng)增加水的比例時(shí)，分析時(shí)間變短，但分離度變小，且水的比例過大時(shí)，不利于流動(dòng)相在漂移管內(nèi)的汽化，使基線噪聲增大，從而使靈敏度降低。綜合考慮分離效果、分析時(shí)間等因素，選擇乙腈+水為75+25（V/V）的體系作為流動(dòng)相。使用優(yōu)化后的液相色譜條件分離5種糖的色譜圖，如圖1所示，5種糖分離良好，峰形對(duì)稱。同一條件分析某一酒樣的色譜圖，如圖2所示，糖分離度良好，峰形對(duì)稱。

圖2 酒樣品色譜圖

2.1.2 色譜柱溫度的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)考察了色譜柱溫度（20～40℃）對(duì)樣品中糖的檢測的影響，如圖3所示。隨著色譜柱溫度的升高，色譜峰保留時(shí)間提前，分析時(shí)間縮短，但是隨著柱溫的升高，色譜峰的峰形會(huì)變得不規(guī)則；而色譜柱溫過低，保留時(shí)間相近的目標(biāo)峰分離效果不佳。綜合考慮分析時(shí)間與分離度，本實(shí)驗(yàn)選擇色譜柱溫度為30℃，目標(biāo)峰保留時(shí)間適宜且分離度佳。

圖3 不同色譜柱溫度對(duì)糖的色譜峰影響（出峰時(shí)間順序與圖2一致）

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 線性關(guān)系考察

參照1.2節(jié)方法配制糖混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，分別以各分析物的峰面積（y）和對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度（x，mg/m L）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程和相關(guān)系數(shù)，見表1，各組分呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.99 9。

表1 5種糖的線性方程和相關(guān)系數(shù)

2.2.2 加標(biāo)回收率和精密度試驗(yàn)

為驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度，把某一樣品和混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液按一定比例進(jìn)行了3個(gè)梯度的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)（n=6），實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。5種糖的平均回收率為90.1%～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）在0.8%～1.5%之間，方法顯示了良好的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。

表2 某一酒樣中5種糖的加標(biāo)回收率和精密度

2.3 具體樣品分析

采用本方法檢測15個(gè)具有代表性酒樣品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的含量，從而計(jì)算出總糖含量，將本方法與現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行比較。結(jié)果如表3所示，兩種方法的測定結(jié)果較為一致。結(jié)果表明，本方法簡單、準(zhǔn)確、快速，可用于酒類中總糖含量的測定。

表3 本法測定酒類中5種糖含量與國家標(biāo)準(zhǔn)方法檢測結(jié)果的比較（單位：g/L）

3 結(jié)論

本研究通過優(yōu)化液相色譜分離的條件，樣品經(jīng)過簡單的過濾膜處理直接上機(jī)，示差檢測器檢測，外標(biāo)法定量測定酒類的糖，從而計(jì)算出總糖含量，建立了高效液相色譜法測定酒類的總糖。該方法操作簡單、快速，定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，適用于酒類中總糖的測定。

[1] 黎濤.總糖測定中取樣量的確定[J].熱帶作物機(jī)械化,1998(02):19-21.

[2] GB/T 15038-2006 葡萄酒、果酒通用分析方法[S].

[3] GB/T 13662-2008 黃酒[S].

[4] 吳東林，張建寧，于飛，閆飛.對(duì)國標(biāo)GB/T 15038-2006中總糖還原糖測定方法的改進(jìn)[J].科技風(fēng)，2009(07):29.

[5] 江龍發(fā).干紅葡萄酒中總糖快速測定技術(shù)研究[D].南昌大學(xué)，2015.

[6] GB 5009.8-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定[S].