陳春山 ，魏凱 ，常寶全 ，馬龍 ，郭明磊

（1.北京市水生野生動植物救護中心，北京 102100；2.北京市懷柔區(qū)水產技術推廣站，北京 101400；3.北京市鱘魚鮭鱒魚創(chuàng)新團隊，北京 100021）

馬蘇大麻哈魚Oncorhynchus masou屬鮭科Salmonidas、大麻哈魚屬，是僅分布在北太平洋亞洲一側水域的溯河洄游性魚類，是大麻哈魚中分布緯度最低、洄游距離最短、性成熟最早的種類，在我國圖們江、綏芬河和臺灣的大甲溪及日本[1,2]等均有分布。馬蘇大麻哈魚幼魚在淡水中生活期間，分化成降海型和陸封型兩個生態(tài)群體，后者終生生活在淡水河流中，不降海洄游，但參與洄游群體的繁殖[3-5]。我國及日本學者對洄游型大麻哈魚生物學和生態(tài)學方面的研究較多[1-14]。日本20世紀60年代將陸封型種群開發(fā)成人工養(yǎng)殖品種稱作山女鱒，被譽為20多種鮭科魚類中，肉質最好、最受歡迎的淡水游釣魚類，1996年引進中國后進行了詳細研究[15-19]。近幾年我國已開展陸封型馬蘇大麻哈魚人工繁殖和養(yǎng)殖技術方面的研究[20-25]，尚未見有關全人工繁殖的報道。魚類的全人工繁殖可保證苗種來源不受野生種群的限制，是規(guī)模化生產的前提。為探討國產陸封型馬蘇大麻哈魚人工養(yǎng)殖的可能性，開發(fā)國產鮭科魚類養(yǎng)殖新品種和馬蘇大麻哈魚資源保護策略，2012—2016年將圖們江陸封型馬蘇大麻哈魚引種到北京，開展人工養(yǎng)殖和繁殖技術研究，連續(xù)2年實現(xiàn)全人工繁殖成功。

1 材料與方法

1.1 苗種來源和培育條件

試驗用魚采自吉林圖們江野生魚類，經人工馴養(yǎng)繁殖獲得魚苗，將2萬尾5月齡、體長5～6cm、體質量4.5～5.0g的魚種引種到北京白河流域在玻璃鋼盆和不同規(guī)格的水泥池中培育。經18個月培育到2+齡，性成熟。

養(yǎng)殖水源為北京白河流域山區(qū)河水+地下水。地下水水溫穩(wěn)定，為13～14℃，河水溫度隨季節(jié)變化。孵化和苗種培育期，以地下水為主，控制水溫穩(wěn)定。當河水溫度變化幅度較大時，根據(jù)水溫需要調整河水和地下水的比例。適宜生長的4—10月，水溫10～20℃；繁殖孵化期 10—11 月，水溫 9～10℃；越冬期12—3月水溫6～8℃。水體清澈，溶解氧量＞7mg/L，pH6.5～7.3，NH3-N＜0.02mg/L，NO-2-N＜0.01mg/L。

1.2 幼魚培育及越冬

引進魚種在直徑2m的玻璃鋼盆中飼養(yǎng)，體長達8～10cm后移入水泥池。池寬200cm×長500cm，水深50cm，放養(yǎng)密度為200尾/m2。飼料采用北京漢業(yè)鮭鱒專用飼料，粗蛋白50%，粗脂肪12%。日投喂3～4次，投餌率3%～4%。根據(jù)水溫調整投喂量，隨著個體增大，減少投喂次數(shù)和放養(yǎng)密度。魚種培育水源以地下水為主，河水為輔，調整地下水與河水的比例，使水溫保持在10～15℃。夏季要加強飼養(yǎng)管理，及時分池，調整放養(yǎng)密度，做好疾病預防和降溫工作。飼養(yǎng)方法與虹鱒基本相同。冬季1+齡魚在室外越冬池越冬，每隔3天投喂1次，投餌率0.5%。

1.3 成魚飼養(yǎng)及親魚培育

2齡食用魚在室外水泥池流水培育，魚池寬300cm×長800cm，水深80cm，水源為山區(qū)河水+地下水，以河水為主，夏季控制水溫在20℃以下。北京地區(qū)夏季氣溫高，及時監(jiān)測河水溫度，調整河水和地下水的比例，控制水溫變化，盡量延長適宜生長時間，使水溫逐漸降低達到采卵要求。投喂北京漢業(yè)鮭鱒魚類專用飼料，日投喂2次，投餌率2%～3%。分池時挑選體質健壯、規(guī)格較大、體色鮮艷的個體作為親魚重點培育。產前1個月適當加大水流量，注意觀察親魚體色變化和活動情況，監(jiān)測水溫。采卵前一周停食檢查，根據(jù)性腺發(fā)育程度分池。

1.4 人工繁殖

1.4.1 親魚選擇

繁殖期前，親魚副性征分化不明顯，體側均有7～8塊邊緣清晰的黑色橫斑。隨著水溫降低和性腺發(fā)育，副性征逐漸明顯，進入繁殖期，雄魚吻部變成鷹嘴狀，上下頜成鉗形，體側出現(xiàn)暗紅色斑。后期腹部發(fā)黑，顏色越來越重，腹部狹窄，擠壓后腹部可流出乳白色精液。雌魚吻部平直不成鉗形，腹部白色、圓潤，后期體側也變黑但較雄性色淺，生殖孔紅腫外凸。少數(shù)當年不參加繁殖的個體，體側始終灰白色不變黑，黑色斑輪廓仍很清晰，雌魚生殖孔不紅腫，這種魚不能選作親魚。

1.4.2 采卵授精

產前副性征明顯的親魚不需要人工激素催產。雌魚采用擠卵或剖腹取卵，雄魚用擠壓法多次采精。干法授精，每盆一次采5尾雌魚的卵，擠入3尾雄魚的精液，用羽毛攪拌15～20s使精卵混合均勻，加入少量清水緩慢攪拌1min，再用清水沖洗2～3遍，洗去過多精液，加入清水，放置30～40min，待卵吸水膨脹后，剔除白卵，洗去卵皮、血塊，進入孵化階段。

1.4.3 孵化

受精卵在室內孵化桶孵化，方法同虹鱒。利用調溫池將水溫穩(wěn)定在6～8℃。孵化期內水流量以保證溶解氧＞7mg/L，不將卵沖動為原則。受精卵發(fā)眼前禁止一切檢查操作，避免震動，待眼點非常明顯后挑出死卵。每周用30mg/L濃度甲醛流水處理1h，控治水霉菌。

仔魚孵化在玻璃鋼平列槽中進行。卵黃囊吸收完畢，1/2仔魚上浮時用丹麥ALLer鮭鱒魚類微粒子飼料作為開口飼料。該飼料含粗蛋白64%，粗脂肪12%，2周后改為粗蛋白56%和粗脂肪18%的北京漢業(yè)鮭鱒魚類飼料。日投喂8～10次，以“少量多次”為原則，根據(jù)上浮仔魚數(shù)量投飼率為5%～6%，每次投喂前吸除殘餌。4周后移入直徑2m的玻璃鋼魚盆中培育，放養(yǎng)密度為10000尾/m2，日投喂6～8次，投飼率3%～5%。孵化期水源為曝氣的地下水，進水量依養(yǎng)殖情況進行調節(jié)，根據(jù)魚苗規(guī)格調整放養(yǎng)密度。

1.5 數(shù)據(jù)采集與計算

1.5.1 體質量、繁殖力和成熟系數(shù)

按照張覺民等[26]、殷名稱[27]的方法測定相關指標。人工培育條件下，雄性成熟度好，不是影響人工繁殖的關鍵因素，因此，本試驗在性腺發(fā)育不同時期，只定期抽取15尾雌魚樣本測量體長、體質量、卵巢質量，分析成熟度。繁殖期各抽取45尾雌雄性成熟樣本，測定體質量，統(tǒng)計相關指標。卵巢發(fā)育到Ⅴ期，測量體質量（W）和體長（L），刨腹采卵測量卵巢質量（GW）。每尾魚取20粒卵（Y），測量其總質量（X），計算單粒卵質量（W1）。絕對繁殖力（F）、體質量相對繁殖力（Fw）和成熟系數(shù)（GSI）計算公式如下：

1.5.2 發(fā)眼率與孵化率

發(fā)眼期胚體出現(xiàn)明顯黑色眼點后，隨機取200～300粒卵，檢出并統(tǒng)計未發(fā)眼卵、白卵數(shù)，計算發(fā)眼率。發(fā)眼率=（發(fā)眼卵數(shù)/受精卵數(shù)）×100%。發(fā)眼期到出膜期，統(tǒng)計檢出死卵數(shù)，發(fā)眼卵數(shù)減去死卵數(shù)為出苗數(shù)。孵化率=（出苗數(shù)/發(fā)眼卵數(shù)）×100%。

1.5.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)用平均值±標準差（Mean±SD）表示，用MicrosoftExcel2003處理，用spss17.0進行統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2.1 生長發(fā)育特點

魚種引進北京時，體質較瘦弱，人工培育18個月后，達24月齡出池時體質量達330～802g，平均（573.62±110.39）g，增重 114 倍，平均日增重 1.05g。雌雄魚體質量分布（表1）有一定差異，體質量眾數(shù)雌魚為600～700g，雄魚為400～600g。其原因主要有兩個：一是種的遺傳特性。在自然環(huán)境下，主要是雄性參與洄游型群體的繁殖，雄性性腺發(fā)育較雌性早，因此個體規(guī)格小的性成熟雄魚較雌魚多；二是飼養(yǎng)方法。在人工養(yǎng)殖環(huán)境下，馬蘇大麻哈魚搶食兇猛，如果分池不及時，投餌不均勻，也會造成規(guī)格差異。

表1 2+齡馬蘇大麻哈魚體質量分布Tab.1 Profile of body weight of 2+year old masu salmon Oncorhynchus masou

雌雄魚性腺發(fā)育有一定差異。2%左右雄魚12月齡性腺即發(fā)育成熟，體質量只有90～180g，24月齡全部發(fā)育成熟，此時副性征明顯。雌魚1+齡未發(fā)現(xiàn)性成熟個體，95%以上2+齡性腺發(fā)育成熟，此時雌魚腹部膨大柔軟，輪廓明顯，成熟系數(shù)可達17%～26%。個別生長速度較慢的雌魚3+及以后性腺發(fā)育成熟。本試驗中1尾3+雌魚，體質量720g，卵巢發(fā)育為Ⅱ期，成熟系數(shù)只有1.9%。雌魚生長發(fā)育見表2。

表2 馬蘇大麻哈魚（♀）生長發(fā)育統(tǒng)計表Tab.2 Growth index of 2+year old masu salmo Oncorhynchus masou（♀）

2.2 人工繁殖結果

45尾性成熟雌魚樣本的統(tǒng)計結果表明，卵巢質量 57～216g，平均（126.78±37.49）g；成熟系數(shù)17.27%～26.93%，平均（21.67±2.60）%；絕對繁殖力 740～2 815粒，平均（1 649.64±489.60）粒；體質量相對繁殖力 2.24～3.51 粒 /g，平均（2.82±0.34）粒 /g。

2次共采卵15.7萬粒，平均受精率82%，孵化率68%，出苗8.7萬尾，稚魚馴化成活率90%。積溫190～210℃·d時受精卵發(fā)育至發(fā)眼卵，350～390℃·d孵出。

3 討論

3.1 對人工環(huán)境的適應性

陸封型馬蘇大麻哈魚對人工環(huán)境有較強的適應性，主要表現(xiàn)在對人工配合飼料、溫度和抗病力方面。稚魚可直接用人工飼料開口。本實驗采用丹麥進口愛樂鮭鱒魚類飼料開口，投喂2周，過度為國產鮭鱒魚類飼料，稚魚馴化成活率達到90%以上。苗種培育采用玻璃鋼盆微流水和小型水泥池流水方式，飼養(yǎng)管理與虹鱒基本相同。有資料報道，馬蘇大麻哈魚適宜生長溫度為10～17℃[28]，對高溫的忍耐性超過其他鮭鱒魚類。本試驗養(yǎng)殖的陸封型馬蘇大麻哈魚20℃以下生長發(fā)育正常，23℃時表現(xiàn)出明顯異常，聚集在池底一角，有的身體側翻，呼吸頻率加快，個別死亡，水溫降低后很快恢復正常。整個飼養(yǎng)周期較少發(fā)生疾病，苗種培育期間，感染過細鱗鮭小瓜蟲病。在單胞菌感染試驗中，死亡率明顯低于同批試驗的細鱗鮭。馬蘇大麻哈魚適應了人工環(huán)境和人工配合飼料，生長速度較快，24月齡普遍達到500g以上，具有一定的養(yǎng)殖價值。

3.2 個體差異較大

馬蘇大麻哈魚搶食能力非常強，人工養(yǎng)殖過程中，同批魚個體規(guī)格差異較大，饑餓狀態(tài)下，有大魚殘食小魚現(xiàn)象。在苗種和幼魚培育階段，要根據(jù)個體差異及時分池。陸封型馬蘇大麻哈魚生命周期短，繁殖后親魚大部分死亡。副性征出現(xiàn)后商品魚品質降低，除了用于繁殖的親魚，商品魚養(yǎng)殖要在性成熟之前上市，否則會造成經濟損失。及時分池，為小規(guī)格個體營造生長空間，對提高商品魚養(yǎng)殖效果極為重要。

3.3 全人工繁殖特點

陸封型馬蘇大麻哈魚在野生環(huán)境下，雄性比例高于雌性[4]，人工養(yǎng)殖條件下雌雄比例依然保持這一特點。在個體規(guī)格上，性成熟的雄魚規(guī)格差異較大，體質量范圍 330～803g，眾數(shù)為400～500g和500～600g。雌魚規(guī)格較為集中，體質量眾數(shù)為600～700g，雄魚小規(guī)格的較多（表1）。絕對繁殖力與體質量呈正相關[24]，人工繁殖過程中應選用規(guī)格較大的雌魚做親魚；雄魚有性早熟現(xiàn)象，少部分1+齡就可以參與繁殖，最小體質量180g，這與野外調查結果相同[9,10]。雄魚盡管個體小，但精巢發(fā)育良好，精液質量好，因此在人工授精中，雌雄比例可5∶3，雄魚可多次采精。親魚選育過程中適當減少雄魚數(shù)量，降低人工繁殖生產成本。

隨著個體生長，馬蘇大麻哈魚降海型群體幼魚黑色斑塊逐漸消失，體色變成銀白色。陸封型群體終生保持幼魚的黑色斑塊，在繁殖季節(jié)體色發(fā)黑。少數(shù)達到性成熟年齡但當年不參加繁殖的陸封型個體，體側始終灰白色不變黑，黑色斑輪廓仍很清晰，根據(jù)體色的變化可以判斷親魚性腺發(fā)育程度。陸封型群體繁殖的后代中也會出現(xiàn)少量降海型個體，體色銀白，解剖檢查2+齡個體，性腺發(fā)育為Ⅱ期，隨著年齡增長性腺是否會發(fā)育成熟尚不得知。

溫度是影響馬蘇大麻哈魚性腺發(fā)育成熟的關鍵因素。魚種移植到北京后，經過1個冬季的低溫期，培育至第二年的秋季，隨著水溫降低，性腺快速發(fā)育到Ⅳ期。通過水流刺激，當水溫降低到12～13℃以下時，雌魚不需要人工激素催產即能夠自然成熟排卵，但不能產卵。用調整河水、地下水比例的方法調控水溫變化，可以控制采卵期，在北京的自然繁殖時間比原產地圖們江晚15d左右。

3.4 移殖培育對性腺發(fā)育的影響

個體繁殖力作為種群繁殖力的重要指標，主要是由種的遺傳性決定的，同時也受環(huán)境因子影響[29]。董崇智等[9]在綏芬河馬蘇大麻哈魚繁殖期調查結果顯示，雄性性腺發(fā)育接近Ⅴ期，雌性卵巢仍處于Ⅰ～Ⅱ期，成熟系數(shù)1.16%～10.8%，平均為5.59%。張玉玲[5]通過對圖們江馬蘇大麻哈魚陸封群體調查認為，雄魚2+齡全部性成熟，雌魚大多數(shù)（99.4%）終生不能繁殖，卵巢停滯于Ⅱ期，成熟系數(shù)只有0.5%。本試驗不僅2+齡雄魚100%及雌魚95%以上都可以發(fā)育成熟，而且雌魚成熟系數(shù)[（21.67±2.60）%]、絕對懷卵量[（1 649.64±489.60）粒/尾]遠高于綏芬河、圖們江的野生種群。移殖到北京人工培育的馬蘇大麻哈魚可以適應新的環(huán)境，改變了雌魚在自然環(huán)境卵巢發(fā)育不成熟的規(guī)律，繁殖力又明顯提高，可以規(guī)?；斯し庇?/p>

3.5 全人工繁殖對我國鮭科魚類開發(fā)和自然資源保護的意義

鮭是世界三大養(yǎng)殖魚類之一，2010年人工養(yǎng)殖年產量達240萬t，其中歐洲占55.3%，我國年產量只有1.6萬t，占0.8%[30]。全世界養(yǎng)殖鮭科魚類單獨統(tǒng)計產量的有13種，產量的76%以上是品質高的大西洋鮭，我國人工養(yǎng)殖產量的91%來自虹鱒和金鱒[31]，良種選育和國產品種開發(fā)是影響我國冷水魚產業(yè)發(fā)展的主要問題[32]。日本成功將陸封型馬蘇大麻哈魚開發(fā)成養(yǎng)殖品種，獲得了極高的效益[17-19,33]。圖們江陸封型馬蘇大麻哈魚移殖及全人工繁殖成功，對開發(fā)我國鮭科魚類養(yǎng)殖新品種具有一定意義。

增殖放流是全球普遍采用的恢復大麻哈魚自然資源的重要手段[14-16,33,34]。日本增殖放流和海洋牧場計劃的實施使得日本的漁業(yè)收獲頗豐，其捕撈的鮭幾乎均來自增殖放流[33,34]。自然環(huán)境下，馬蘇大麻哈魚陸封型群體性成熟早于洄游型群體并參與洄游型群體的繁殖，對維持種群自然資源極為有利，是物種自我保護的一種適應。因此，陸封型種群的資源狀況關系到整個馬蘇大麻哈魚的資源總量。目前，我國圖們江大麻哈魚年產量只有10t多，不到1940年前后的1/10[35]，與沒有重視陸封種群的保護不無關系。人工培育的陸封型群體提高了繁殖效率，通過規(guī)?；a向自然水域放流人工繁殖的陸封型苗種，對保護馬蘇大麻哈魚的自然資源具有積極意義。

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