胡翔

(上海眾勝醫(yī)藥科技有限公司，上海 201203)

參芪首烏顆粒是在參芪首烏補汁的基礎(chǔ)上改劑型而得，參芪首烏補汁由黨參、黃芪、制何首烏、黃精四味組成，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第四冊》，標(biāo)準(zhǔn)號為：WS3-B-0762-91。其功效為補氣養(yǎng)血，益肝腎。用于氣血不足，肝腎虧損貧血，神經(jīng)衰弱，產(chǎn)后血虧。顆粒劑同糖漿劑相比，分裝劑量準(zhǔn)確，質(zhì)量更穩(wěn)定，其生產(chǎn)、運輸、攜帶、儲存更方便，因此比糖漿劑更受患者的歡迎。

原參芪首烏補汁的標(biāo)準(zhǔn)非常簡單[1]，沒有任何藥材的薄層鑒別和含量測定，非常不利于藥品的質(zhì)量控制。質(zhì)量控制不好，藥品的療效就得不到保證。因此我們在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上大幅度地提高了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加了黃芪藥材的薄層鑒別和2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷的含量測定方法。和原標(biāo)準(zhǔn)相比，更能充分有效地保證產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀[安捷倫科技(中國)有限公司，北京];DAD紫外檢測器。

1.2 試藥

2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(以下簡稱為葡萄糖苷)對照品 (批號：110844- 201109)、黃芪甲苷對照品(批號：110781-201314)購自中國食品藥品檢定研究院；參芪首烏顆粒(自制，批號:201511101、20151102、20151103)。乙腈為色譜純;其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃芪薄層色譜鑒別

供試品溶液：取本品適量，稱取5 g，加水150 mL溶解，然后加水飽和的正丁醇溶液提取，共2次，每次30 mL，合并正丁醇液，用濃度為1%的氫氧化鈉溶液洗滌，共2次，每次20 mL，棄去堿水層，再用正丁醇飽和的水洗滌有機層，洗至中性后棄去水層，取有機層溶液置水浴上蒸干，加甲醇0.5 mL溶解蒸干后的殘渣，作為供試品溶液。

對照品溶液：取黃芪甲苷對照品若干，加甲醇制成1 mL含1 mg的溶液，即得。

陰性樣品溶液：按處方量稱取缺黃芪的其他藥味，制成陰性樣品，按上述供試品溶液的制備方法制備。

試驗方法：采用薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，各取10 μL上述三種溶液，點于同一硅膠G薄層板上，展開劑為三氯甲烷-甲醇-水(7∶3∶1)的下層溶液，在展缸里展開后取出，噴硫酸乙醇溶液(10→100)，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。在對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品色譜顯相同顏色的斑點，而陰性樣品色譜無斑點，表明陰性無干擾(圖1)。

注：1.黃芪甲苷對照品;2～4.201511101、20151102、20151103三批樣品;5.陰性對照。

圖1參芪首烏顆粒中黃芪的薄層色譜鑒別

2.2 含量測定

2.2.1色譜條件 色譜柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相為乙腈-水(20∶80)；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：320 nm；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于3 000，且葡萄糖苷與相鄰峰的分離度應(yīng)大于2.0。

2.2.2對照品溶液的制備 精密稱取葡萄糖苷對照品適量，加稀乙醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得。

2.2.3供試品溶液的制備 取裝量差異下的本品，研細(xì)，取約2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入稀乙醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率100 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，取上清液濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4陰性樣品溶液的制備 按參芪首烏顆粒處方及制法制備不含制何首烏的陰性樣品，按上述供試品溶液的制備方法，即得。

2.2.5系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 精密吸取上述三種溶液各10 μL，按上述色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖2。結(jié)果表明，該色譜條件下，葡萄糖苷峰與其他峰分離良好，峰形對稱，且陰性樣品無干擾，理論板數(shù)按葡萄糖苷峰計算不低于3 000，且葡萄糖苷峰與相鄰峰的分離度大于2.0。表明本方法具有良好的專屬性。HPLC圖譜見圖2。

注：A.對照品；B.樣品；C.缺制何首烏陰性對照樣品； 1：葡萄糖苷。

圖2參芪首烏顆粒的高效液相色譜圖

2.2.6線性關(guān)系考察 精密稱取葡萄糖苷對照品適量，加稀乙醇制成每1 mL含葡萄糖苷0.675 mg的對照溶液，作為線性儲備液。分別精密量取線性儲備液0.5、1、2、3、5 mL置5 mL量瓶中，用稀乙醇稀釋成系列對照品溶液，進(jìn)樣，量取色譜峰峰面積。將峰面積A與相應(yīng)的濃度C進(jìn)行線性回歸處理，回歸方程為：A=26.33C-198.28 (r=0.999 8)，線性范圍為 67.5～675.0 mg·L-1。

2.2.7精密度試驗 取對照品溶液(每1 mL含0.2 mg)重復(fù)測定6次，結(jié)果表明6次測定峰面積的RSD為0.78%，表明該方法的精密度良好。

2.2.8重復(fù)性試驗 按含量測定方法，取同一批樣品(批號：20151101)進(jìn)行多次含量測定，結(jié)果樣品中葡萄糖苷含量的 RSD為 0.20%，表明重現(xiàn)性良好。

2.2.9溶液穩(wěn)定性試驗 按含量測定方法，取同一批參芪首烏顆粒樣品(批號：20151101)，分別在0、2、4、 6、8、12 h依次測定其中葡萄糖苷的含量，測得峰面積的RSD結(jié)果為 0.47%。表明在12 h內(nèi)，參芪首烏顆粒的樣品溶液是穩(wěn)定的。

表1 回收率試驗結(jié)果(n=6)

2.2.10回收率試驗 取已測含量的參芪首烏顆粒樣品(批號：20151101)6份，每份約1 g，分別加入精密稱定的對照品，按照“2.2.3”項下方法處理，依上述色譜條件測定其中葡萄糖苷的含量，并分別計算回收率，結(jié)果見表1。

2.2.11樣品測定 取本品10批樣品，按上述色譜條件，測定樣品中葡萄糖苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=10)

3 討論

3.1 薄層鑒別樣品處理方法研究

方中黃芪藥材的薄層色譜鑒別參考《中國藥典》2015年版一部黃芪藥材[7]的薄層色譜鑒別方法，并進(jìn)行了改進(jìn)。通過比較藥典中使用的用中性氧化鋁柱洗脫的方法和直接加水溶解樣品的方法，結(jié)果表明無需經(jīng)過柱洗脫，薄層色譜即可達(dá)到良好的分離效果 ，從而簡化了樣品的處理方法。

3.2 檢測波長的選擇

經(jīng)對對照品溶液進(jìn)行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)在320 nm處有最大吸收峰，此結(jié)果與《中國藥典》2015年版一部制何首烏的含量測定方法和有關(guān)文獻(xiàn)報道相吻合[2-5]，因此選用320 nm為檢測波長。

3.3 流動相的選擇

本實驗參照《中國藥典》中何首烏藥材的含量測定方法和有關(guān)文獻(xiàn)報道[3-6]，在方法研究過程中， 流動相比較了乙腈-水(18∶82)、乙腈-水(20∶80)及乙腈-水(25∶75)，結(jié)果顯示，采用乙腈-水(20∶80)為流動相，系統(tǒng)分離效果較好，故選擇本系統(tǒng)為流動相。

在該條件下，葡萄糖苷與其他峰分離良好，峰形對稱，且陰性樣品無干擾，符合試驗要求。

3.4 供試品溶液制備方法的考察

分別以稀乙醇溶液、乙醇、80%乙醇溶液超聲提取來處理樣品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)葡萄糖苷在稀乙醇溶液中提取完全，分離效果好。同時試驗中對樣品的提取時間也進(jìn)行了考察，最終確定超聲時間為30 min。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)：中藥成方制劑 保護(hù)第一分冊[M].1996.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：175.

[3] 程合理，李文琪.HPLC法測定參竹精膠囊中2,3,5,4,-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量[J].安徽醫(yī)藥，2009，13(6):606-607.

[4] 王慶，薛天樂，葉敏.制何首烏顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國民族民間醫(yī)藥，2014，23(8):27-28,30.

[5] 盛靜.HPLC測定血脂靈片中2、3、5、4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量[J].中成藥，2004，26(7):94-95.

[6] 黃園，陳曉軍，梁霞，等.HPLC法測定參芪首烏補汁中2，3，5，44′-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷的含量[J].廣西科學(xué)，2013，20(4)：282-284.

[7] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：302.