青海畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 812100

豬鏈球菌病是由多種致病性鏈球菌引起的一種嚴(yán)重危害當(dāng)前養(yǎng)豬生產(chǎn)的重要細(xì)菌類(lèi)疾病，我國(guó)將豬鏈球菌病定為二類(lèi)動(dòng)物疫病。豬鏈球菌有35個(gè)血清型，其中鏈球2型是最常見(jiàn)、毒力最強(qiáng)的血清型疾病，是嚴(yán)重的人畜共患病。本文將某豬場(chǎng)疑似豬鏈球病病料中的分離菌，分別進(jìn)行了革蘭氏染色鏡檢、生化反應(yīng)試驗(yàn)、玻片凝集試驗(yàn)和藥敏試驗(yàn)等研究，最終鑒定該分離菌為豬鏈球菌，并確定了該菌株的敏感藥物，采取科學(xué)治療后有效地控制了疫情?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)要介紹如下。

1 病料來(lái)源

采集本地區(qū)某規(guī)?；i場(chǎng)疑似豬鏈球菌病病死豬的關(guān)節(jié)積液及部分組織病料。

2 細(xì)菌分離培養(yǎng)及鑒定

無(wú)菌工作臺(tái)內(nèi)將采集的病料樣品用接種環(huán)劃線接種于含4%牛血清的TSA平板上，37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24小時(shí)，觀察平板上的菌落形態(tài)，可見(jiàn)圓形、乳白色、表面光滑、邊緣整齊且有顯著溶血環(huán)的小菌落。挑取單菌落進(jìn)行革蘭氏染色后，鏡檢發(fā)現(xiàn)該菌為典型的革蘭氏陽(yáng)性菌，呈球形、鏈狀排列。

3 玻板凝集試驗(yàn)

將1.0mL分離菌培養(yǎng)物進(jìn)行離心處理，5000r/分鐘離心2分鐘，棄上清后沉淀，用100μL的滅菌PBS重懸作為凝集抗原，取20μL凝集抗原與等體積的豬鏈球菌2型標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清進(jìn)行玻片凝集試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)分離株與陽(yáng)性血清出現(xiàn)顯著凝集現(xiàn)象，同時(shí)設(shè)立的陰陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果也都成立。

4 生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)

為了進(jìn)一步確定分離菌是否為豬鏈球菌，又進(jìn)行了生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。將該分離菌分別接種于各個(gè)細(xì)菌生化微量反應(yīng)管，觀察生化反應(yīng)特點(diǎn)，結(jié)果顯示該菌發(fā)酵蔗糖、葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露糖等，而且產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不能發(fā)酵木糖、甘露醇和山梨醇等。甲基紅試驗(yàn)和亞甲藍(lán)還原試驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性，過(guò)氧化氫酶和氧化酶結(jié)果呈陰性。

5 藥敏試驗(yàn)

經(jīng)過(guò)上述鑒定，最終確定該分離菌為豬鏈球2型。為了保證有效治療，對(duì)分離菌株進(jìn)行了常規(guī)藥物的藥敏試驗(yàn)。首先將菌株接種于4%牛血清的TSA平板上，然后將阿莫西林、頭孢噻肟、氟苯尼考、青霉素、鏈霉素、氨芐西林、慶大霉素和環(huán)丙沙星共8種藥敏片平貼于培養(yǎng)皿上，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，根據(jù)各個(gè)藥敏片的抑菌圈直徑進(jìn)行結(jié)果判定。結(jié)果表明該菌株對(duì)不同抗生素的敏感程度差異很大，對(duì)阿莫西林和氨芐西林呈高度敏感，對(duì)頭孢噻肟、氟苯尼考和環(huán)丙沙星呈中敏，對(duì)慶大霉素、青霉素和鏈霉素耐藥不敏感。已將藥敏試驗(yàn)結(jié)果反饋給相關(guān)養(yǎng)殖企業(yè)，并指導(dǎo)合理用藥治療，取得了很好的效果。

6 分析與討論

經(jīng)過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該豬場(chǎng)此次疫情的發(fā)生是由于近期天氣驟變、管理不當(dāng)和圈舍清理不及時(shí)，導(dǎo)致豬群抵抗力下降，致使鏈球菌感染體弱的豬只，通過(guò)傳染后使得疫情進(jìn)一步擴(kuò)大。本次所分離的鏈球菌經(jīng)鑒定是鏈球2型，是我國(guó)普遍流行的菌株。分離培養(yǎng)致病性豬鏈球菌時(shí)，對(duì)營(yíng)養(yǎng)和溫度等條件要求比較高，通常需要在添加4%血清或鮮血或適量的葡萄糖等物質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基才可良好生長(zhǎng)，最適培養(yǎng)溫度為37℃，培養(yǎng)時(shí)間為18～24小時(shí)左右，培養(yǎng)基上可見(jiàn)透明、圓形、中央隆起和表面光滑的灰白色小菌落。因?yàn)榭股厮幬锸侵委熂?xì)菌類(lèi)疫病的首選藥物，所以抗生素藥物在養(yǎng)殖場(chǎng)中廣泛應(yīng)用，但是由此引發(fā)了嚴(yán)重的耐藥性問(wèn)題。通過(guò)本次藥敏試驗(yàn)可以看出，分離菌對(duì)不同藥物的敏感程度不同，這就與該養(yǎng)殖場(chǎng)日常不合理使用抗生素有關(guān)。為了發(fā)揮抗生素的最佳效果，必須嚴(yán)禁抗生素的濫用和錯(cuò)用，治療細(xì)菌性疾病的過(guò)程中，最好在進(jìn)行藥敏試驗(yàn)的基礎(chǔ)上選擇藥物，開(kāi)展科學(xué)合理的抗生素治療方案，并且日常預(yù)防和保健時(shí)應(yīng)避免長(zhǎng)期使用一種抗生素類(lèi)藥物。

豬鏈球菌對(duì)外界環(huán)境的抵抗力較強(qiáng)，可長(zhǎng)期存活在糞便、塵土和水等介質(zhì)中。但是豬鏈球菌為條件性致病菌，所以養(yǎng)殖場(chǎng)的日常飼養(yǎng)管理尤為重要，要做好各方面的管理工作。首先要保證豬舍內(nèi)合理的飼養(yǎng)密度，保持干燥，定期通風(fēng)換氣，消滅場(chǎng)區(qū)內(nèi)蟲(chóng)鼠害，每天進(jìn)行圈舍清潔衛(wèi)生清理工作，并定期徹底消毒。其次飼喂?fàn)I養(yǎng)價(jià)值高的全價(jià)飼料，配合適量的青綠飼料，通過(guò)飲食提高豬群的抗病能力。季節(jié)更替時(shí)一定要做好防寒保暖工作，制定適合本場(chǎng)的免疫程序，選用正規(guī)廠家的疫苗科學(xué)免疫。通常每年春秋季節(jié)選用豬鏈球菌鋁膠苗進(jìn)行常規(guī)預(yù)防免疫，仔豬可在30日齡左右接種，45～60日齡進(jìn)行強(qiáng)化免疫一次，免疫后有條件的養(yǎng)殖場(chǎng)可定期開(kāi)展豬鏈球菌病血清學(xué)監(jiān)測(cè)工作。此外在飼料和飲水中按一定比例添加抗生素類(lèi)藥物，也可以有效預(yù)防豬鏈球菌病的發(fā)生，但是在藥物預(yù)防過(guò)程中需要避免耐藥性的產(chǎn)生。及時(shí)隔離疑似豬鏈球菌病病豬，并積極治療，被污染場(chǎng)地、環(huán)境、器具、病死豬和糞便等徹底消毒或無(wú)害化處理，堅(jiān)決淘汰帶菌病豬。

當(dāng)前豬鏈球菌病是制約全世界養(yǎng)豬業(yè)的主要細(xì)菌性傳染病之一，嚴(yán)重威脅著養(yǎng)豬業(yè)的健康快速發(fā)展，同時(shí)豬鏈球菌也可感染人類(lèi)，存在潛在的公共安全問(wèn)題。近年來(lái)豬鏈球菌病有廣泛流行的趨勢(shì)，除單獨(dú)感染發(fā)病外，還與其他豬病如豬瘟、豬藍(lán)耳和豬圓環(huán)等多種病毒病混合感染，使疫情更加嚴(yán)重、復(fù)雜。豬鏈球菌的血清型眾多，現(xiàn)有疫苗保護(hù)還沒(méi)有達(dá)到理想狀態(tài)，鏈球菌病的防治工作仍然十分嚴(yán)峻，故加強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理還是重中之重。安全、高效、廣譜的豬鏈球病疫苗還有待進(jìn)一步研制，這對(duì)提前預(yù)防和控制豬鏈球菌病具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。