鳳婷，陳徳林，金長碧，劉雁

人乳頭瘤病毒（human papilloma virus,HPV）是一種無包膜的雙鏈DNA病毒，目前已發(fā)現(xiàn)的HPV種類有200多種，然而只有30多種與生殖道系統(tǒng)腫瘤有關(guān)。在臨床上，引起肛門外生殖器尖銳濕疵和宮頸病變（包括宮頸癌）的亞型主要有HPV6、11、16、18、31、33、35和38型等8個亞型[1]?？茖W(xué)家已經(jīng)發(fā)現(xiàn)感染高危型HPV是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的主要原因，這為宮頸癌的防控帶來了新的契機。而HPV感染較為普遍，絕大多數(shù)婦女均感染過HPV，并且多數(shù)為一過性[2]。國內(nèi)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，在我國與宮頸高級別病變密切相關(guān)的HPV型別依次是16、18、45、31、33[3]。近年來，中國宮頸癌的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢[4]?；疾〉摹澳贻p化”趨勢非常明顯。有研究表明，對宮頸癌患者早期診斷、治療，其5年治愈率可達(dá)80%～90%[5]。因此有效的篩查方法是發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變，阻斷、降低宮頸癌發(fā)生的重要手段之一。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 本院婦產(chǎn)科住院患者,女性80例,年齡21～80歲.平均年齡42.3歲。標(biāo)本都以無菌專用棉拭子采集本院婦產(chǎn)科患者宮頸分泌物，加入專用病毒保存液中,旋緊管蓋并密封送檢.

1.2 標(biāo)本采集方法 標(biāo)本都以無菌專用HPV宮頸刷由臨床醫(yī)生采集本院婦產(chǎn)科患者宮頸分泌物放入HPV專用病毒保存液中,旋緊管蓋并密封送檢。

1.3 采集完的標(biāo)本應(yīng)立即送檢或放在4℃冰箱內(nèi)（若現(xiàn)場沒有冰箱，可立即放入冷藏箱內(nèi)），在24小時內(nèi)用冷藏箱運送至實驗室進行檢測。若24小時內(nèi)不能送達(dá)，需置-70℃以下保存。

1.4 核酸提取 ①將密閉送檢宮頸分泌物反復(fù)攪拌洗脫刷上分泌物混勻，準(zhǔn)確吸取200μl標(biāo)本加入EP管中，12 000轉(zhuǎn)離心10 min，去上清；②沉淀中加入500μl無菌生理鹽水，吹打混勻，震蕩數(shù)秒鐘，離心10 min，去上清；③沉淀中加100μl提取液,吹打混勻,震蕩數(shù)秒鐘，瞬時離心數(shù)秒鐘，100℃加熱10 min,12 000離心5 min備用；④將配好反應(yīng)液取36μl于擴增管中，加入提取DNA 4μl后，震蕩數(shù)秒鐘，離心30 s上機擴增檢測。

1.5 試劑 上海之江生物有限公司生產(chǎn)的人乳頭瘤病毒核酸核酸提取宮頸分泌物HPV分型檢測HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、82和66型等，均為批檢合格產(chǎn)品。

1.6 儀器 本次研究采用SLAN-96P核酸檢測儀。

1.7 方法

1.7.1 實驗步驟 按照SLAN-96P核酸檢測操作規(guī)程進行檢測,實時熒光定量PCR技術(shù)可實時監(jiān)測PCR的整個反應(yīng)過程，從整個實時監(jiān)測的熒光曲線上找到擴增反應(yīng)的指數(shù)擴增起始期，利用每一個擴增檢測到達(dá)指數(shù)擴增期起始所需要的擴增循環(huán)數(shù)來進行定性檢測。根據(jù)、臨界、陽性質(zhì)控條件進定性結(jié)果判定分析，確定檢測結(jié)果有效。

1.7.2 質(zhì)量控制 陰性質(zhì)控品的增長曲線不是”S”型曲線或無Ct值；陽性質(zhì)控品的增長曲線呈”S”型曲線且Ct值≤30。結(jié)果判斷：若檢測樣本無典型”S”型擴增曲線或Ct值≥34.8，則判斷為HPV型陰性；若檢測樣本呈典型”S”型擴增曲線或Ct值≤34.8，則判斷為HPV型陽性。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法 用SPSS統(tǒng)計軟件處理，組間比較采用配對資料t檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 本次研究的80例患者都來自臨床住院最終確診為子宮腫瘤、子宮平滑肌瘤、子宮炎癥患者。

2.2 子宮腫瘤36例定性檢出陽性率主要16型為38.9%、52型陽性為27.8%、58型陽性為22.2%、39型陽性為8.3%、82型陽性為8.3%、68型陽性為5.6%。

2.3 子宮平滑肌瘤23例檢出陽性率主要16型為21.7%、52型陽性為17.4%、58型陽性為13.0%、82型陽性為13.0%、39型陽性為8.7%、68型陽性為8.7%。

2.4 子宮炎癥21例定性檢出陽性率主要52型陽性為28.6%、58型陽性為 23.8%、59型陽性為 19.0%、16型為14.3%、18型陽性為9.5%、68型陽性為9.5%、35型陽性為9.5%。各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

3 討論

3.1 人乳頭瘤病毒是一組無包膜的小DNA病毒，能誘發(fā)人和多種高級脊椎動物的皮膚黏膜產(chǎn)生疣和乳頭狀瘤，是引起男、女生殖道感染常見病原體。HPV的血清型超過66種，HPV感染的后果與HPV的型別有密切關(guān)系。 黏膜感染中有近30種類型的HPV可以引起生殖道感染，其危險程度分為低危險型HPV和高危險型HPV（可能導(dǎo)致惡性變）。低危險型HPV6、11、42、43、和44型等，可引起尖銳濕疣，引起惡性變的概率較小。高危險型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、82和66型等，可導(dǎo)致男性陰莖癌和女性宮頸癌。HPV通常經(jīng)性接觸傳染。本次研究80例女性宮頸分泌物高危險型HPV陽性分型在子宮腫瘤、子宮平滑肌瘤、子宮炎癥患者宮頸分泌物中HPV分型結(jié)果來探討如何指導(dǎo)臨床預(yù)防和治療。

表1 HPV陽性80例分型病毒核酸檢測三種病毒子宮腫瘤、子宮平滑肌瘤、子宮炎癥陽性分型關(guān)系[n（%）]Table 1 HPV positive detection of viralnucleic acid in 80 cases of uterine tumor,uterine leiomyoma and uterine inflammation[n(%)]

3.2 此次研究對象為80例，標(biāo)本較少,但是仍然發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒HPV分型陽性患者,子宮腫瘤陽性率高達(dá)45%(36例)，與子宮平滑肌瘤陽性率高達(dá)28.7%（23例）和子宮炎癥陽性率26.3%（21例）。呈顯著性差異，說明高危險型HPV分型檢測陽性患子宮惡性腫瘤概率相當(dāng)高。

3.3 子宮惡性腫瘤HPV分型發(fā)現(xiàn)HPV16型占38.9%與HPV52型占27.8%和HPV58型占22.2%以及其它類型呈顯著性差異，HPV感染導(dǎo)致子宮惡性腫瘤以HPV16型為主，如果三項聯(lián)合檢測88.9%,通過這三聯(lián)合HPV分型可對危險度進行評估。

3.4 子宮平滑肌瘤HPV分型HPV16型占21.7%、HPV52型占17.4%與HPV58型占13.0%,HPV82型占13.0%,發(fā)現(xiàn)子宮平滑肌瘤由人乳頭瘤病毒HPV感染引起主要HPV16、52、58和82型。四項合占65.2%,而HPV16、52和58又是引起惡性腫瘤的主要亞類型。應(yīng)引起高度觀注?？奢^準(zhǔn)確地評估婦女患宮頸癌的危險度。

3.5 子宮炎癥HPV分型HPV52型占28.6%、HPV58型占23.8%、HPV59型占19.0%與HPV16型占14.3%,四項結(jié)果呈顯著性差異,人乳頭瘤病毒HPV感染引起子宮炎癥主要是HPV52、58、59和16型。

3.6 通過人乳頭瘤病毒HPV感染診斷輔助分型檢測，可對危險度進評估，進議作為婦女健康體檢篩查指，及時進行有效預(yù)防和治療，降低患宮頸癌的危險度。

終上所述，子宮腫瘤主要是16型、52型和58型感染為主，子宮平滑肌瘤主要是16型、52型和58型感染為主，子宮炎癥主要52型、58型、59型和16型感染為主。但三項聯(lián)合檢測為88.9%，通過這三聯(lián)合HPV分型可對對危險度進行評估。

參考文獻

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