鄧少云，王瑞娟，王懷玉

(重慶市公安局大渡口區(qū)分局物證鑒定所，重慶400084)

法醫(yī)DNA檢驗技術在案件偵破過程中發(fā)揮著非常重要的作用，但很多案件的檢材DNA檢驗結果為混合基因型。混合樣本是含有兩個或兩個以上供體成分的檢材，常會給案件的快速偵破造成困難。研究發(fā)現(xiàn)，一些混合樣本可以通過拆分得到嫌疑人的DNA分型。但有些混合樣本可能因為模板量過少等原因，會發(fā)生等位基因漏檢或出現(xiàn)非特異性帶的現(xiàn)象[1]，此時若直接對混合基因分型拆分，可能得不到嫌疑人的基因分型，甚至會給偵查方向造成誤導。本文報道一起混合基因分型直接入庫比對與圖像偵查相結合而偵破的成功案例。

1 案件簡介

2015年8月19日，某出租車司機承載兩名乘客，遭其中一名脅迫致錢財被搶。技術人員提取了相關檢材。偵查員通過道路監(jiān)控，也發(fā)現(xiàn)了兩名嫌疑人的圖像，但其逃跑路線監(jiān)控中斷，為案件偵破帶來困難。

2 材料和方法

2.1 檢材

受害人頸部擦拭拭子、出租車車鑰匙、受害人駕駛的出租車副駕駛座位靠背擦拭拭子、左右后側車門內把手擦拭拭子、右后前側車門外把手擦拭拭子、右前側車門內把手擦拭拭子以及受害人血樣，依次編號為 1、2 、3、4、5、6、7、8、9 號檢材。

2.2 方法

2.2.1 主要儀器和試劑

儀器Veriti PCR擴增儀、3500遺傳分析儀與試劑AmpFISTR Identi fi ler?Plus試劑盒均為美國Applied Biosystems公司產品。

2.2.2DNA模板的提取

使用Chelex法提取受害人血樣（9號）DNA，使用磁珠法提取其余檢材（1～8號）DNA。

2.2.3 模板DNA 擴增

提取的模板DNA，分別以10 μ L和25 μ L體系使用Identi fi ler Plus試劑盒經Veriti PCR擴增儀擴增，反應條件參照說明書。

2.2.4 分型檢測

擴增產物使用3500遺傳分析儀電泳，以GeneMapper?ID- X V1.4軟件分析基因分型。

3 結果

檢測發(fā)現(xiàn)，1～8號檢材均為混合基因分型，9號檢材得到受害人的D8S1179等16個STR基因座基因型。對1～8號檢材混合STR圖譜分析后發(fā)現(xiàn)，1～7號檢材大部分基因座出現(xiàn)5個以上等位基因峰，說明1～7號檢材可能有3個或以上供體，故其利用價值較小，而通過25 μL體系擴增出的8號檢材混合基因分型有15個基因座（除D18S51基因座為5個等位基因峰）為2～4個等位基因峰（圖1），推測8號檢材混合基因分型的供體可能為2個[2]。

圖1 8號檢材常染色體STR基因座分型圖譜Fig.1 Genotyping pro fi le of autosomal STRs from No. 8 tested sample

將8號檢材混合基因分型與受害人的DNA基因座基因型比對（表1），以人工拆分方法無法得到有效的基因座基因型。將8號檢材混合基因型直接導入本市DNA數(shù)據(jù)庫進行自動比對，結果有100個以上的比中數(shù)據(jù)項。其中，匹配度100 %的比中男性DNA樣本2個，匹配度在85 %～100 %之間的男性DNA樣本比中37個，核實此37個DNA樣本所對應的人員身份信息，然后與偵查人員提供的監(jiān)控視頻嫌疑人圖像一一比對，發(fā)現(xiàn)匹配度為92.3 %的某DNA樣本所對應的人員與監(jiān)控中1名嫌疑人疑似為同一人。抓獲該嫌疑人，其對犯罪事實供認不諱。與數(shù)據(jù)庫匹配度為92.3 %的嫌疑人的基因分型如表1。

表1 STR基因座基因分型Table 1 Database-matched STR genotypes from the No. 8 sample

續(xù)表1

4 討論

混合斑的檢驗和應用一直是法醫(yī)DNA分析的難點，但有時混合斑DNA的檢驗往往又能為案件偵破提供線索?；旌匣蚍中偷膽?，有一些人工或軟件拆分方法，但一般是在已知樣本或峰高及峰面積的基礎上進行[3-4]。本案中混合基因分型因不含已知樣本（受害人）基因分型，并且圖譜中部分峰值較低，難以拆分。因此，技術人員將本案確定的混合基因分型直接入庫比對。

利用混合基因型入庫自動比對，首先，需要確認分型結果是否為兩人份混合基因分型；其次，在擁有案件其他線索的基礎上對入庫比對結果從包含匹配度由高到低篩查。但是，在比對結果中，包含匹配度為100 %的樣本卻不一定就是嫌疑對象，比如本案中包含匹配度為100 %的2個樣本就被排除。因為，第一，目前DNA檢驗所用試劑盒可能與建數(shù)據(jù)庫時所用試劑盒不同，像本案檢材的DNA檢驗結果中TH01、D19S433和TPOX基因座就不包含在建數(shù)據(jù)庫所用的試劑盒中，而建數(shù)據(jù)庫所用試劑盒含有的D6S1043和Penta E基因座在本案檢材DNA檢驗結果中也未包含；第二，混合斑DNA檢驗時，可能因為模板量過少等原因，會發(fā)生等位基因漏檢或出現(xiàn)非特異性帶的現(xiàn)象，比如本案中8號檢材混合基因型中的D2S1338（18/19/21）基因座，其中就未出現(xiàn)嫌疑人的24號等位基因。所以，一定要與案件其他線索結合使用。本案就是技術人員利用偵查人員提供的監(jiān)控中嫌疑人圖像與8號混合基因型入庫比對結果相結合使用而最終得以成功破獲。

此方法的缺點，一是工作量較大，由于混合基因型入庫自動比對時容易出現(xiàn)較多隨機無效比中的情況[5-6]，如本案中8號混合基因分型比中數(shù)據(jù)庫中匹配度為85 %及以上的樣本就達37個，匹配度在85 %以下的樣本將會更多，若都人工逐一排除，其工作量必然非常大；二是混合基因分型的結果不一定完全準確，由于在判斷或分析時，可能會受到影子帶、譜帶丟失等諸多因素干擾，導致混合物證的數(shù)據(jù)不一定準確，因此使用時還需謹慎。本案例混合基因分型與圖像偵查結合的成功應用，說明對無法通過人工拆分的混合斑分型結果，可將其直接入庫比對作嫌疑人篩查，進而為案件偵破提供線索，但前提是必須與案件其他線索或證據(jù)相互結合使用。

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