董麗濤

(周口市婦幼保健院婦產(chǎn)科，河南 周口 466000)

子宮內(nèi)膜癌是臨床上較為常見的婦科生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，相關(guān)研究顯示子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率可達(dá)0.006%以上，且近年來(lái)呈現(xiàn)出了明顯的上升趨勢(shì)[1]。臨床上疾病的長(zhǎng)期發(fā)生發(fā)展，可以導(dǎo)致患者病死率的上升，臨床預(yù)后較差[2]。

通過對(duì)于子宮內(nèi)膜癌發(fā)生過程中相關(guān)生物學(xué)機(jī)制的研究，可以為揭示子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生機(jī)制、病情預(yù)后評(píng)估等提供可靠的參考指標(biāo)。蛋白水平的相關(guān)生物學(xué)分子的改變，可以在影響腫瘤細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化等病理過程中發(fā)揮重要作用，進(jìn)而影響到腫瘤的發(fā)生。熱休克轉(zhuǎn)錄因子-1(heat shock transcription factor -1，HSF-1)是近年來(lái)研究較多的生物學(xué)分子，在甲狀腺癌、乳腺癌等疾病的發(fā)生發(fā)展中均發(fā)揮了重要的作用，但在子宮內(nèi)膜癌中的研究不足[3-5]。本研究收集了術(shù)后或活檢經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本67例，探討了HSF-1在子宮內(nèi)膜癌病灶組織中的異常表達(dá)，并分析了其與患者臨床病理特征間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月至2016年5月在周口市婦幼保健院收集的術(shù)后或活檢經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本67例，年齡36～72歲，平均年齡(56.7±11.8)歲，國(guó)際婦產(chǎn)聯(lián)盟分期標(biāo)準(zhǔn)(FIGO)：Ⅰ期16例、Ⅱ期23例、Ⅲ期19例、Ⅳ期9例，病理學(xué)分化程度：高分化44例、中分化15例、低分化8例。正常子宮內(nèi)膜組織35例，年齡33～69歲，平均年齡(55.0±10.3)歲，兩組研究對(duì)象的年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn) (1)子宮內(nèi)膜癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)[6]；(2)患者接受手術(shù)的術(shù)后標(biāo)本或病理活檢標(biāo)本，經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為子宮內(nèi)膜癌；(3)正常子宮內(nèi)膜組織來(lái)源于婦科門診刮診或因其他原因手術(shù)收集的正常標(biāo)本；(4)標(biāo)本所屬研究對(duì)象的一般資料、臨床病理學(xué)資料完整。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn) (1)接受過放化療、免疫治療的子宮內(nèi)膜癌患者；(2)近半年內(nèi)接受過激素治療的患者；(3)合并子宮肌瘤等其他腫瘤疾?。?4)基礎(chǔ)資料不完整。

1.3標(biāo)本采集及檢測(cè)方法 采用石蠟切片脫蠟至水，切片厚度3 mm，3%H2O2室溫孵育 5 min，采用去離子水水沖洗3次，每次3 min，采用濃度為10% 牛奶蛋白(1 g蛋白加入100 mL純水)封閉，室溫孵育 5 min，加入HSF-1抗體(鼠來(lái)源，南京碧云天生物科技有限公司)， 37 ℃ 孵育 2 h，PBS緩沖液沖洗3次，每次5 min，滴加HRP標(biāo)記的二抗(兔來(lái)源，購(gòu)自羅氏檢測(cè)公司)，37 ℃ 孵育 30 min，PBS 沖洗3次，每次5 min，加入 NBT/BCIP色劑顯色 5 min，復(fù)染，脫水，透明，封片，鏡下觀察。OLIPICS電子顯微鏡購(gòu)自上海精密儀器有限公司，配套試劑購(gòu)自南京泰康生物科技有限公司。

1.4 結(jié)果判斷

免疫組化結(jié)果判定HSF-1蛋白的陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞核，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)，(1)根據(jù)著色強(qiáng)度：0分為無(wú)色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；(2)根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例<5%為1分、陽(yáng)性細(xì)胞所占比例5%～25%為2分、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)26%～50%為3分、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例>50%為4分，兩種積分相乘總分<3分為陰性、≥3分為陽(yáng)性。(-)為總分<3分，陰性表達(dá)；(+)為3～5分，弱陽(yáng)性表達(dá)；(++)為6～9分，中陽(yáng)性表達(dá)；(+++)為>9分，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本中HSF-1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)情況

子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本中HSF-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率71.64%(48/67)，正常子宮內(nèi)膜組織中HSF-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率31.43%(11/35)，兩組陽(yáng)性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1，圖1。

表1 兩組子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本中HSF-1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)情況

A.正常子宮內(nèi)膜組織 B.子宮內(nèi)膜癌組織

圖1兩組子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本中HSF-1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)情況(SP×40)

2.2 子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本中HSF-1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本中HSF-1蛋白在高分化組織中陽(yáng)性表達(dá)率86.96%高于中低分化組織的63.64%、浸潤(rùn)深度≤1/2肌層的陽(yáng)性表達(dá)率87.50%高于≥1/2肌層的62.79%、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為80.49%高于陽(yáng)性組織的57.69%，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本中HSF-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)與患者的年齡、絕經(jīng)情況、病理學(xué)分期、ER及PR的陽(yáng)性表達(dá)無(wú)關(guān)(P>0.05)。見表2。

3 討論

遺傳易感基因、射線及化學(xué)毒物等均可以促進(jìn)子宮內(nèi)膜上皮來(lái)源惡性腫瘤的異常增殖和病變，促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。近年來(lái)相關(guān)流行病學(xué)研究表明，子宮內(nèi)膜癌在年齡介于35～50歲的人群中發(fā)病率可達(dá)0.09%以上[7]。有效的靜脈化療方案可以提高5%左右的5年生存率，并延長(zhǎng)3～4個(gè)月的術(shù)后生存時(shí)間。但一項(xiàng)匯集118例子宮內(nèi)膜癌患者的術(shù)后化療的隨訪研究表明，35%的子宮內(nèi)膜癌患者對(duì)于靜脈化療不敏感，同時(shí)化療的總體治療有效率不足55%，停藥后6個(gè)月內(nèi)的復(fù)發(fā)率可接近25%，臨床預(yù)后較差[8-9]。而對(duì)于子宮內(nèi)膜癌發(fā)病過程中相關(guān)生物學(xué)機(jī)制的研究，可以為子宮內(nèi)膜癌的綜合性放化療提供新的作用靶點(diǎn)，并為子宮內(nèi)膜癌的治療預(yù)后評(píng)估提供參考。

表2 HSF-1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

HSF-1熱休克蛋白家族的重要成員，HSF-1的上升可以通過影響到子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的自身性修復(fù)機(jī)制，進(jìn)而影響到內(nèi)膜上皮細(xì)胞的異常增殖或者分化。HSF-1分子結(jié)構(gòu)中含有的磷酸化的氨基酸序列，在腫瘤細(xì)胞的異常分化等病理過程中，HSF-1合成的拮抗因素增多，并隨著子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的侵襲或者轉(zhuǎn)移而逐漸下降[10-12]。相關(guān)研究顯示，HSF-1是一個(gè)廣譜性腫瘤標(biāo)志物，可以通過激活下游HIPPO信號(hào)通路，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌、肺癌和卵巢癌等惡性腫瘤的病情發(fā)展[13-14]，雖然有研究探討了HSF-1蛋白等在子宮內(nèi)膜癌中的異常表達(dá)，但相關(guān)研究的樣本量較少，臨床資料的收集偏倚較為嚴(yán)重，可信性不高。

本研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌組織中的HSF-1表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示HSF-1的異常表達(dá)可能參與到了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程中。HSF-1的表達(dá)波動(dòng)可以通過影響到腫瘤細(xì)胞周期調(diào)控因子-9及金屬基質(zhì)蛋白-6的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而導(dǎo)致子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞周期調(diào)控異常，促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。Versluis等[15]研究者通過回顧性分析了92例樣本量的臨床資料，發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)后切除病灶組織中，HSF-1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可較普通對(duì)照人群上升25%以上，且患者的病情越為嚴(yán)重，HSF-1的表達(dá)波動(dòng)越為明顯，這與本研究的結(jié)論較為一致。在不同的臨床病理特征中，分化較好的高分化患者，HSF-1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于低分化組，提示HSF-1在保護(hù)子宮內(nèi)膜細(xì)胞分化的過程中具有一定的積極意義，HSF-1可能通過保護(hù)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷，避免過度的癌基因刺激導(dǎo)致的細(xì)胞分化不良的發(fā)生。但需要注意的是，Versluis等的研究中并未發(fā)現(xiàn)不同分化水平組織中的HSF-1表達(dá)差異，這與本研究的結(jié)論存在一定的差別，考慮到臨床病例的納入排除標(biāo)準(zhǔn)的不統(tǒng)一、檢測(cè)方法的不一致等，均可能導(dǎo)致的了結(jié)論的差別。同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)在浸潤(rùn)深度較深及發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，HSF-1的表達(dá)陽(yáng)性率明顯下降，提示HSF-1蛋白表達(dá)的缺失可能對(duì)于影響子宮內(nèi)膜的發(fā)生具有重要的促進(jìn)作用，其機(jī)制考慮可能與HSF-1的表達(dá)下降失去了對(duì)于CYCLIN蛋白等周期調(diào)控因子的保護(hù)作用有關(guān)。而在不同的病理學(xué)分期或者ER及PR受體陽(yáng)性表達(dá)的內(nèi)膜癌組織中，HSF-1的表達(dá)并無(wú)差異，提示HSF-1的表達(dá)并不會(huì)顯著影響到雌孕激素受體的分布。

綜上所述，在子宮內(nèi)膜癌患者組織中，HSF-1存在明顯的異常表達(dá)，同時(shí)HSF-1與患者的細(xì)胞分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理特征密切相關(guān)。但本研究對(duì)于HSF-1與子宮內(nèi)膜癌患者遠(yuǎn)期生存指標(biāo)的分析不足，存在一定的局限性。

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