朱靖博, 李文玉, 肖 偉, 丁 燕*, 黃文哲, 屠鵬飛,3, 王永華,4
(1. 大連工業(yè)大學(xué)食品學(xué)院, 遼寧 大連 116034; 2. 江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司, 江蘇 連云港 222001;3. 北京大學(xué), 北京 100871; 4. 西北農(nóng)林科技大學(xué), 陜西 楊凌 712100)
色譜技術(shù)為中藥成分分析及分離制備提供了行之有效的方法,在線與離線的中藥成分二維液相色譜分析顯著地提高了中藥化學(xué)成分分析和識(shí)別的效率[1-5],如Ji等[6]運(yùn)用離線二維親水-反相液相色譜分離鑒定出銀杏中的125種化學(xué)成分。在中藥成分制備領(lǐng)域,袁云等[7]利用離線二維反相液相色譜-超臨界流體色譜的方法分離制備瓜蔞子有效成分,結(jié)果證明此方法具有良好的正交性。賈有梅等[8]運(yùn)用二維親水-反相制備液相色譜分離純化絡(luò)石藤中的化學(xué)成分,最終得到14個(gè)高純度化合物,且具有良好的正交性。Yang等[9]以離線二維超臨界流體色譜-反相液相色譜分離制備了牛蒡子化學(xué)成分,得到了12個(gè)高純度化合物。傳統(tǒng)的色譜分離方法對于復(fù)雜的中藥化學(xué)體系存在色譜分辨率低、峰容量低、樣品峰重疊等一系列問題,難以實(shí)現(xiàn)中藥成分高通量、系統(tǒng)性的分離制備。而二維色譜的分離制備因?yàn)槠淞己玫恼恍?、更高的峰容量、較高的分辨率和高通量等特點(diǎn),具有廣闊的應(yīng)用前景。到目前為止,專業(yè)的二維色譜分離裝置的研制及系統(tǒng)性分離方法的研究尚未見報(bào)道,常規(guī)的二維液相色譜在分離制備過程中上樣量少、獲得的有效部位的物質(zhì)量少、重復(fù)性差、成分的系統(tǒng)性獲得效果差及在線操作手段復(fù)雜,這些因素仍然制約著中藥有效成分的系統(tǒng)性認(rèn)知、活性成分研究及新藥創(chuàng)制。
中藥五味子(Schisandrachinensis(Turcz.) Baill.)具有收斂固澀,益氣生津,補(bǔ)腎寧心的功效,用于治療久咳虛喘,夢遺滑精,津傷口渴,短氣脈虛,內(nèi)熱消渴,心悸失眠等癥[10,11]?,F(xiàn)代研究表明,木脂素類化合物是五味子的主要活性成分[12],五味子中分離鑒定出的木脂素類化合物已有兩百多種。
本文在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)分離策略及設(shè)備研究[13]的基礎(chǔ)上,以五味子木脂素提取物為對象,以實(shí)驗(yàn)室自主研發(fā)的基于分離-富集模式的二維反相色譜儀-制備色譜工廠(preparative chromatography platform, PCP)為手段,通過色譜專家系統(tǒng)模擬優(yōu)化分離條件,建立了可重復(fù)獲得有效部位、高通量、系統(tǒng)性分離五味子木脂素類化合物的方法。
分析型儀器:UltiMate 3000高效液相色譜儀(配有Ultimate 3000泵、UltiMate 3000自動(dòng)進(jìn)樣器、UltiMate 3000光二極管陣列檢測器),美國Dionex公司。分析色譜柱為C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm),大連博邁科技發(fā)展有限公司。
制備型儀器:2D-1000型制備色譜工廠,大連博邁科技發(fā)展有限公司。PCP為自主研發(fā)的基于分離-富集模式的集分離方法開發(fā)、在線分離-富集于一體的天然藥物二維制備色譜儀,裝置由3臺(tái)BP1000制備型高壓恒流泵、主分離柱C18(250 mm×30 mm, 10 μm)、18個(gè)一級富集柱C18(80 mm×30 mm, 10 μm)、9個(gè)二級富集柱C18(80 mm×30 mm, 10 μm)組成,兩級分離間以2位8通閥相連,實(shí)現(xiàn)成分的分離、富集、解吸附與流路切換,分離柱后連接UV1000紫外-可見光檢測器和ZB1000梯度混合器,并配有Clarity色譜工作站。
第一維和第二維分離模式的分離-富集原理如圖1所示。該裝置的第一維分離可以將復(fù)雜的天然產(chǎn)物分離成18個(gè)可重復(fù)獲得的組分或有效部位,第二維分離使其進(jìn)一步分離,得到單體化合物,全部的分離工作在計(jì)算機(jī)控制下,極大地提高了中藥等天然藥物系統(tǒng)性分離制備的效率,為中藥、植物藥、海洋藥物有效部位、成分的制備分離、活性篩選提供了高效、可靠的平臺(tái)。
圖 1 PCP(a)第一和(b)第二維分離模式圖Fig. 1 (a) First- and (b) second-dimensional separation pattern diagram of preparative chromatography platform (PCP) Separation column 1 of the first- and the second-dimensional chromatography: C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm), separation column 2-5 of the first- and the second-dimensional chromatography: C18 (250 mm×30 mm, 10 μm); enriching column 1-18 of the first-dimensional chromatography and enriching column 1-9 of the second-dimensional chromatography: C18 (80 mm×30 mm, 10 μm); pump A and B: gradient elution pump; pump C: diluent solution of enrichment; LOAD valve: two position six-way valve.
甲醇、乙腈(均為色譜級),石油醚、乙酸乙酯(均為工業(yè)級),均購于天津大茂化學(xué)試劑廠;去離子水為實(shí)驗(yàn)室自制。
200~300目柱色譜硅膠購于青島海洋化工廠分廠;五味子木脂素提取物,購于湖北夢陽藥業(yè)股份有限公司;五味子木脂素標(biāo)準(zhǔn)品:五味子醇甲、戈米辛D、戈米辛A、五味子甲素、戈米辛N、五味子丙素(純度均≥98%),購于上海源葉生物科技有限公司。
稱取500 g五味子木脂素提取物拌入1 kg 200~300目硅膠,在60 cm×20 cm的硅膠柱上用石油醚-乙酸乙酯(1∶1, v/v)進(jìn)行真空色譜分離,收集后得到五味子木脂素富集樣品作為分離對象。
1.3.1第一、二維制備色譜條件的優(yōu)化
將PCP切換到方法開發(fā)模式,以第一、二維色譜分離柱1: C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)作為方法開發(fā)柱,在4個(gè)梯度洗脫條件下,對五味子木脂素富集樣品進(jìn)行HPLC分析,獲得樣品的色譜分離信息,根據(jù)4個(gè)色譜圖,選定要分離的對象,將其保留時(shí)間、峰高,依次對應(yīng)制成表格,導(dǎo)入XTool軟件,模擬優(yōu)化分離條件。對優(yōu)化的分離條件進(jìn)行驗(yàn)證分離,并線性放大,將其轉(zhuǎn)化為第一維分離條件。
將五味子樣品配制成質(zhì)量濃度為80 mg/mL的樣品,PCP切換至一維分離模式,采用構(gòu)建的分離條件,選用C18色譜柱(250 mm×30 mm, 10 μm)進(jìn)行第一維分離,根據(jù)保留時(shí)間、分離度等參數(shù),確定木脂素部位分離的時(shí)間程序。固定色譜柱、流動(dòng)相、流速、檢測波長,應(yīng)用確定的第一維分離條件及分離的時(shí)間程序,打開輔助泵C,對五味子提取物進(jìn)行第一維分離和部位富集,重復(fù)進(jìn)樣3次,將富集后的組分用甲醇從富集柱上洗脫下來,濃縮蒸干,并測定樣品質(zhì)量。采用同樣方法,模擬和優(yōu)化第一維分離后每個(gè)部位的第二維分離條件。
1.3.2PCP線性放大及重現(xiàn)性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
選擇分析色譜柱C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)和制備柱C18(250 mm×30 mm, 10 μm),將分析級的樣品濃度與流速采用線性放大的方法應(yīng)用于PCP,考察制備級上樣量與流速大小,上樣量與流速按照公式(1)和(2)確定:
(1)
(2)
其中M為樣品量;V為流速;L為色譜柱長度;r為色譜柱內(nèi)徑;a表示分析柱;p表示制備柱。線性放大到PCP,并以PCP中柱壓、分離度和樣品溶解度等為指標(biāo),調(diào)整上樣濃度及流速,得到第一維色譜條件。
政府是消除貧困的主體,具有強(qiáng)大的政治優(yōu)勢和資源動(dòng)員能力,是我國扶貧攻堅(jiān)取得成功的關(guān)鍵。通過“當(dāng)?shù)卣鲗?dǎo)、人民銀行牽頭、金融機(jī)構(gòu)參與”的組織形式,建立多部門聯(lián)動(dòng)機(jī)制,實(shí)現(xiàn)資源聯(lián)結(jié),彌補(bǔ)單靠政府或僅依靠金融機(jī)構(gòu)實(shí)施金融精準(zhǔn)扶貧的弊端,解決易地扶貧搬遷后續(xù)扶持金融服務(wù)工作的政策保障、資源整合、信貸支持、精準(zhǔn)匹配以及風(fēng)險(xiǎn)分擔(dān)等問題。
將上述得到的第一維色譜條件應(yīng)用于PCP,在一維分離模式下進(jìn)行分離制備,添加輔助泵C,手動(dòng)進(jìn)樣3次,將第一維分離組分富集到富集柱上。將PCP切換至二維分離模式,依次將每個(gè)第一維富集柱作為上樣柱,對其進(jìn)行第二維分離。并將上述所有步驟重復(fù)進(jìn)行3次,用HPLC分別檢測這3次分離后的樣品成分,根據(jù)其保留時(shí)間、峰高、峰面積等指標(biāo)檢驗(yàn)PCP對于五味子木脂素的分離是否具有重現(xiàn)性。
1.3.3五味子木脂素的系統(tǒng)性分離制備
選擇水(A)和甲醇(B)為流動(dòng)相,檢測波長為254 nm,將PCP切換至一維分離模式,每次進(jìn)樣體積為2 mL,采用構(gòu)建的第一維分離條件和時(shí)間程序進(jìn)行分離,分離后的樣品組分分別吸附到1~10號富集柱上,重復(fù)進(jìn)樣3次;將PCP切換至二維分離模式,將富集柱作為上樣柱,采用構(gòu)建的第二維分離條件,分別將富集柱上的樣品進(jìn)行第二維分離;重復(fù)第一、二維分離步驟,用HPLC分析第二維分離后的樣品,純度大于95%的樣品用NMR鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu),并進(jìn)一步用標(biāo)準(zhǔn)品對各化合物做定性分析。
4個(gè)洗脫條件(1) 0~50 min, 15%B~95%B; (2) 0~40 min, 30%B~100%B; (3) 0~70 min, 20%B~100%B; (4) 0~60 min, 40%B~95%B下的HPLC色譜圖如圖2所示。在4個(gè)洗脫條件下選定30個(gè)色譜峰,將保留時(shí)間、峰高制成表格,導(dǎo)入Xtool軟件,軟件模擬預(yù)測的洗脫條件為:0~5 min, 60%B~65%B; 5~25 min, 65%B~70%B; 25~35 min, 70%B~85%B; 35~40 min, 85%B~100%B,預(yù)測圖如圖3a所示,應(yīng)用預(yù)測的梯度條件得到的實(shí)際色譜圖如圖3b所示。
圖 2 五味子提取物在4個(gè)洗脫條件下的色譜圖Fig. 2 Chromatograms of the extracts of Schisandra chinensis under four elution conditions Mobile phases: (A) water; (B) methanol. Gradient elution conditions: (1) 0-50 min, 15%B-95%B; (2) 0-40 min, 30%B-100%B; (3) 0-70 min, 20%B-100%B; (4) 0-60 min, 40%B-95%B.
圖 3 (a)XTool軟件模擬色譜圖和(b)模擬條件下的色譜圖Fig. 3 Chromatograms (a)simulated by XTool software and (b) under simulated conditions
從圖3中可以看出,軟件模擬與實(shí)際的色譜圖在色譜保留時(shí)間上基本一致。由于五味子木脂素在制備過程中進(jìn)樣量加大,需要進(jìn)一步優(yōu)化梯度條件。HPLC洗脫條件應(yīng)用于PCP優(yōu)化后得到的第一維制備的梯度條件為:0~5 min, 60%B~65%B; 5~25 min, 65%B~70%B; 25~35 min, 70%B~85%B; 35~40 min, 85%B~85%B; 40~50 min, 85%B~90%B; 50~60 min, 90%B~95%B; 60~62 min, 95%B~100%B。根據(jù)保留時(shí)間及分離度將五味子木脂素分為9個(gè)簡單組分,其中由于1號色譜峰前面有一段洗脫梯度,PCP不能跳躍富集,所以將1號色譜峰前面的洗脫時(shí)間設(shè)定在1號富集柱上,同時(shí)獲得第一維分離制備的時(shí)間程序:1號柱0~20 min; 2號柱20~28 min; 3號柱28~32 min; 4號柱32~38 min; 5號柱38~42 min; 6號柱42~45 min; 7號柱45~47 min; 8號柱47~50 min; 9號柱50~54 min; 10號柱54~58 min。
上樣量根據(jù)公式(1)進(jìn)行線性放大。HPLC樣品分析時(shí)的質(zhì)量濃度為2 mg/mL,線性放大后的上樣質(zhì)量濃度為80 mg/mL;流速根據(jù)公式(2)進(jìn)行放大,HPLC流動(dòng)相流速為0.5 mL/min,得到制備級流速為21 mL/min。
應(yīng)用第一維色譜條件,將五味子樣品進(jìn)行第一維分離。根據(jù)色譜峰的分離度,將第一維分離結(jié)果分為9個(gè)簡單組分,重復(fù)第一維分離3次,得到的色譜圖如圖4所示。保留時(shí)間及其他色譜峰信息基本相同。
圖 4 五味子提取物3次第一維分離的色譜圖Fig. 4 First dimensional separation chromatograms of Schisandra chinensis extracts separated for three times Peak Nos. are the same as in Fig. 3.
重復(fù)3次第一維分離后,選擇第1、4、7、10、14、15、24、26、27和30號一共10個(gè)色譜峰,分別測得相對保留時(shí)間的RSD值,如表1所示,RSD均小于3%,證明PCP分離五味子木脂素具有重現(xiàn)性。
表 1 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)
2.3.1五味子木脂素的第一維分離制備結(jié)果
應(yīng)用第一維色譜條件對五味子樣品進(jìn)行第一維分離,制備色譜圖如圖5所示,重復(fù)進(jìn)樣3次,每次進(jìn)樣2 mL,第一維分離將五味子提取物分成9個(gè)簡單組分,HPLC分析后如圖6所示。測定9個(gè)第一維分離的樣品質(zhì)量分別為:152.9、174.3、43.5、10.7、9.5、9.2、1.3、2.6和3.6 mg,求得第一維分離樣品的得率分別為31.85%、36.31%、9.06%、2.23%、1.98%、1.92%、0.27%、0.54%和0.75%。
圖 5 五味子提取物的PCP第一維分離圖譜Fig. 5 First dimensional separation chromatogram of Schisandra chinensis extracts by PCPPeak Nos. are the same as in Fig. 3.
2.3.2五味子木脂素二維分離制備結(jié)果
9個(gè)一維分離組分進(jìn)行二維分離后得到20個(gè)組分,如圖7所示,其中有10個(gè)化合物純度達(dá)到90%以上,6個(gè)化合物純度達(dá)95%以上。使用13C-NMR和1H-NMR對這6個(gè)高純度化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,并進(jìn)一步用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定性分析,通過保留時(shí)間和紫外光譜分析確定其結(jié)構(gòu),如圖8所示。
圖 6 五味子提取物的9個(gè)第一維分離樣品HPLC色譜圖Fig. 6 HPLC chromatograms of nine samples of Schisandra chinensis extracts after the first dimensional separation Peak Nos. are the same as in Fig. 3.
化合物Ⅰ:淡黃色膏體(20 mg),1H-NMR(400 MHz, CD3OD):δ0.83(d,J=8 Hz, 3H, CH3-17), 1.24(s, 3H, CH3-18), 2.57(d,J=16 Hz, 1H, CHH-6), 2.17(d,J=4 Hz, 1H, CHH-6), 2.38(dd,J=12, 8 Hz, 1H, CHH-9), 2.85(dd,J=8, 4 Hz, 1H, CHH-9), 3.85(s, 6H, 2×OCH3-1, 14), 3.89(s, 6H, 2×OCH3-2, 13), 3.92(s, 6H, 2×OCH3-3, 12), 6.76(s, 1H, PhH-4), 6.71(s, 1H, PhH-11)。碳譜數(shù)據(jù)見表2,與文獻(xiàn)對照[14],二者基本一致,確定化合物Ⅰ為五味子醇甲(schisandrol A),結(jié)構(gòu)如圖9所示。
化合物Ⅱ:無色針狀結(jié)晶(15 mg),1H-NMR(400 MHz, CD3OD):δ1.07(d,J=8 Hz, 3H, CH3-17), 1.09(d,J=8 Hz, 3H, CH3-24), 1.19(s, 3H, CH3-18), 1.22(s, 3H, CH3-23), 1.73~1.77(m, 1H, CH3CH-8), 1.70(s, 1H, OH-7), 1.91(dd,J=12, 8 Hz, 1H, CHH-9), 2.21(dd,J=12, 8 Hz, 1H, CHH-9), 3.19(s, 1H, OH-20), 3.67(s, 3H, OCH3-1), 3.82(s, 3H, OCH3-2), 3.94(s, 3H, OCH3-3), 5.83(s, 1H, H-6), 5.92(d,J=8 Hz, 2H, OCH2O), 6.56(s, 1H, PhH-11), 6.95(s, 1H, PhH-4)。碳譜數(shù)據(jù)見表2,與文獻(xiàn)對照[15,16],二者基本一致,確定化合物Ⅱ?yàn)楦昝仔罝(gomisin D),結(jié)構(gòu)如圖9所示。
化合物Ⅲ:無色針狀結(jié)晶(15 mg),1H-NMR(400 MHz, CD3OD):δ0.82(d,J=8 Hz, 3H,CH3-17), 1.23(s, 3H, CH3-18), 1.75~1.83(m, 1H, CH3CH-8), 2.32(dd,J=12, 8 Hz, 1H, CHH-9), 2.57(dd,J=12, 8 Hz, 1H, CHH-9), 2.41(d,J=8 Hz, 1H, CHH-6), 2.80(d,J=8 Hz, 1H, CHH-6), 3.45(s, 3H, OCH3-1), 3.86(s, 3H, OCH3-2), 3.92(s, 6H, 2×OCH3-3, 14), 5.95(s, 2H, OCH2O), 6.54(s, 1H, PhH-11), 6.76(s, 1H, PhH-4)。碳譜數(shù)據(jù)見表2,與文獻(xiàn)對照[17],二者基本一致,確定化合物Ⅲ為戈米辛A(gomisin A),結(jié)構(gòu)如圖9所示。
圖 7 五味子提取物的20個(gè)第二維分離樣品HPLC色譜圖Fig. 7 HPLC chromatograms of 20 samples from Schisandra chinensis extracts after the second dimensional separation Peak Nos. are the same as in Fig. 3.
圖 8 五味子提取物二維分離得到的單體和標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖及紫外光譜圖Fig. 8 Chromatograms and UV spectra of the standards and monomers from Schisandra chinensis extracts after the first and the second dimensional separations
PositionδⅠⅡⅢⅣⅤⅥ1151.27151.10151.23151.22151.63141.162140.20142.01140.10140.08139.92134.873152.05151.62151.87153.07151.34147.764110.76112.91111.22107.52110.88105.615133.55131.68133.03139.46134.35132.53640.8986.6140.8235.0338.5638.39772.1871.4071.9940.9333.5933.66841.2343.7941.1433.7640.8440.83934.2735.6134.1838.6734.9434.8010134.83137.93133.69134.28137.72137.9811110.96102.49105.72110.93102.62102.5112151.91148.56148.01151.79148.94148.8413140.12138.04135.18139.73134.77134.5214151.14138.40141.07151.07140.85140.9215123.21121.30122.35123.35121.28121.1416123.44122.71123.49122.27123.34122.301714.9617.8214.8811.5721.5011.471828.3328.6928.6920.6112.9020.59O-CH3C-355.0555.2455.1155.1655.15C-1255.1555.20C-1459.6158.5959.6058.5658.54C-159.6659.8559.6059.6059.5758.54C-259.9759.9560.0360.0460.06C-1360.0260.04O-CH2-O101.03100.83100.7100.67100.71C=O176.282075.332138.722273.192325.292410.05
In CD3OD, 100 MHz.
圖 9 五味子木脂素單體化合物的結(jié)構(gòu)圖Fig. 9 Structure diagram of monomers from Schisandra chinensis extracts Ⅰ. schisandrol A; Ⅱ. gomisin D; Ⅲ. gomisin A; Ⅳ. schizandrin A; Ⅴ. gomisin N; Ⅵ. schisandrin C.
化合物Ⅳ:無色針狀結(jié)晶(11 mg),1H-NMR(400 MHz, CD3OD):δ0.76(d,J=4 Hz, 3H, CH3-17), 1.03(d,J=8 Hz, 3H, CH3-18), 1.84~1.95(m, 1H, CH3CH-8), 1.76~1.81(m, 1H, CH3CH-7), 2.25(dd, 1H,J=12, 8 Hz, CHH-9), 1.91(dd, 1H,J=12, 8 Hz, CHH-9), 2.47~2.50(m, 2H, CH2-6), 6.71(s, 2H, PhH-4, 11)。碳譜數(shù)據(jù)見表2,與文獻(xiàn)對照[14,18],二者基本一致,確定化合物Ⅳ為五味子甲素(schizandrin A),結(jié)構(gòu)如圖9所示。
化合物Ⅴ:白色粉末(13 mg),1H-NMR(400 MHz, CD3OD):δ0.74(d,J=8 Hz, 3H, CH3-17), 1.00(d,J=8 Hz, 3H, CH3-18), 1.73~1.82(m, 1H, CH-8), 1.90~1.94(m, 1H, CH-7), 2.41(dd,J=12, 8 Hz, 1H, CHH-6), 2.61(dd,J=12, 8 Hz, 1H, CHH-6), 2.04~2.10(m, 1H, CHH-9), 2.20(dd,J=12, 8 Hz, 1H, CHH-9), 3.48(s, 3H, OCH3-1), 3.76(s, 3H, OCH3-2), 3.86(s, 3H, OCH3-3), 3.89(s, 3H, OCH3-14), 5.95(s, 2H, OCH2O), 6.52(s, 1H, PhH-11), 6.69(s, 1H, PhH-4)。碳譜數(shù)據(jù)見表2,與文獻(xiàn)對照[18],二者一致,確定化合物Ⅴ為戈米辛N(gomisin N),結(jié)構(gòu)如圖9所示。
化合物Ⅵ:無色針狀結(jié)晶(17 mg),1H-NMR(400 MHz, CD3OD):δ0.73(d,J=8 Hz, 3H, CH3-17), 0.98(d,J=8 Hz, 3H, CH3-18), 1.71~1.80(m, 2H, CH-8), 1.84~1.90(m, 2H, CH-7), 1.99(d,J=12 Hz, 1H, CHH-9), 2.23(d,J=8 Hz, 1H, CHH-9), 2.40(dd,J=8, 4 Hz, 1H, CHH-6), 2.54(dd,J=8, 8 Hz, 1H, CHH-6), 3.76(s, 6H, 2×OCH3), 5.95(s, 4H, 2×OCH2O), 6.49(s, 2H, PhH-4, 11)。碳譜數(shù)據(jù)見表2,與文獻(xiàn)對照[18],二者一致,確定化合物Ⅵ為五味子丙素(schisandrin C),結(jié)構(gòu)如圖9所示。
本研究以五味子為研究對象,XTool軟件模擬篩選色譜條件,應(yīng)用反相二維色譜對五味子化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)分離,構(gòu)建了一套系統(tǒng)的五味子木脂素分離制備方法,并重復(fù)得到6個(gè)五味子木脂素單體化合物五味子醇甲、戈米辛D、戈米辛A、五味子甲素、戈米辛N、五味子丙素,同時(shí)運(yùn)用核磁共振數(shù)據(jù)對化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。
本文所用方法簡單、省時(shí)省力、污染少,對于五味子及其他中藥復(fù)雜成分的分離、中藥新藥開發(fā)、藥理活性的研究具有重要意義,為進(jìn)一步對多維色譜分離中藥成分的研究提供重要的依據(jù)。
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