何 靜 郭小青 陳元平 歐陽玉茗

結直腸癌(colorectal cancer，CRC)是腸胃道中較為常見的惡性腫瘤之一，由于早期表現(xiàn)的癥狀不明顯，患者很難發(fā)現(xiàn)，但是結直腸癌的發(fā)病率和死亡率在我國乃至全世界都呈現(xiàn)上升的趨勢[1]，嚴重威脅著人類健康。手術是治療結直腸癌的主要手段[2]，化療明顯改善預后。但晚期結直腸癌療效差，且尚無標準治療方案。因結直腸癌的發(fā)生發(fā)展是多種癌基因協(xié)同作用的結果，因此針對這些靶基因的靶向藥物如西妥昔單抗具有療效獨特、毒副作用小等特點，為晚期結直腸癌的治療提供了較好的前景[3]。

醫(yī)學界的科學家們通過不斷地研究，發(fā)現(xiàn)人表皮生長因子受體-2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)屬受體酪、氨酸激酶家族 HER/erbB 家族成員[4]，位于人類第17號染色體的長臂，參與細胞生長分化的調節(jié)，不僅能夠抑制腫瘤細胞凋亡，還具備著增加腫瘤細胞的侵襲力[5]。有研究證實HER-2在乳腺癌、胃癌、食管癌、卵巢癌、肺癌，前列腺癌等多種惡性腫瘤中都存在過表達，是乳腺癌的預后因子[6]。針對HER-2的靶向藥物曲妥珠單抗已經在乳腺癌，胃癌中廣泛應用，療效顯著，但是腸道腫瘤中HER-2蛋白表達相關方面的研究卻存在著不足，由于案例較少，一致存在爭議。因此，對HER-2與結直腸癌兩者之間的關聯(lián)做進一步研究，具備極大的價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集贛州市人民醫(yī)院2006年1月至2012年5月經外科手術切除的結直腸組織120例，之前均未進行過放化療，其中結直腸癌組織50例，正常結直腸組織30例。選取組織樣本時，需要注意盡可能地保持樣本外觀的完整性，在切取樣本時，選擇樣本的中心位置進行切取，可以有效地避免對實驗結果造成偏差。在本次選取的組織樣本中，腫瘤組男性和女性分別有30例、20例，50例患者的平均年齡為(50.7±3.3)歲；另一組正常組男性和女性分別有18例、12例，平均年齡為(51.2±3.1)歲。通過對2組一般資料進行比較，發(fā)現(xiàn)其差異并不具備統(tǒng)計學意義，P>0.05。

1.2 HER-2檢測

一抗(兔抗人HER-2)、二抗購自Santa Cruz公司，多聚甲醛、二甲苯、3%雙氧水、DAB顯色液、蘇木精、中性樹膠購自北京中杉金橋生物技術有限公司。新鮮標本離體后在40 g/L多聚甲醛中常規(guī)固定，脫水，石蠟包埋，將其制成5 μm切片。后按照試劑盒說明書操作。每組均設立陽性對照組和陰性對照組。每例標本均有2位有經驗的技術人員采用雙盲法判斷。顯微鏡下細胞質和(或)核內有著棕黃色的顆粒者為陽性。當出現(xiàn)(-)時，則表明樣本中結直腸癌細胞未染色或少于10%胞膜染色；當出現(xiàn)(+)時，則表明樣本中，有大于10%的細胞具備不完整的胞膜染色；當出現(xiàn)(++)時，則表明樣本中，有大于10%細胞具備完整但是較弱的胞膜染色；當出現(xiàn)(+++)時，則表明樣本中，有大于30%細胞具備完整而且較強的胞膜染色。HER-2陽性為(++)或(+++)。陽性率的計算：判定為(++)和(+++)數(shù)量的總和除以總樣本數(shù)所得的百分數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學方法

本次HER-2在結直腸癌組織中表達情況的研究，在統(tǒng)計軟件上選用SPSS 17.0，而對于本次實驗研究涉及到的數(shù)據(jù)，采用χ2和Pearson進行相關檢驗，當P<0.05時，則表明差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 2組HER-2陽性率比

腫瘤組HER-2表達陽性表達率為36.0%(18/50)、正常組為10.0%(3/30)，2組差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=6.547，P<0.05)。

2.2 HER-2陽性與結直腸癌生物學以及臨床病理特征關系

通過實驗研究，并進行分析可以了解到HER-2基因表達陽性與患者結直腸癌的Dukes分期、分化程度以及患者的淋巴結轉移具有相關性(P<0.05)，但是與結直腸癌患者的年齡、部位以及遠處轉移等無關(P>0.05)，見表1。

表1 HER-2陽性與結直腸癌生物學以及臨床病理特征關系(例，%)

2.3 HER-2表達水平與患者生存時間的關系

調取標本的病例資料，統(tǒng)計5年生存率。結果HER-2陰性，即HER-2(-)和HER-2(+)患者5年生存率為68.2%(15/22)；而HER-2陽性，即HER-2(++)和HER-2(+++)患者5年生存率為33.3%(6/18)，二者差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.821，P=0.03)。

3 討論

HER-2 是一種癌基因,通過基因擴增、RNA 及蛋白質的過度表達而激活。HER-2具備加速細胞分裂和蛋白水解酶分泌的作用，那么也就意味著細胞的運動能力增強，而相應的患者體內腫瘤細胞的侵襲和轉移的幾率增大[7]。Slamon等[8]發(fā)現(xiàn)HER-2基因在乳腺癌中存在擴增現(xiàn)象，此后發(fā)現(xiàn)其在胃癌等多種惡性腫瘤中存在不同程度的基因擴增或過度表達。目前國內和國外對HER-2與結直腸癌的關系，還存在著較大的爭議。Marx 等[9]對1851 例結腸癌確診病例進行分析，通過FISH方法檢測HER-2基因擴增為2.7%，并且發(fā)現(xiàn)HER-2基因擴增并不能直接對結直腸癌的侵襲與轉移情況進行預測，主要原因在于其與結直腸癌的發(fā)生、Dukes分期以及預后等并沒有相應線性關系。我國涂金花[10]報道，運用FISH及免疫組化方法檢測結直腸癌中HER-2基因的擴增率為2.5%～7.4%，過表達率為2%～47.4%，存在較大的差異，且表明Her-2過表達可作為結直腸癌患者的一個獨立預后因素。

本研究結果顯示，結直腸癌組織中HER-2表達陽性18例(36.0%)，正常組織中陽性3例(10.0%)，2組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，由此表明HER-2基因的表達可以說是結直腸癌的指示信號。此外，通過對HER-2基因的表達與結直腸癌的病理特征進行研究，可以了解到HER-2基因過表達與結直腸癌Dukes分期、分化程度以及患者的淋巴結轉移相關(P<0.05)；但是HER-2基因過表達與左右半、腫瘤大小、遠處轉移無關(P>0.05)。結直腸癌患者中，HER-2 陰性的5年生存率為62.4%，HER-2陽性5年生存率為42.7%，2組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，HER-2 陽性患者的5 年生存率明顯較低。

曲妥珠單抗為針對HER-2的單克隆抗體，因能明顯改善HER-2陽性乳腺癌患者的生存而得到廣泛應用。Van等[11]研究發(fā)現(xiàn)HER-2 過表達的晚期胃癌患者在曲妥珠單抗治療中明顯獲益，聯(lián)合化療的總生存期為16個月，單獨化療平均僅為11.8個月，而且HER-2蛋白過表達及基因擴增者對曲妥珠單抗的療效較單一蛋白過表達的要好，且蛋白表達水平與總生存相關。因此歐盟委員會于2010年也批準曲妥珠單抗用于 HER-2 陽性晚期胃癌。

曲妥珠單抗作為抗HER-2的靶向藥物，有必要在結直腸癌臨床應用中進一步研究，為結直腸癌的治療提供更多方法。

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