功能性糖是指一大類具有甜味和特殊保健功能,能作為蔗糖替代品的碳水化合物,主要包括功能性低聚糖、功能糖醇、功能性單糖及一部分功能性多糖。功能性糖具有抗齲齒、低能量值、降低血清膽固醇、降血壓、保護(hù)腸道等生理活性,是健康產(chǎn)業(yè)的重要原料。而利用酶或微生物催化方法生物制備功能性糖是一個(gè)廣受關(guān)注的研究領(lǐng)域。
功能性糖生物制備技術(shù)難點(diǎn)在于構(gòu)建或篩選特異性糖酶與微生物,并建立高效生物催化過程控制技術(shù)。中國專利CN201710196964.1涉及一種生產(chǎn)低聚果糖的方法,包括以下步驟:采用連接肽連接果糖基轉(zhuǎn)移酶和葡萄糖氧化酶,然后在宿主菌中進(jìn)行融合表達(dá),得到融合蛋白;將融合蛋白和過氧化氫酶加入蔗糖水溶液中混勻,進(jìn)行催化反應(yīng),得到低聚果糖。CN201810033883.4公開了一種β-半乳糖苷酶的突變體及其制備方法和應(yīng)用,其通過將β-半乳糖苷酶中的特定位點(diǎn)氨基酸進(jìn)行突變,轉(zhuǎn)入重組菌后,并在優(yōu)化后的條件下進(jìn)行酶轉(zhuǎn)化,突變體生產(chǎn)的低聚半乳糖產(chǎn)率達(dá)到59.8%,較野生酶提高70%左右,實(shí)現(xiàn)了低聚半乳糖產(chǎn)量的提高,具有極高的工業(yè)化應(yīng)用。CN201210012038.1公開了一株產(chǎn)β-半乳糖苷酶的菌株及用該酶生產(chǎn)低聚半乳糖的方法,涉及一株從土壤中篩選而來的阿耶波多芽孢桿菌(Bacillusaryabhattai)SK22.003,保藏編號(hào)為CCTCC NO:M2011464。以此阿耶波多芽孢桿菌為發(fā)酵菌株,以乳糖為碳源、酵母膏和蛋白胨為氮源及無機(jī)鹽組成發(fā)酵培養(yǎng)基,發(fā)酵生產(chǎn)β-半乳糖苷酶,發(fā)酵后經(jīng)檢測(cè),在發(fā)酵液中酶活達(dá)到1~25 U/mL。將β-半乳糖苷酶添加到5%~60%乳糖溶液中催化合成低聚半乳糖,轉(zhuǎn)化4~36 h,產(chǎn)率達(dá)35%以上。CN201610053213.X公開了一種高效合成雙果糖酐III的方法,先使用菊糖蔗糖酶將蔗糖轉(zhuǎn)化為菊糖,不分離聚糖,再使用菊糖果糖轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)化菊糖合成功能性雙糖雙果糖酐III。該發(fā)明菊糖合成雙果糖酐III的轉(zhuǎn)化率能夠達(dá)到40%~54%。為了獲得較為純的雙果糖酐III,用酵母除去反應(yīng)液中的小分子單糖,最終所獲得的較為純的雙果糖酐III容易分離純化,具有廣闊的市場(chǎng)應(yīng)用前景。CN201410327029.0涉及一株產(chǎn)菊糖果糖轉(zhuǎn)移酶的菌株,其分類命名為氯酚節(jié)桿菌(Arthrobacter chlorophenolicus)SK33.001,已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏編號(hào)為CCTCC NO:M 2013387。以此節(jié)桿菌為出發(fā)菌株,以菊糖為碳源,與氮源及無機(jī)鹽組成發(fā)酵培養(yǎng)基,發(fā)酵生產(chǎn)菊糖果糖轉(zhuǎn)移酶。發(fā)酵培養(yǎng)基以菊糖,硝酸鈉為主要碳源和氮源,發(fā)酵后經(jīng)檢測(cè),在發(fā)酵液中菊糖果糖轉(zhuǎn)移酶酶活達(dá)2~100 U/mL。將菊糖果糖轉(zhuǎn)移酶添加到1%~30%的菊糖溶液中生產(chǎn)雙果糖酐III,轉(zhuǎn)化3~24 h,轉(zhuǎn)化率達(dá)到75%以上。CN201210040790.7公開了一種D-塔格糖3-差向異構(gòu)酶固定化方法,步驟是:1)預(yù)處理菌體獲得目的酶液;2)預(yù)處理離子交換樹脂;3)向處理好的大孔離子交換樹脂中加入D-塔格糖3-差向異構(gòu)酶液進(jìn)行吸附后,加入戊二醛溶液進(jìn)行交聯(lián),用去離子水洗滌以除去游離酶和未交聯(lián)的戊二醛,即得到固定化的D-塔格糖3-差向異構(gòu)酶,固定化酶活回收率可達(dá)50%以上。CN201410314872.5公開了一種提高D-塔格糖-3-差向異構(gòu)酶儲(chǔ)藏穩(wěn)定性的方法,其以一種類球紅細(xì)菌SK011為出發(fā)菌株,發(fā)酵產(chǎn)的D-塔格糖-3-差向異構(gòu)酶,離心、高壓破碎,再超濾濃縮后添加一定的穩(wěn)定劑。該穩(wěn)定劑包括以下組分:防腐劑0.1~0.5 g/dL、糖類2~6 g/dL、醇類2~6 g/mL、鹽類0.5~2.0 mmol/L,其中防腐劑為對(duì)羥基苯甲酸甲酯(Met),糖類為果糖,醇類為肌醇,鹽類為MgSO4。該發(fā)明的穩(wěn)定劑組分簡單,且對(duì)D-塔格糖-3-差向異構(gòu)酶的粗酶液保護(hù)效果較好,25℃下儲(chǔ)存15 d,可使酶液的酶活保留率由不加穩(wěn)定劑的2.2%提高到97.74%。
利用酶或微生物催化方法生物制備功能性糖,必須加強(qiáng)對(duì)催化劑本身、催化反應(yīng)過程、催化劑的表達(dá)等方面全面系統(tǒng)的研究,優(yōu)化改造其物質(zhì)轉(zhuǎn)化功能與轉(zhuǎn)化效率;同時(shí)加強(qiáng)反應(yīng)分離耦合技術(shù)、生物轉(zhuǎn)化過程調(diào)控技術(shù)、過程工程優(yōu)化放大等集成研究,實(shí)現(xiàn)高效節(jié)能與環(huán)保的轉(zhuǎn)化工藝放大,解決實(shí)驗(yàn)室成果產(chǎn)業(yè)化中的瓶頸問題。