倪春苗 沈瑛 張靜 姚紅 忻麗菁 沈靜

（1上海市虹口區(qū)疾病預(yù)防控制中心 上海 虹口 200082）

（2浙江嘉興市秀洲區(qū)疾病預(yù)防控制中心 浙江 嘉興 314000）

H7N9禽流感是由A型流感病毒引起的一類人禽共患的呼吸道傳染病，該病毒是一種新型的重組病毒，具有起病急、進(jìn)展快、致死率高等特點(diǎn)。嘉興市秀洲區(qū)在2013年和2015年，共發(fā)生人感染H7N9病例4例，死亡3例，病死率為75%。這對(duì)該地區(qū)的人類健康和公共衛(wèi)生造成了嚴(yán)重威脅。由于嘉興秀洲是一個(gè)家禽養(yǎng)殖大區(qū)，人們有喜愛(ài)吃活禽的生活習(xí)慣，這些都是禽流感在人際間傳播的因素。為了了解活禽市場(chǎng)外環(huán)境禽流感分布情況，為該地區(qū)嚴(yán)峻的防控工作提供有利的科學(xué)依據(jù)，我們對(duì)該轄區(qū)內(nèi)的活禽外環(huán)境進(jìn)行了采樣檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1.材料與方法

1.1 對(duì)象

根據(jù)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心《職業(yè)暴露人群血清學(xué)和環(huán)境高致病性禽流感監(jiān)測(cè)方案（2011年版）》和國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生局《人感染H7N9禽流感疫情防控方案（第三版）》要求，在嘉興秀洲區(qū)設(shè)立了監(jiān)測(cè)點(diǎn)采樣和應(yīng)急監(jiān)測(cè)。選擇了2013年4月—2015年12月之間的樣品。

1.2 監(jiān)測(cè)時(shí)間2013年4月—2015年12月，按監(jiān)測(cè)規(guī)定要求，定期開(kāi)展應(yīng)急監(jiān)測(cè)和病例而暴露溯源監(jiān)測(cè)。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集 擦拭標(biāo)本采集，用蘸有采樣液的棉拭子在籠具、案板上涂抹禽類，或禽肉最常接觸的3～5個(gè)部位，然后放入含5ML采樣液的采樣管中，并將拭子尾部棄去。水樣標(biāo)本采集，用一次性玻璃棒將污水或引用水充分混勻。用20ML一次性注射器采集10ML置于15ML采樣管中。糞便標(biāo)本，用棉拭子從禽籠或地面采集新鮮禽類糞便5g，放入含有5ML采樣液的采樣管中。

1.3.2 標(biāo)本處理按照人感染H7N9 禽流感疫情防控方案(第3版)進(jìn)行。用振蕩器充分振蕩標(biāo)本管1min以上，將黏液打散，用無(wú)菌消毒鑷子將含聚丙烯纖維拭子在管壁反復(fù)擠壓后取出，于4℃靜置5min，待自然沉淀后取上清。

1.3.3 病毒R NA 提取在生物安全Ⅱ級(jí)(BSL－2)實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜內(nèi)進(jìn)行病毒R NA提取，提取方法嚴(yán)格按照試劑盒(ambion)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.4 試劑配置及加樣嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明配置試劑，加5μl標(biāo)本核酸。

1.3.5 核酸擴(kuò)增使用ABI STEP ONE PLUS擴(kuò)增儀，采取江蘇碩世生物科技有限公司PC R擴(kuò)增試劑的檢測(cè)模式。條件設(shè)置和結(jié)果判定嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑盒要求。

2.結(jié)果

2.1 基本情況

2013年1月—2015年12月，共收集了禽類外環(huán)境標(biāo)本620份，A型流感病毒陽(yáng)性標(biāo)本159份，陽(yáng)性率為25.6%，其中2013年采集標(biāo)本數(shù)為213份，陽(yáng)性率為18.3%，2014年采集標(biāo)本數(shù)為179份，陽(yáng)性率為22.9%,2015年采集標(biāo)本數(shù)為228份，陽(yáng)性率為34.6%?？梢钥闯?，陽(yáng)性率呈逐年上升的趨勢(shì)。

2.2 A型流感病毒感染共159份，其中未分型為72份，陽(yáng)性率11.6%,H7為63份,陽(yáng)性率10.2%,H9為19份,陽(yáng)性率11.9%，H5為10份,陽(yáng)性率6.3%。在分型株中，H7的感染率最高為10.2%。其中有5份標(biāo)本重復(fù)感染，4份標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)出H7和H9，一份標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)出H7和H5。

2.3 標(biāo)本類型，（1）籠具表面檫拭標(biāo)本，共146份標(biāo)本，陽(yáng)性標(biāo)本共46份，陽(yáng)性率為31.5%。（2）宰殺或擺放肉案表面涂抹，共79份，陽(yáng)性標(biāo)本28份，陽(yáng)性率35.4%。（3）糞便標(biāo)本249份，陽(yáng)性標(biāo)本37份，陽(yáng)性率14.8%。4.污水標(biāo)本98份，陽(yáng)性標(biāo)本35份，陽(yáng)性率35.7%。5.禽飲水48份，陽(yáng)性標(biāo)本13份，陽(yáng)性率27.1%。在籠具表面擦拭標(biāo)本、污水和禽飲水中共有5份標(biāo)本重復(fù)感染。見(jiàn)表。

表

2.4 不同地區(qū)的農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)陽(yáng)性檢出率不同，洪合為40.4%，建設(shè)為5.4%，王店為30%，王江涇為41.7%，新塍為24.4%，新城為9.4%，油車港為19.0%，高照為6.5%。陽(yáng)性率最高的為王江涇和洪合，分別為41.7%和40.4%。

2.5 休市前后，H7N9陽(yáng)性檢出率的變化 秀洲2014年12月20日采取休市措施，休市前，該區(qū)共采集禽類外環(huán)境標(biāo)本62份，檢出陽(yáng)性標(biāo)本16份，陽(yáng)性率為25.8%，休市3天后，共采集標(biāo)本50份，檢出陽(yáng)性標(biāo)本6份，陽(yáng)性率為12%，與休市前比較，有下降。

3.討論

秀洲區(qū)在2013和2015年，共發(fā)生H7N9感染病例4例，根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查這4例病例都有禽類相關(guān)環(huán)境的暴露史。區(qū)政府高度重視，各部門相互配合，花費(fèi)了大量人力、物力和財(cái)力開(kāi)展環(huán)境H7N9禽流感病毒病原學(xué)監(jiān)測(cè)，并根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果，市場(chǎng)管理部門在2014年11月和2015年10月關(guān)閉了全區(qū)的活禽交易市場(chǎng)。最大可能減少了病例的發(fā)生。

經(jīng)過(guò)三年的外環(huán)境監(jiān)測(cè)，城鄉(xiāng)活禽市場(chǎng)標(biāo)本A型流感病毒陽(yáng)性率較高為25.6%，說(shuō)明城鄉(xiāng)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)活禽交易場(chǎng)所是禽流感病毒傳播的一個(gè)重要渠道。監(jiān)測(cè)中發(fā)現(xiàn)城鄉(xiāng)活禽交易市場(chǎng)，家禽來(lái)源復(fù)雜，市場(chǎng)條件簡(jiǎn)陋，通風(fēng)效果差，衛(wèi)生消毒設(shè)施不健全；普遍存在現(xiàn)場(chǎng)宰殺銷售現(xiàn)象，場(chǎng)所狹小，條件簡(jiǎn)陋，加工流程不規(guī)范，禽臟器廢棄物及污物未得到安全處置；從事禽養(yǎng)殖或交易加工人員預(yù)防意識(shí)淡薄，不戴口罩，徒手作業(yè)，未規(guī)范洗手等現(xiàn)象較普遍。建議應(yīng)加強(qiáng)對(duì)活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的監(jiān)管力度，定期消毒休市制度，必要時(shí)關(guān)閉城區(qū)活禽交易市場(chǎng)。

清洗禽類污水標(biāo)本、籠具表面擦拭標(biāo)本和宰殺或擺放案板表面涂抹的H7N9陽(yáng)性檢出率相對(duì)較高，分別為13.2%，12.3%，和11.3%。糞便標(biāo)本的H7N9陽(yáng)性率相對(duì)較低，為8.0%。實(shí)驗(yàn)室結(jié)果顯示在籠具表面擦拭標(biāo)本、污水和禽飲水中共有5份標(biāo)本重復(fù)感染。，而糞便標(biāo)本陽(yáng)性結(jié)果大多為單一病毒，這與采樣人員在采樣過(guò)程中更傾向于采集新鮮糞便標(biāo)本，而這類標(biāo)本受交叉污染的可能性較小有關(guān)秀洲區(qū)2013—2015年活禽市場(chǎng)環(huán)境樣本FluA陽(yáng)性率為25.6%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于嘉興市的其他地區(qū)。其中2013陽(yáng)性率為18.3%，2014年陽(yáng)性率為22.9%,2015年采陽(yáng)性率為34.6%，可以看出，陽(yáng)性率呈逐年上升的趨勢(shì)，表明秀洲區(qū)市活禽市場(chǎng)外環(huán)境中始終存在H5、H7、H9及其它型別禽流感病毒污染。這可能與秀洲的地理位置有關(guān)。秀洲相對(duì)與其他的地市，地理位置較低，水網(wǎng)密布，到了雨季，經(jīng)常出現(xiàn)水淹的情況，這對(duì)禽流感病毒的傳播提供了有利條件。因此水災(zāi)之后的消毒，特別是對(duì)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的消毒成了重中之重。

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