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1 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053

2 浙江省中醫(yī)藥研究院 浙江 杭州 310007

3 浙江景岳堂藥業(yè)有限公司 浙江 紹興 312025

薏苡仁為禾本科植物薏苡Coix lacryma-jobi L.var.ma-yuen(Roman)Stapf的干燥成熟種仁[1]。作為中藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，其味甘、淡，性涼，歸脾、胃、肺經(jīng)，具有利水滲濕、健脾止瀉、除痹、排膿、解毒散結(jié)之功效，可用于水腫，腳氣，小便不利，濕痹拘攣，脾虛泄瀉，肺癰，腸癰等癥[2-3]。薏苡仁作為藥食兩用的藥材，用途廣泛，文獻(xiàn)記載其炮制方法有清炒、麩炒、土炒、鹽炒、糯米炒、鹽湯煮、姜汁拌炒等[4]，目前市場上各種薏苡仁炮制品均有使用，而不同的炮制品臨床藥效有所區(qū)別，原因可能是由炮制引起化學(xué)成分的變化，因此研究炮制對薏苡仁成分的影響具有重要意義。薏苡仁藥材中主要含有油、脂等化學(xué)成分[5]，其中甘油三油酸酯是2015版《中國藥典》規(guī)定檢測成分。本研究通過比較清炒、清麩炒、1/3蜜炙麩皮+2/3麩皮炒、蜜炙麩皮炒等不同麩炒炮制方法對薏苡仁中甘油三油酸酯含量的影響，期望為薏苡仁麩炒制品的質(zhì)量研究提供實驗依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器：20A-VP高效液相色譜儀(日本島津)；AlltechELSD檢測器(日本島津)；SIL-20A自動進樣器(日本島津)；AE400電子天平(瑞士梅特勒)；KQ400超聲提取器(江蘇昆山)。

1.2 材料：對照品甘油三油酸酯(批號：111692-201605)，購自中國食品藥品檢驗研究院，乙腈（德國默克）、二氯甲烷（阿拉丁）為色譜純。實驗收集不同來源薏苡仁樣品共10批密封保存。

2 方法與結(jié)果

2.1 薏苡仁炮制：①凈薏苡仁：取原藥材，除去皮殼及雜質(zhì)，篩去灰屑。②清炒薏苡仁：取凈薏苡仁，置預(yù)熱炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至表面微黃色，略鼓起，具香氣時，取出晾涼。③清麩皮炒薏苡仁：先將炒制容器預(yù)熱至200℃，加入麩皮，起濃煙后投入薏苡仁，溫度最低點138℃，回升至158℃出料，冷卻，篩去麩皮。④1/3蜜炙麩皮炒薏苡仁：先將炒制容器預(yù)熱至200℃，加入1/3蜜炙麩皮和2/3麩皮，濃煙后投入薏苡仁，溫度最低點138℃，回升至158℃出料，冷卻，篩去麩皮。⑤蜜炙麩皮炒薏苡仁：先將炒制容器預(yù)熱至200℃，加入蜜炙麩皮，濃煙后投入薏苡仁，溫度最低點138℃，回升至158℃出料，冷卻，篩去麩皮。

2.2 色譜條件：色譜柱：資生堂Capcell Pak C18(250mm×4.6mm,5μm)；流動相：乙腈-二氯甲烷=60：40；柱溫：30℃；流速：0.5ml/min；蒸發(fā)光散射檢測器參數(shù)：飄移管溫度70℃，載氣流速2.0L/min。

2.3 對照品溶液的制備：精密稱取甘油三油酸酯對照品5.0mg，置5ml容量瓶，加流動相制成1.0mg/ml的對照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備：精密稱取薏苡仁粉末1.0g（過60目篩），置具塞錐形瓶中，精密加入流動相50ml，稱定重量，重浸泡2h，超聲提取（功率450W，頻率28kHz）30min，放冷，稱定重量，用流動相補足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5 方法學(xué)考察：分述如下。

2.5.1 線性考察：取甘油三油酸酯儲備液，加流動相逐級稀釋，制成5個不同濃度梯度對照品溶液。按方法與結(jié)果“2.2”項下色譜條件進樣，以對照品濃度(mg/ml)對數(shù)值為橫坐標(biāo)，峰面積對數(shù)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程logY=1.8615logX+7.2194。

2.5.2 精密度試驗：取“2.3”項下對照品溶液，按方法與結(jié)果“2.2”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，計算各甘油三油酸酯峰面積RSD為1.45%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗：取同一批薏苡仁樣品（浙江20170503）6份，按“2.4”項下制備，按方法與結(jié)果“2.2”項下色譜條件進樣，計算各甘油三油酸酯峰面積RSD為1.48%，結(jié)果表明此方法重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗：取按“2.4”項制備的供試品溶液，按方法與結(jié)果“2.2”項下色譜條件分別在0，2，4，6，8，12，24h各進樣1次，計算甘油三油酸酯峰面積RSD為1.84%。結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5 加樣回收試驗：取同一批薏苡仁樣品（浙江20170503）6份，按“2.4”項下制備分別精密加入等倍的對照品，按“2.2”項下色譜條件進樣，計算加樣回收率，甘油三油酸酯回收率為98.26%，RSD%為1.71%。

2.6 不同麩炒炮制對薏苡仁中甘油三油酸酯的影響：平行取同一批次，五種不同炮制方法制備的薏苡仁炮制品各3份（不同炮制方法制備的飲片樣品見圖1），按“2.4”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件測定。HPLC結(jié)果見圖1，樣品來源和含量測定結(jié)果見表1。

表1 薏苡仁樣品來源和甘油三油酸酯含量測定結(jié)果

通過含量測定結(jié)果可知，不同輔料麩炒后薏苡仁中甘油三油酸酯的含量均有增加，其中以1/3蜜炙麩皮+2/3麩皮炒制后含量增加最為顯著。

圖1 薏苡仁不同麩炒炮制方法HPLC色譜圖

3 討論

本實驗參照2015版《中國藥典》一部中薏苡仁的含量測定方法，選擇蒸發(fā)光散射檢測器進行檢測，通過比較流動相乙腈-二氯甲烷比例（80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45），確定乙腈-二氯甲烷（60:40）峰形最佳。觀察薏苡仁凈制品及其不同麩炒炮制品色度（圖1），凈制品為乳白色，清炒品為乳黃色，麩炒品為米黃色，蜜炙品1和蜜炙品2為深黃色，表明不同的麩炒炮制輔料對炮制品的外觀顏色有一定的影響。由含量測定結(jié)果可知，1/3蜜炙麩皮+2/3麩皮炒對薏苡仁甘油三油酸酯含量影響最大。

通過比較薏苡仁生品和炮制品色譜圖，結(jié)果顯示各成分相對峰面積RSD均大于10%，這表明生品與炮制品在成分含量上存在一定的差異。為明確薏苡仁炮制前后的差異成分，項目組將進一步采用液-質(zhì)等分析方法對差異化合物進行表征。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：376-377.

[2]黃富遠(yuǎn).不同炮制方式對薏苡仁品質(zhì)的影響[J].浙江中醫(yī)雜志，2009,44(6)：462.

[3]單國順,步顯坤,孫媛媛,等.麩炒薏苡仁炮制工藝的優(yōu)化[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2010,16(6)：42-45.

[4]袁桂平,姜軍華,眭榮春.HPLC法測定薏苡仁飲片中甘油三油酸酯的含量[J].江西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2013,25(1)：52-54.

[5]Wu H,Wald bauer K,Tang L,et al.Influence of vinegar and wine processing on the alkaloid content and composition of the traditional Chinese medicine Corydalis Rhizoma[J].Molecules,2014,19(8)：11487-11504.