高 帆，謝 玥，沈妍秋，雷 芝，王 秀，夏 惠，梁 東

（1．四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，四川 成都 611130；2．四川省自然資源科學(xué)研究院，四川 成都 610015；3．四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 果蔬研究所，四川 成都 611130）

土壤鹽漬化是一個(gè)全球性的熱點(diǎn)問題，是農(nóng)業(yè)發(fā)展所面臨的主要危機(jī)之一［1］。目前，全世界約有20%的灌溉土地受到鹽脅迫影響，中國約有3 460萬 hm2鹽漬土地［2］。果樹鹽堿地栽培的研究也是國內(nèi)外關(guān)注的重點(diǎn)［3］。鹽脅迫下，植物細(xì)胞內(nèi)自由基的產(chǎn)生與清除的動(dòng)態(tài)平衡被打破，造成氧化脅迫，加速膜脂過氧化，有害物質(zhì)積累，引起代謝紊亂［4］。褪黑素（melatonin，MEL）又稱松果素，1958年被LERNER［7］從牛松果體中首次提取出來，其化學(xué)成分為N-乙?；?5-甲氧基色胺。大量研究表明，褪黑素是一種吲哚類激素，具有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的功能，同時(shí)還具有抵抗脅迫的生物刺激物質(zhì)的功能，對(duì)高溫、低溫、紫外及電離輻射、重金屬和化學(xué)污染、生物氧化等生物和非生物脅迫都有一定的抵抗作用［8］。目前，有關(guān)獼猴桃Actinidia耐鹽性的研究已有一些報(bào)道［9-10］，但關(guān)于外源褪黑素對(duì)鹽脅迫下獼猴桃生長(zhǎng)及抗逆生理特性的研究還比較少。獼猴桃為獼猴桃科Actinidiaceae獼猴桃屬多年生藤本植物。獼猴桃果實(shí)為典型的漿果，主要是以含維生素C高，適口和特異的風(fēng)味見著。獼猴桃在全球都具有極好的經(jīng)濟(jì)發(fā)展前景，是一種重要的果樹資源［5］。前人研究表明，獼猴桃一般既不耐離子脅迫也不耐滲透脅迫［6］。因此，提高獼猴桃對(duì)鹽堿地的耐性，保證獼猴桃在鹽脅迫下能夠維持正常的生理水平，對(duì)獲得理想的產(chǎn)量和品質(zhì)有重要意義。本研究以野生美味獼猴桃Actinidia deliciosa實(shí)生苗為材料，研究了外源褪黑素對(duì)氯化鈉脅迫下其實(shí)生苗體內(nèi)的活性氧代謝和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響，為合理利用褪黑素緩解美味獼猴桃栽培中的鹽害問題提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 植物材料培養(yǎng)與處理

于2016年1月將采于陜西秦嶺的美味獼猴桃種子4℃層積2個(gè)月，然后在培養(yǎng)箱中變溫處理2周，光暗周期為8 h/16 h，晝夜溫度為25℃/4℃。之后25℃恒溫培養(yǎng)至種子萌芽。將發(fā)芽的種子播種到育苗盤中，上面覆蓋2 mm的營(yíng)養(yǎng)土，于人工氣候室中培養(yǎng)，光暗周期為12 h/12 h，晝夜溫度為25℃/20℃。當(dāng)實(shí)生苗長(zhǎng)到2～3片真葉時(shí)，選取長(zhǎng)勢(shì)一致的實(shí)生苗移到裝有珍珠巖的花盆中，3株·盆-1。移苗后注意保濕遮陰，澆營(yíng)養(yǎng)液。

當(dāng)美味獼猴桃實(shí)生苗長(zhǎng)至9～10片葉時(shí)，進(jìn)行試驗(yàn)處理。選擇整齊一致的壯苗分成5組，其中3組分別連續(xù)5 d根灌0.1 μmol·L-1褪黑素溶液，其余2組根灌相同體積的清水。在最后一次根灌褪黑素溶液的第2天開始進(jìn)行鹽脅迫處理。任選1組根灌清水的獼猴桃實(shí)生苗作為空白對(duì)照（ck），即繼續(xù)根灌清水，其余2組獼猴桃實(shí)生苗均根灌100 mmol·L-1的氯化鈉溶液，連續(xù)根灌12 d，處理期間適當(dāng)補(bǔ)充1/2Hoagland營(yíng)養(yǎng)液。各處理分別表示為：①ck。清水處理。②S1。氯化鈉（100 mmol·L-1）。③S2。褪黑素（0.1 μmol·L-1）+氯化鈉（100 mmol·L-1）。10 盆·處理-1，重復(fù) 3 次。 氯化鈉脅迫處理濃度和試驗(yàn)處理天數(shù)均根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)確定。在氯化鈉澆灌處理后的第0，3，6，9，12天分別采取根基向上第3～5片真葉，將葉片在液氮速凍后，置于-80℃超低溫冰箱中保存，用于測(cè)定生理指標(biāo)。

1.2 測(cè)定項(xiàng)目及方法

脯氨酸采用酸性茚三酮法測(cè)定［11］。丙二醛（malondialdehyde，MDA）參照硫代巴比妥酸法［12］。過氧化氫參照郝建軍等［13］的方法。可溶性糖、可溶性蛋白質(zhì)參照李合生等［11］的方法。超氧化物歧化酶（SOD）的活性采用GIANNOPOLITIS等［14］的方法。過氧化氫酶（CAT）活性采用改良后的KATO等［15］的方法。過氧化物酶（POD）活性采用 SCEBBA 等［16］的方法。 抗壞血酸（AsA）參考 KAMPFENKEL 等［17］的鐵離子（Fe3+）還原法。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)輸入Excel表格，計(jì)算平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，并利用SPSS 22.0對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 外源褪黑素對(duì)氯化鈉脅迫下美味獼猴桃葉片膜脂過氧化程度的影響

逆境條件下，植物體內(nèi)丙二醛質(zhì)量摩爾濃度的高低能夠反映出細(xì)胞膜的損傷程度，是膜脂過氧化的主要產(chǎn)物。圖1顯示：在未經(jīng)氯化鈉處理前，各個(gè)處理間的丙二醛沒有顯著的差異。氯化鈉脅迫至6 d時(shí)，S1處理和S2處理的丙二醛質(zhì)量摩爾濃度達(dá)最高值，較對(duì)照植株上升490.32%和262.81%。氯化鈉脅迫6 d后，丙二醛開始下降，但仍高于ck。此外，隨著氯化鈉脅迫時(shí)間的增加，S1處理和S2處理的過氧化氫質(zhì)量摩爾濃度逐漸上升，在12 d時(shí)達(dá)最大值。脅迫12 d，S1處理較ck處理增加了83.90%，而S2處理僅增加了27.40%。由此推測(cè)，外源褪黑素可顯著緩解鹽堿逆境條件下丙二醛和過氧化氫的積累，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性，降低膜脂過氧化程度，從而提高美味獼猴桃的耐性，減輕鹽脅迫對(duì)植物的傷害程度。

圖1 外源褪黑素對(duì)氯化鈉脅迫下美味獼猴桃丙二醛和過氧化氫的影響Figure 1 Effects of exogenous melatonin on MDA content and H2O2content in kiwifruit under NaCl stress

2.2 外源褪黑素對(duì)氯化鈉脅迫下美味獼猴桃葉片滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響

由圖2可知：S1處理和S2處理的脯氨酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0～3 d顯著上升，上升幅度為53.74%和58.87%，3～12 d則開始逐漸下降，但仍維持較高水平，且S2處理顯著高于S1處理。美味獼猴桃葉片的可溶性糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)隨氯化鈉脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高，脅迫12 d時(shí)達(dá)最高值，且S2處理的可溶性糖均高于S1處理。由此可推測(cè)：外源褪黑素的施加有利于促進(jìn)植物體內(nèi)游離脯氨酸和可溶性糖的增加，增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)滲透勢(shì)能力，以達(dá)到提高植物抵抗逆境的能力。美味獼猴桃葉片中可溶性蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化差異不明顯。氯化鈉脅迫后，ck處理的質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化不明顯，而S1和S2的可溶性蛋白質(zhì)呈先降低后升高的趨勢(shì)，0～3 d時(shí)降低，分別降低了8.08%和2.10%，隨后開始逐漸上升。氯化鈉脅迫12 d時(shí)，S1處理和S2處理可溶性蛋白質(zhì)高于對(duì)照，分別為6.22 mg·g-1和6.39 mg·g-1?？梢姡庠赐屎谒靥幚砜梢跃徑恹}脅迫下美味獼猴桃蛋白質(zhì)的降解。

圖2 外源褪黑素對(duì)氯化鈉脅迫下美味獼猴桃游離脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白質(zhì)的影響Figure 2 Effects of exogenous melatonin on proline,soluble sugar and soluble protein in kiwifruit under NaCl stress

2.3 外源褪黑素對(duì)氯化鈉脅迫下美味獼猴桃葉片的抗氧化酶活性的影響

超氧化物歧化酶（SOD），過氧化物酶（POD）和過氧化氫酶（CAT）活性的大小代表了清除細(xì)胞內(nèi)活性氧能力的高低，是植物逆境條件下保護(hù)細(xì)胞的重要酶類。由圖3可知：SOD和POD活性的變化模式相似，均呈先升高再降低的趨勢(shì)。氯化鈉脅迫0～6 d，S1處理和S2處理的SOD和POD活性逐漸上升，S1處理SOD活性上升6.26%，S2上升6.88%；POD活性則顯著增加，分別增加156.61%和180.66%。6～12 d時(shí)活性逐漸降低，12 d時(shí)SOD活性低于ck，POD活性仍保持較高水平，且S2的SOD和POD活性均高于S1。所以，可認(rèn)為外源褪黑素激活了氯化鈉脅迫下美味獼猴桃體內(nèi)的SOD和POD活性，增強(qiáng)了植物體內(nèi)活性氧的清除能力，有效穩(wěn)定了膜質(zhì)透性，增強(qiáng)了美味獼猴桃的抗鹽性。

CAT具有清除植物體內(nèi)過氧化氫的作用，也是植物酶促防御系統(tǒng)的重要組分。在開始氯化鈉澆灌處理的當(dāng)天（0 d），ck，S1，S2處理的美味獼猴桃實(shí)生苗葉片中CAT活性差異不顯著。0～3 d，S1處理和S2處理的CAT活性顯著升高，分別增加了92.08%和164.36%。3～12 d，植株體內(nèi)CAT活性逐漸下降，且逐漸低于0 d的活性，分別降低35.64%和15.84%。由此可以推測(cè)：外源褪黑素激活了美味獼猴桃體內(nèi)CAT活性，CAT活性的增加提高了美味獼猴桃清除過氧化氫的能力，有效緩解了氯化鈉脅迫誘導(dǎo)的膜脂過氧化，提高了美味獼猴桃的耐鹽性。

圖3 外源褪黑素對(duì)氯化鈉脅迫下美味獼猴桃SOD，POD，CAT活性的影響Figure 3 Effects of exogenous melatonin on SOD,POD,CAT activity in kiwifruit under NaCl stress

2.4 外源褪黑素對(duì)氯化鈉脅迫下美味獼猴桃葉片非酶抗氧化劑的影響

由圖4可知：與對(duì)照（ck）植株相比，在鹽脅迫前3 d，S1處理和S2處理抗壞血酸（AsA）顯著降低，而隨著鹽脅迫時(shí)間的增長(zhǎng)，又開始逐漸上升，并維持較高水平，12 d時(shí)達(dá)最大值，分別上升56.58%和90.49%。這表明：外源褪黑素可以有效增加美味獼猴桃體內(nèi)的抗壞血酸，增強(qiáng)植物清除活性氧的能力，從而提高美味獼猴桃的耐鹽性。

3 結(jié)論與討論

鹽脅迫是限制植物生長(zhǎng)和作物產(chǎn)量的重要環(huán)境因素。鹽脅迫對(duì)植物組織和器官的生長(zhǎng)發(fā)育具有顯著的影響［18］。目前，關(guān)于褪黑素和植物耐鹽性關(guān)系的研究還不多。本研究表明：外源褪黑素可有效緩解美味獼猴桃體內(nèi)丙二醛（MDA）和過氧化氫的積累，增加體內(nèi)脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白質(zhì)，增強(qiáng)SOD，POD，CAT活性，提高抗壞血酸。

圖4 外源褪黑素對(duì)氯化鈉脅迫下美味獼猴桃抗壞血酸的影響Figure 4 Effects of exogenous melatonin on AsA in kiwifruit under NaCl stress

游離脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白質(zhì)是植物體內(nèi)的3個(gè)重要滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，能夠增加植物細(xì)胞在高溫、鹽堿等逆境條件下的功能蛋白數(shù)量，保持細(xì)胞原生質(zhì)體與環(huán)境之間的滲透平衡和結(jié)構(gòu)完整性保護(hù)膜系統(tǒng)穩(wěn)定性，提高植物抵抗逆境的能力。脯氨酸能夠提高細(xì)胞原生質(zhì)的親水性，具有減少可溶性蛋白質(zhì)沉淀或增加蛋白質(zhì)可溶性的作用，增強(qiáng)植物組織細(xì)胞的持水性，防止植物細(xì)胞脫水，保護(hù)細(xì)胞質(zhì)膜的完整性［19］。植物在遭受逆境時(shí)，葉片可溶性蛋白質(zhì)合成速率會(huì)發(fā)生變化，而可溶性蛋白質(zhì)含量變化可以反映蛋白質(zhì)合成、變性和降解多方面信息。已有研究表明：氯化鈉脅迫會(huì)使番茄Lycopersicon esculentum幼苗［20］和狼尾草Penniseturn alopecuroides［21］體內(nèi)的脯氨酸顯著上升，可溶性蛋白質(zhì)下降，而外源褪黑素的施加可以提高番茄幼苗和狼尾草體內(nèi)的脯氨酸和可溶性糖。本研究表明：氯化鈉脅迫可導(dǎo)致美味獼猴桃苗體內(nèi)脯氨酸顯著積累，并隨著氯化鈉脅迫時(shí)間延長(zhǎng)一直保持較高水平，這是植物的自我保護(hù)機(jī)制，而外源褪黑素預(yù)處理會(huì)進(jìn)一步增加脯氨酸，說明褪黑素增強(qiáng)了這種保護(hù)機(jī)制。由此可以推測(cè)：外源褪黑素預(yù)處理可有效地提高鹽脅迫下美味獼猴桃的脯氨酸，維持較低的細(xì)胞滲透勢(shì)，減少水分流失，從而提高美味獼猴桃的耐鹽性。氯化鈉脅迫下，美味獼猴桃實(shí)生苗體內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)先下降后上升，可能是由于剛經(jīng)受脅迫時(shí)，美味獼猴桃體內(nèi)由于脅迫產(chǎn)生的活性氧破壞了蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性或影響了蛋白質(zhì)合成的生理代謝途徑，隨后美味獼猴桃自我保護(hù)機(jī)制的啟動(dòng)使蛋白質(zhì)發(fā)生回升，而褪黑素預(yù)處理可以減少氯化鈉脅迫下美味獼猴桃蛋白質(zhì)的降解，猜測(cè)是由于褪黑素促進(jìn)了美味獼猴桃實(shí)生苗體內(nèi)熱激蛋白質(zhì)的合成，保護(hù)了體內(nèi)蛋白質(zhì)免受破壞。可溶性糖也是重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，在植物遭受逆境時(shí)大量合成，維持細(xì)胞內(nèi)滲透勢(shì)，保護(hù)膜系統(tǒng)穩(wěn)定性，因此也具有重要作用。氯化鈉脅迫會(huì)導(dǎo)致植物體內(nèi)可溶性糖顯著增加［22-23］。本研究表明：美味獼猴桃實(shí)生苗體內(nèi)可溶性糖在鹽脅迫過程中顯著增加，外源褪黑素的施加可進(jìn)一步顯著提高可溶性糖。由此可推測(cè)，褪黑素通過提高可溶性糖，增強(qiáng)維持細(xì)胞內(nèi)的滲透勢(shì)，從而達(dá)到提高美味獼猴桃抵抗逆境的能力。

活性氧（ROS）作為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的第二信使參與植物生長(zhǎng)和建成［24］。正常情況下植物體內(nèi)ROS的產(chǎn)生和消除處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，這種平衡狀態(tài)主要由抗氧化物酶和抗氧化物質(zhì)調(diào)節(jié)。而當(dāng)植物處于逆境條件時(shí)，體內(nèi)的活性氧系統(tǒng)被打破，產(chǎn)生大量ROS，導(dǎo)致負(fù)氧離子（O2-），氫氧根（OH-）等自由基的大量累積，自由基啟動(dòng)膜脂過氧化作用，膜透性增大，破壞膜結(jié)構(gòu)的完整性，進(jìn)而引起蛋白質(zhì)變性，DNA損傷，碳水化合物的氧化、色素的降解以及酶活性受損，甚至細(xì)胞死亡［25］。

本研究顯示：氯化鈉脅迫條件下，美味獼猴桃實(shí)生苗葉片中丙二醛（MDA）和過氧化氫均顯著上升，且隨氯化鈉鹽脅迫時(shí)間延長(zhǎng)，均維持較高水平。用外源褪黑素預(yù)處理可有效緩解美味獼猴桃體內(nèi)丙二醛和過氧化氫的積累。這可能是由于外源褪黑素預(yù)處理有效地緩解了活性氧的產(chǎn)生速率，降低了活性氧對(duì)細(xì)胞膜的傷害［26-27］。另外，褪黑素具有一定抗氧化能力和在細(xì)胞培養(yǎng)中被證明具有保護(hù)膜（細(xì)胞核和血漿膜）完整性的功能［28-29］。

植物體內(nèi)清除活性氧的重要保護(hù)酶是SOD，POD和CAT，能夠有效地分解植物體內(nèi)的活性氧自由基，使植物免受傷害。本研究表明：SOD，POD和CAT的活性隨著氯化鈉脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)呈先上升后下降的趨勢(shì)，而外源褪黑素預(yù)處理能夠顯著增加美味獼猴桃實(shí)生苗的SOD，POD和CAT活性，提高美味獼猴桃實(shí)生苗清除活性氧的能力，這與王麗英［31］研究褪黑素預(yù)處理對(duì)黃瓜Cucumis sativus幼苗SOD，POD和CAT活性影響的變化趨勢(shì)一致。由此可以推測(cè)：外源褪黑素可能作為抗氧化劑增強(qiáng)抗氧化物酶相關(guān)基因的表達(dá)來提高抗氧化酶活性，從而增強(qiáng)清除細(xì)胞內(nèi)活性氧的能力，提高美味獼猴桃耐鹽性。

除此以外，抗壞血酸（AsA）也是關(guān)鍵的非酶促抗氧化劑，除了參與抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán)外，也可直接清除負(fù)氧離子（O2-）和過氧化氫等活性氧［30］。本研究表明：外源褪黑素預(yù)處理顯著提高了美味獼猴桃實(shí)生苗體內(nèi)抗壞血酸，且隨著氯化鈉鹽脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，增長(zhǎng)越顯著。由此推測(cè)：外源褪黑素預(yù)處理可以有效提高美味獼猴桃實(shí)生苗體內(nèi)抗壞血酸，增強(qiáng)清除活性氧能力，抑制脂質(zhì)過氧化，從而提高美味獼猴桃耐鹽性。綜上所述，外源褪黑素預(yù)處理美味獼猴桃實(shí)生苗，能有效減弱氯化鈉脅迫對(duì)其活性氧代謝和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響，提高美味獼猴桃的耐鹽性。

［1］ 徐慧妮，王秀峰，孫旭東，等.黃瓜種子萌發(fā)對(duì)NO3-脅迫的響應(yīng)及耐鹽性評(píng)價(jià)［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2011，31（2）： 325-331.XU Huini,WANG Xiufeng,SUN Xudong,et al.Response and stress tolerance evaluation of cucumber cultivars under NO3-stress ［J］.Acta Bot Boreal-Occident Sin,2011,31（2）：325-331.

［2］ 周和平，張立新，禹鋒，等.我國鹽堿地改良技術(shù)綜述及展望［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2007（11）：159-161.ZHOU Heping,ZHANG Lixin,YU Feng,et al.Review and prospect of saline-alkali improvement technology in China［J］.Mod Agric Sci Technol,2007（11）：159-161.

［3］ 羅青紅，寇云玲，史彥江，等.6種雜交榛對(duì)新疆鹽堿土的生理適應(yīng)性研究［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2013，33（9）： 1867-1873.LUO Qinghong,KOU Yunling,SHI Yanjiang,et al.Physiological characteristics of adaptability of six hybrid hazelnuts to saline-alkali land in Xinjiang ［J］.Acta Bot Boreal-Occident Sin,2013,33（9）：1867-1873.

［4］ 楊曉慧，蔣衛(wèi)杰，魏珉，等.植物對(duì)鹽脅迫的反應(yīng)及其抗鹽機(jī)理研究進(jìn)展［J］.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2006， 37（2）： 302-305.YANG Xiaohui,JIANG Weijie,WEI Min,et al.Review on plant response and resistance mechanism to salt stess ［J］.J Shandong Agric Univ Nat Sci,2006,37（2）：302-305.

［5］ 黃宏文.獼猴桃研究進(jìn)展［M］.北京：科學(xué)出版社，2000.

［6］ 靳娟，魯曉燕，王依.果樹耐鹽性研究進(jìn)展［J］.園藝學(xué)報(bào)，2014，41（9）：1761-1776.JIN Juan,LU Xiaoyan,WANG Yi.Advances in the studies on salt tolerance of fruit trees ［J］.Acta Hortic Sin,2014,41（9）：1761-1776.

［7］ LERNER A B,CASE J D,TAKAHASHI Y,et al.Isolation of melatonin,the pineal gland factor that lightens melanocytes ［J］.J Am Chem Soc,1958,80（10）：2587-2592.

［8］ 徐芳，周海鵬，郭早霞，等.植物褪黑素及其抗逆性研究［J］.基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2013，32（2）：260-266.XU Fang,ZHOU Haipeng,GUO Zaoxia,et al.The melatonin and its resistance to stress in plants ［J］.Genom Appl Biol,2013,32（2）：260-266.

［9］ 張慶霞，魏海蓉，劉慶忠，等.果樹種質(zhì)資源耐鹽性評(píng)價(jià)及耐鹽突變研究現(xiàn)狀［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（35）： 17050-17053.ZHANG Qingxia,WEI Hairong,LIU Qingzhong,et al.Status of research on salt tolerance evaluation and salt tolerant mutant of fruit resources ［J］.J Anhui Agric Sci,2012,40（35）：17050-17053.

［10］ 周立名，王飛，王佳.EMS誘變處理定向篩選獼猴桃耐鹽突變體研究［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，18（5）：330-335.ZHOU Liming,WANG Fei,WANG Jia.Selection of salt-tolerant mutants from ethyl methane sulfonate mutagenized kiwifruit embryonic calli［J］.Acta Agric Boreal-Occident Sin,2009,18（5）：330-335.

［11］ 李合生.植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)［M］.北京：高等教育出版社，2000.

［12］ HODGES D M,DELONG J M,FORNEY C F,et al.Improving the thiobarbituric acid-reactive-substances assay for estimating lipid peroxidation in plant tissues containing anthocyanin and other interfering compounds ［J］.Planta,1999,207（4）：604-611.

［13］ 郝建軍，康宗利，于洋.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2006.

［14］ GIANNOPOLITIS C N,RIES S K.Superoxide dismutases （Ⅱ)purification and quantitative relationship with watersoluble protein in seedlings ［J］.Plant Physiol,1977,59（2）：315-318.

［15］ KATO M,SHIMIZU S.Chlorophyll metabolism in higher plants （Ⅶ） chlorophyll degradation in senescing tobacco leaves,phenolic-dependent peroxidative degradation ［J］.Can J Bot,1987,65（4）：729-735.

［16］ SCEBBA F,SEBASTIANI L,VITAGLIANO C.Activities of antioxidant enzymes during senescence of Prunus armeniaca leaves ［J］.Biol Plant,2001,44（1）：41-46.

［17］ KAMPFENKEL K,van MONTAGU M,INZè D.Extraction and determination of ascorbate and dehydroascorbate from plant tissue ［J］.Anal Biochem,1995,225（1）：165-167.

［18］ 李會(huì)珍，張志軍，劉培培，等.不同基因型紫蘇耐鹽性比較研究［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2011，31（2）：338-344.LI Huizhen,ZHANG Zhijun,LIU Peipei,et al.Comparative study on salt tolerance of different genotypical perilla［J］.Acta Bot Boreal-Occident Sin,2011,31（2）：338-344.

［19］ 孫軍利.外源水楊酸對(duì)高溫脅迫下葡萄幼苗生理特性的影響及誘導(dǎo)的蛋白激酶性質(zhì)研究［D］.石河子：石河子大學(xué)，2015.SUN Junli.Study of Exogenous Salicylic Acid on Physiological Characteristics and the Nature of Protein Kinase of Grape Young Plants Under High Temperature Stress ［D］.Shihezi：Shihezi University,2015.

［20］ 杜天浩.外源褪黑素對(duì)氯化鈉脅迫下番茄幼苗生理代謝和產(chǎn)量及品質(zhì)的影響［D］.楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2016.DU Tianhao.Effects of Exogenous Melatonin on Tomato Seeldings Physiology and Friut Yield and Quality Under Na-Cl Stress［D］.Yangling：Northwest A＆F University,2016.

［21］ 張娜，蔣慶，李殿波，等.外源施加褪黑素對(duì)氯化鈉脅迫下狼尾草種子萌發(fā)及相關(guān)生理指標(biāo)的影響［J］.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2014， 19（4）： 54-60.ZHANG Na,JIANG Qing,LI Dianbo,et al.Effect of exogenous melatonin on germination of Penniseturn alopecuroides under NaCl stress ［J］.J Chin Agric Univ,2014,19（4）：54-60.

［22］ 韓志平，郭世榮，尤秀娜，等.鹽脅迫對(duì)西瓜幼苗活性氧代謝和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的影響［J］.西北植物學(xué)報(bào)， 2010， 30（11）： 2210-2218.HAN Zhiping,GUO Shirong,YOU Xiuna,et al.Metabolism of reactive oxygen species and contents of osmotic substances in watermelon seedlings under salinity stress ［J］.Acta Bot Boreal-Occident Sin,2010,30（11）：2210-2218.

［23］ 李娜，陳紅，裴孝伯.外源亞精胺對(duì)鹽脅迫下黃瓜幼苗耐鹽性的影響［J］.熱帶作物學(xué)報(bào)，2013，34（7）：1359-1364.LI Na,CHEN Hong,PEI Xiaobo.Effects of extraneous spermidine on the salt tolerance in cucumber seedlings under salt stress ［J］.Chin J Trop Crops,2013,34（7）：1359-1364.

［24］ BAXTER A,MITTLER R,SUZUKI N.ROS as key players in plant stress signalling ［J］.J Exp Bot,2014,65（5）：1229-1240.

［25］ ZHU Jiankang.Salt and drought stress signal transduction in plants ［J］.Annu Rev Plant Biol,2002,53：247-273.

［26］ TAN Dunxian,MANCHESTER L C,REITER R J,et al.Melatonin directly scavenges hydrogen peroxide：a potentially new metabolic pathway of melatonin biotransformation ［J］.Free Rad Biol Med,2001,29（11）：1177-1185.

［27］ LI Chao,WANG Ping,WEI Zhiwei,et al.The mitigation effects of exogenous melatonin on salinity-induced stress in Malus hupehensis ［J］.J Pineal Res,2012,53（3）：298-306.

［28］ GARCIA J J,REITER R J,GUERRERO J M,et al.Melatonin prevents changes in microsomal membrane fluidity during induced lipid peroxidation ［J］.FEBS Lett,1997,408（3）：297-300.

［29］ LEI Xiaoyong,ZHU Ruiyu,ZHANG Guiyou,et al.Attenuation of cold-induced apoptosis by exogenous melatonin in carrot suspension cells：the possible involvement of polyamines ［J］.J Pineal Res,2004,36（2）：126-131.

［30］ 樊懷福，李娟，郭世榮，等.外源NO對(duì)NaCl脅迫下黃瓜幼苗生長(zhǎng)和根系谷胱甘肽抗氧化酶系統(tǒng)的影響［J］.西北植物學(xué)報(bào)， 2007， 27（8）： 1611-1618.FAN Huaifu,LI Juan,GUO Shirong,et al.Effects of exogenous nitric oxide on growth and giutathione dependent antioxidative system in cucumber seedling roots under NaCl stress ［J］.Acta Bot Boreal-Occident Sin,2007,27（8）：1611-1618.

［31］ 王麗英.褪黑素預(yù)處理對(duì)黃瓜幼苗耐鹽性的影響［D］.楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2014.WANG Liying.Effects of Melatonin Pretreatment on Salt Tolerances of Cucumber Seedlings ［D］.Yangling：Northwest A＆F University,2014.