吳嘉瑞，藺夢娟，劉鑫馗

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100102)

“水牛角-珍珠母”藥對為清開靈注射液中的重要藥物組合。水牛角為?？苿游锼ubalusbubalis的角，首載于《名醫(yī)別錄》：“療時氣寒熱頭痛”[1]。水牛角苦寒，入心肝血分，能清熱涼血、瀉火解毒定驚[2-3]?，F(xiàn)代研究結(jié)果表明，水牛角具有良好的解熱、鎮(zhèn)靜等功效。水牛角在中醫(yī)臨床用于治療或輔助治療熱病頭痛、高熱神昏、發(fā)斑發(fā)疹、出血、小兒驚風(fēng)及咽喉腫痛等癥[1]?！吨腥A人民共和國藥典：一部》(2015年版)收載含水牛角或水牛角濃縮粉的中成藥44種[4]，占所收載中藥成方及單味制劑總量的11%，包含被譽為中醫(yī)治療高熱癥“溫病三寶”的安宮牛黃丸、局方至寶散和紫雪(散)[5]。珍珠母為常用中藥材，據(jù)《中華人民共和國藥典：一部》(2015年版)記載，珍珠母源于蚌科動物三角帆蚌Hyriopsiscumingii、褶紋冠蚌Cristariaplicata或珍珠貝科動物馬氏珍珠貝Pteriamartensii的貝殼[4，6]。珍珠母咸寒質(zhì)重，入心、肝經(jīng)，既清肝平肝，又鎮(zhèn)驚安神，用于治療頭痛眩暈、煩躁失眠、肝熱目赤和肝虛目昏[2-3]?！八＝?珍珠母”藥對中，珍珠母可佐助水牛角達(dá)清熱、鎮(zhèn)驚和安神之功[2-3]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明，珍珠母的主要藥理作用包括鎮(zhèn)靜、抗氧化、抗急性肝損傷、中和胃酸、調(diào)節(jié)免疫功能、抑菌、降血糖、抗腫瘤、利尿、抑制離體腸壁及子宮收縮和降低缺血腦組織的單個細(xì)胞趨化蛋白含量等。珍珠母在臨床上主要被用于治療失眠、神經(jīng)衰弱、精神分裂癥、癲癇、眩暈癥、頑固性頭痛及抑郁癥等精神系統(tǒng)疾病，還被用于治療頑固性皮膚病、原發(fā)性高血壓病、頑固性肝硬化腹水、慢性胃炎、胃潰瘍及濕疹等[7]。以往對中藥的作用機制研究多采用動物實驗、細(xì)胞實驗等方法對其某一作用機制進(jìn)行研究，難以獲得中藥作用機制網(wǎng)絡(luò)的整體面貌。近年來，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)融合系統(tǒng)生物學(xué)、多向藥理學(xué)、生物信息學(xué)和計算機科學(xué)等多學(xué)科的技術(shù)和內(nèi)容，進(jìn)行“疾病表型-基因-靶點-藥物”等多層次網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建，探索藥物與疾病間的關(guān)聯(lián)性，指導(dǎo)新藥研發(fā)，闡明藥物作用機制，其整體性、系統(tǒng)性及復(fù)雜性的研究視角和研究方法，與中醫(yī)藥的特點不謀而合[8]。因此，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，通過構(gòu)建“水牛角-珍珠母”藥對的“藥物-成分-靶標(biāo)-疾病”多層次生物網(wǎng)絡(luò)，結(jié)合基因功能注釋和京都基因與基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)通路富集分析，開展清開靈注射液的作用機制研究。

1 資料與方法

1.1 藥物分子信息的收集和活性分子的篩選

通過檢索中藥綜合數(shù)據(jù)庫(traditional Chinese medicine integrated database，TCMID)(http://www.megabionet.org/tcmid/search/)和參考相關(guān)文獻(xiàn)[9-10]，獲得水牛角、珍珠母的藥物成分，通過檢索PubChem Compound數(shù)據(jù)庫(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pccompound)獲得相應(yīng)分子信息，包括分子名稱、InChI Key、相對分子質(zhì)量(molecular weight，WM)、辛醇-水分配系數(shù)(XLogP3)、氫鍵配位電子供體數(shù)目(Hdon)、氫鍵配位電子受體數(shù)目(Hacc)、可旋轉(zhuǎn)鍵數(shù)目(RBN)、分子極性表面積(TPSA)、類藥性(drug-likeness，DL)、血-腦脊液屏障(blood brain barrier，BBB)、半衰期(half life，HL，t1/2)和分子結(jié)構(gòu)。

1.2 分子互作靶標(biāo)和疾病信息的收集以及靶標(biāo)相應(yīng)基因的獲取

通過檢索TCMID數(shù)據(jù)庫獲得相應(yīng)成分的靶標(biāo)及靶標(biāo)相應(yīng)疾病。靶標(biāo)相應(yīng)基因通過Uniprot(http://www.uniprot.org/)獲取，檢索Uniprot中的UniprotKB數(shù)據(jù)庫，檢索式為“organism：‘homo sapiens’ AND reviewed：yes”。將檢索結(jié)果以Excel格式導(dǎo)出，即獲得UniprotKB/Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫中人類的相關(guān)靶蛋白及其對應(yīng)基因的記錄。利用Excel軟件的“VLOOKUP”函數(shù)匹配所獲得靶標(biāo)對應(yīng)的基因信息。非蛋白質(zhì)的靶標(biāo)或其他致病菌中的靶標(biāo)，通過檢索NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)或者利用多種搜索引擎檢索獲得。

1.3 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與網(wǎng)絡(luò)分析

將“水牛角-珍珠母”藥對的藥物、成分、作用靶標(biāo)和相關(guān)疾病導(dǎo)入Cytoscape 3.4.0(http://www.cytoscape.org/)軟件構(gòu)建其“藥物-成分-靶標(biāo)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，利用Cytoscape 3.4.0軟件的NetworkAnalyzer工具計算網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，包括度值(Degree)、介數(shù)(betweenness centrality，BC)等[11-13]。在生物網(wǎng)絡(luò)中，Degree指一個節(jié)點與其他節(jié)點相連的邊的數(shù)目[14]；BC指網(wǎng)絡(luò)所用的最短路徑中經(jīng)過當(dāng)前節(jié)點的數(shù)目，反映節(jié)點在特定網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)中所處位置的樞紐程度[15]。利用節(jié)點Degree及BC排序確定網(wǎng)絡(luò)關(guān)鍵節(jié)點是目前網(wǎng)絡(luò)分析的主要策略之一[14]。因此，本研究采用該網(wǎng)絡(luò)分析方法，確定關(guān)鍵節(jié)點，探討“水牛角-珍珠母”藥對的主要作用靶標(biāo)、主治疾病及其作用機制。

1.4 基因本體(gene ontology，GO)分類富集分析

GO是主要為了統(tǒng)一表征所有物種的基因及基因產(chǎn)物的性質(zhì)而發(fā)起的生物信息學(xué)計劃[16]。GO數(shù)據(jù)庫(www.geneontology.org)旨在建立一套適用于所用物種的、對基因和蛋白質(zhì)功能進(jìn)行限定和描述的、并能隨著研究不斷深入而更新的語義詞匯標(biāo)準(zhǔn)。GO有3個分類：(1)細(xì)胞組分(cellular component，CC)，指基因產(chǎn)物位于何種細(xì)胞器或基因產(chǎn)物組中(如糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核或核糖體和蛋白酶體等)，表明基因產(chǎn)物在什么地方起作用；(2)分子功能(molecular function，MF)，描述基因產(chǎn)物在分子生物學(xué)上的活性，如催化活性或結(jié)合活性；(3)生物學(xué)過程(biological process，BP)，指由分子功能有序組成的，具有多個步驟的一個過程。GO的結(jié)構(gòu)是個有向無環(huán)圖，每個語義多在自己的類別中與其他語義相關(guān)聯(lián)，有時會與其他類別的語義相關(guān)聯(lián)；語義之間的關(guān)系為“is a”或“part of”。利用Cytoscape 3.4.0軟件Apps中的BiNGO 3.0.3對“水牛角-珍珠母”藥對對應(yīng)的基因分別進(jìn)行GO分類富集分析[17-18]。BiNGO Settings面板的參數(shù)設(shè)置如下：簇名分別命名為“DZ-MF”“DZ-BP”和“DZ-CC”；選擇“Paste Genes from Text”，將基因名稱復(fù)制粘貼到輸入框中，每個基因單獨占一行；輸出內(nèi)容和方式依次選擇“Overrepresentation”“Visualization”和“Overrepresented categories after correction”，參照集合選擇“Use whole annotation as reference set”，物種選擇“Homo Sapiens”，以Cytoscape層次網(wǎng)絡(luò)圖形式輸出該基因集合相較于人類基因組比例更高的GO分類注釋；選擇“Hypergeometric test”的統(tǒng)計方法和“Benjamini & Hochberg False Discovery Rate(FDR)correction”的P校正法，設(shè)置顯著性水平為P<0.01；分別選擇“GO_Molecular_Function”“GO_Cellular_Component”和“GO_Biological_Process”進(jìn)行GO-MF、GO-CC、GO-BP的富集分析。

1.5 KEGG通路富集分析

利用DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫(the Database for Annotation，Visualization and Integrated Discovery，https://david.ncifcrf.gov/)進(jìn)行通路富集分析[19]。在DAVID的基因列表通用管理面板中復(fù)制粘貼基因列表，選擇基因名稱對應(yīng)的基因標(biāo)示符“OFFICIAL_GENE_SYMBOL”，提交基因列表；為所提交的基因列表選擇對應(yīng)的物種“Homo Sapiens”，背景也選擇“Homo Sapiens”，即以人類全基因組為背景基因和參照集合。選擇分析工具“Functional Annotation Tool”，采用默認(rèn)的閾值EASE=0.1 and Count=2(EASE Score的閾值指最大P，Count的閾值指與某一通路相關(guān)的基因數(shù)目的最小值，統(tǒng)計檢驗基于modified Fisher Exact法)，可獲得通路富集結(jié)果，點擊鏈接可以查看KEGG數(shù)據(jù)庫(http://www.genome.jp/kegg/pathway.html)中對應(yīng)的通路圖及其詳情。

2 結(jié)果

2.1 化學(xué)成分分子信息分析

“水牛角-珍珠母”藥對共篩選出6個藥物成分，主要包括氨基酸類及無機物等。其中，4個(占66.7%)分子符合“Lipinski’s rule of five”；4個分子的TPSA<90 ?2，分別為天門冬氨酸(C0007)、膽固醇(C0037)、丙氨酸(C0083)和鹽酸胍(C0112)，提示這4個分子可能具有一定的BBB穿透性。采用SPSS 20軟件對“水牛角-珍珠母”藥對5個藥物分子(碳酸鈣除外)的分子信息進(jìn)行統(tǒng)計描述，結(jié)果顯示，5個藥物成分均值符合“Lipinski’s rule of five”，說明5個藥物成分總體具有較好的DL，見表1。

表1 “水牛角-珍珠母”藥對5個藥物分子(碳酸鈣除外)的 分子信息統(tǒng)計結(jié)果 Tab 1 Statistical results of information of the 5 drug molecules(except for calcium carbonate)of “cornu bubali-concha margaritiferallsta” herb couple

2.2 “藥物-成分-靶標(biāo)-疾病”網(wǎng)絡(luò)分析

“水牛角-珍珠母”藥對的“藥物-成分-靶標(biāo)-疾病”網(wǎng)絡(luò)見圖1(節(jié)點大小、節(jié)點名稱字號大小與Degree呈正相關(guān)，連線粗細(xì)與EdgeBetweenness呈正相關(guān))，共包括1 368個節(jié)點(2個藥物，6種成分，765個靶標(biāo)，595種疾病)和1 528條邊線。采用Degree和BC排序確定關(guān)鍵節(jié)點，并結(jié)合不同類型節(jié)點的具體Degree范圍，選出網(wǎng)絡(luò)中Degree≥10的成分節(jié)點、靶標(biāo)節(jié)點和Degree≥5疾病節(jié)點，見表2。由圖1、表2可見，在“水牛角-珍珠母”藥對網(wǎng)絡(luò)中，Degree≥10的成分為膽固醇、精氨酸、天冬氨酸、鹽酸胍和碳酸鈣，其中前三者的Degree遠(yuǎn)高于其他節(jié)點，分別為328、261和173；Degree≥10的標(biāo)靶分別為前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2(prostaglandin G/H synthase 2，COX-2)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma，PPARγ)、表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)、5-羥色胺2 A受體(5-hydroxytryptamine receptor 2 A，5-HT2 A)、β2腎上腺素能受體、內(nèi)皮型一氧化氮合酶3(nitric oxide synthase, endothelial，eNOS)、凝血酶原和β1腎上腺素能受體。其中，COX-2和PPARγ的Degree較高于其他靶標(biāo)節(jié)點，分別為33和28；前者與肺癌、膀胱癌、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、腹主動脈瘤和泌尿系統(tǒng)腫瘤等腫瘤，關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等炎癥性疾病，原發(fā)性痛經(jīng)等疼痛性疾病及阿爾茨海默病等32種疾病相關(guān)；后者與糖尿病、胰島素抵抗和肥胖等代謝性疾病，胰腺癌、腎細(xì)胞癌和睪丸癌等腫瘤疾病，動脈粥樣硬化、缺血性心臟病等循環(huán)系統(tǒng)疾病及炎癥性腸病等27種疾病相關(guān)。Degree≥5的疾病分別為精神分裂癥、阿爾茨海默癥和炎癥。

圖1 “水牛角-珍珠母”藥對的“藥物-成分-靶標(biāo)-疾病”網(wǎng)絡(luò) Fig 1 “Drug-composition-target-disease” network of “cornu bubali-concha margaritiferallsta” herb couple

節(jié)點名稱DegreeBCC0037膽固醇3280.6548C0096精氨酸2610.4573C0007天門冬氨酸1730.2950C0112鹽酸胍420.0674C0051碳酸鈣420.0821T0998COX-2330.0369T0922PPARγ280.0288T0430EGFR170.0177T1218TNF170.0266T00255-HT2A170.0196T0202β2腎上腺素能受體160.0142T0851eNOS150.0256T1024凝血酶原130.0167T0201β1腎上腺素能受體100.0072D0834精神分裂癥70.0037D0175阿爾茨海默病60.0025D0574炎癥50.0027

2.3 GO分類富集分析

通過BiNGO獲得了“水牛角-珍珠母”藥對的基因集合中729個基因的分子功能注釋信息，728個基因的細(xì)胞組分注釋信息，722個基因的生物學(xué)過程注釋信息。進(jìn)一步對以上基因注釋信息進(jìn)行分類富集分析：(1)GO-MF獲得196條富集結(jié)果，其層次網(wǎng)絡(luò)見圖2(節(jié)點大小代表基因數(shù)量多少，顏色深淺代表P大小)；(2)GO-CC獲得116條富集結(jié)果，其層次網(wǎng)絡(luò)見圖3(節(jié)點大小代表基因數(shù)量多少，顏色深淺代表P大小)；(3)GO-BP獲得973條富集結(jié)果，其層次網(wǎng)絡(luò)較過于復(fù)雜龐大，未在文中表示，僅列出其中P<0.01且基因數(shù)量百分比≥10.0%的前20條注釋信息，見表3。在圖2—3中，節(jié)點代表基因的功能注釋，各節(jié)點之間既有隸屬關(guān)系，也存在平行關(guān)系。GO分類富集分析的結(jié)果顯示，“水牛角-珍珠母”藥對的基因集合分別富集在脂質(zhì)結(jié)合、蛋白結(jié)合、轉(zhuǎn)運活性、底物特異性轉(zhuǎn)運活性、跨膜轉(zhuǎn)運活性、底物特異性跨膜轉(zhuǎn)運活性、受體活性、跨膜受體活性、G-蛋白耦連受體活性、分子傳感器活性、信號傳導(dǎo)活性、催化活性、氧化還原酶活性和水解酶活性等分子功能方面，細(xì)胞碎片、膜碎片、細(xì)胞外間隙、細(xì)胞外區(qū)域、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、細(xì)胞器膜、細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)、膜必須組分和膜固有組分等細(xì)胞組分方面以及小分子代謝過程、化學(xué)刺激響應(yīng)、生物質(zhì)量調(diào)控、生物過程正調(diào)控、初級代謝過程、細(xì)胞代謝過程、多細(xì)胞生物過程、結(jié)構(gòu)發(fā)育和信號通路等生物學(xué)過程方面。

圖2 “水牛角-珍珠母”藥對相應(yīng)基因GO分子功能分類的層次網(wǎng)絡(luò) Fig 2 Hierarchical network of GO classified molecular function of “cornu bubali-concha margaritiferallsta” herb couple related genes

圖3 “水牛角-珍珠母”藥對相應(yīng)基因GO細(xì)胞組分分類的層次網(wǎng)絡(luò) Fig 3 Hierarchical network of GO classified cellular compositions of “cornu bubali-concha margaritiferallsta” herb couple related genes

GO-IDGO生物學(xué)過程注釋PP(校正后)基因比/%基因44281小分子代謝過程8.93×10-731.21×10-6933.1MTRR|ABAT|EPRS|LIPA|LIPE等42221化學(xué)刺激響應(yīng)3.67×10-461.66×10-4328.7OXTR|SERPINE1|PRF1|ABAT|LIPE等65008生物質(zhì)量調(diào)控7.99×10-452.51×10-4229.2RB1|APP|OXTR|SERPINE1|ABAT等48518生物過程正調(diào)控7.81×10-301.06×10-2731.9RB1|APP|OXTR|SERPINE1|ICAM1等51179定位1.18×10-281.46×10-2638.5APP|OXTR|LIPA|ICAM1|EDNRA等44238初級代謝過程3.64×10-284.37×10-2656.6PRSS1|ABAT|EPRS|LIPA|LIPE等8152代謝過程1.84×10-272.02×10-2561.2PRSS1|ABAT|EPRS|LIPA|LIPE等6810運輸1.30×10-261.27×10-2434.2APP|OXTR|LIPA|EDNRA|LIPC等51234建立定位9.59×10-269.09×10-2434.2APP|OXTR|LIPA|EDNRA|LIPC等50896刺激響應(yīng)1.86×10-231.35×10-2142.0NPFFR2|APP|OXTR|SERPINE1|PRF1等48522細(xì)胞過程正調(diào)控2.02×10-231.45×10-2127.8RB1|APP|OXTR|SERPINE1|ICAM1等23033信號通路7.13×10-234.62×10-2128.5RB1|NPFFR2|APP|OXTR|GRPR等23052信號8.53×10-235.36×10-2137.5RB1|NPFFR2|APP|OXTR|ABAT等32501多細(xì)胞生物過程3.15×10-211.65×10-1947.0RB1|APP|PRSS1|OXTR|SERPINE1等44237細(xì)胞代謝過程1.18×10-174.28×10-1650.0APP|MTRR|HDAC11|ABAT|EPRS等9987細(xì)胞過程4.78×10-141.29×10-1278.0RB1|SERPINE1|ABAT|EPRS|LIPA等32502發(fā)育過程1.48×10-102.89×10-932.7RB1|APP|OXTR|SERPINE1|HDAC11等48856解剖結(jié)構(gòu)的發(fā)育4.48×10-97.30×10-827.1RB1|APP|OXTR|SERPINE1|HDAC11等7275多細(xì)胞有機體發(fā)育9.11×10-91.39×10-729.5RB1|APP|OXTR|SERPINE1|HDAC11等65007生物調(diào)節(jié)1.06×10-58.54×10-556.4RB1|SERPINE1|ABAT|GRPR|LIPA等

表4 “水牛角-珍珠母”藥對相應(yīng)基因KEGG通路富集分析(EASE<0.05，Count≥10，F(xiàn)DR<0.01) Tab 4 KEGG pathway enrichment analysis of “cornu bubali-concha margaritiferallsta” herb couple related genes(EASE<0.05，Count≥10 and FDR<0.01)

2.4 KEGG通路富集分析

利用DAVID數(shù)據(jù)庫對“水牛角-珍珠母”藥對的基因集合進(jìn)行KEGG通路富集分析，閾值參數(shù)設(shè)置為EASE=0.05，Count=10，共獲得57條富集結(jié)果，其中EASE<0.05，Count≥10，F(xiàn)DR<0.01的通路共16條，包括神經(jīng)活性配體-受體相互作用，PPAR信號通路，谷氨酸能突觸通路，鈣離子信號通路，膽汁分泌通路，脂肪的消化與吸收通路，抗菌藥物生物合成通路，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝通路，精氨酸生物合成通路，類固醇生物合成通路，丙酮酸鹽代謝通路，代謝通路，碳代謝通路，氨基酸生物合成通路及精氨酸、脯氨酸代謝通路和1個疾病通路肌萎縮側(cè)索硬化癥通路，見表4。

3 討論

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究策略具有整體性、系統(tǒng)性的特點，這與中醫(yī)藥整體觀與辨證論治的原則不謀而合[20]。已有諸多研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法進(jìn)行中藥潛在活性成分和作用靶點的預(yù)測及中藥作用機制的闡述[21-24]。為了從系統(tǒng)層面研究“水牛角-珍珠母”藥對多成分、多靶標(biāo)和多途徑相互配合發(fā)揮綜合治療效果的作用機制，本研究構(gòu)建了“水牛角-珍珠母”藥對的“藥物-成分-靶標(biāo)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，通過網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析，表明該網(wǎng)絡(luò)具備部分無標(biāo)度和小世界的網(wǎng)絡(luò)特性，說明網(wǎng)絡(luò)中存在關(guān)鍵節(jié)點。以節(jié)點Degree和BC排序，結(jié)果顯示，化合物分子膽固醇、精氨酸及天冬氨酸，靶標(biāo)COX-2、PPARγ和疾病精神分裂癥、阿爾茨海默癥及炎癥可能為該網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵節(jié)點。COX是花生四烯酸代謝過程中調(diào)節(jié)前列腺素合成的限速酶，目前發(fā)現(xiàn)有COX-1、COX-2和COX-3等3種亞型，其中COX-2為誘導(dǎo)性酶，在大多數(shù)細(xì)胞中不表達(dá)或少量表達(dá)，僅當(dāng)細(xì)胞受到促癌劑、生長因子及炎性因子等刺激時，其表達(dá)上調(diào)，參與炎癥和腫瘤的形成和發(fā)展；COX-2抑制劑有預(yù)防和治療多種腫瘤的作用[25]。PPAR為核受體家族的重要成員，PPARγ為其亞型之一，PPARγ的生物學(xué)功能復(fù)雜，包括參與脂肪及糖代謝、能量平衡，控制單核細(xì)胞分化成熟，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡，抑制炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化和凋亡，抑制腫瘤血管生成，抗肝纖維化，抗動脈粥樣硬化，調(diào)節(jié)血脂，降血壓，改善心功能、參與心室重構(gòu)，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的分化與成熟、參與神經(jīng)細(xì)胞凋亡等[26]。在相關(guān)疾病方面，早在20世紀(jì)80年代就有臨床報道，水牛角可用于血熱型精神分裂癥的治療[27]；水牛角有明顯的抗炎作用，可用于炎癥的治療[28]。GO富集分析和KEGG通路富集分析結(jié)果表明，“水牛角-珍珠母”藥對對應(yīng)的基因功能多與代謝相關(guān)，尤其與氨基酸代謝密切相關(guān)。

綜上所述，本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，對“水牛角-珍珠母”藥對的多成分、多靶點與多種疾病間復(fù)雜網(wǎng)狀關(guān)系進(jìn)行研究。研究結(jié)果初步驗證了“水牛角-珍珠母”藥對的基本藥理學(xué)作用和相關(guān)機制，并為進(jìn)一步深入探討其作用機制奠定了良好的基礎(chǔ)。

[1]劉睿，段金廒，吳皓，等.水牛角中水溶性物質(zhì)化學(xué)組成分析與鑒定[J].藥學(xué)學(xué)報，2015，50(5)：594-598.

[2]葉任高，傅玉素.實用方劑速記便覽[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：229-232.

[3]謝鳴.方劑學(xué)[M].3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2016：213-214.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：83，232.

[5]劉旭朝，周麗思，劉金欣，等.基于COI序列的水牛角及其易混偽品DNA條形碼鑒定研究[J].藥學(xué)學(xué)報，2017，52(3)：494-499.

[6]李影，孫佳明，張靜，等.珍珠母不同炮制品對小鼠抗抑郁作用研究[J].吉林中醫(yī)藥，2014，34(4)：388-389，392.

[7]金艷.珍珠母重鎮(zhèn)安神藥理作用及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].浙江中醫(yī)雜志，2017，52(5)：388-389.

[8]張新莊.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究思路探索熱毒寧注射液治療的作用機制[D].南京：南京中醫(yī)藥大學(xué)，2013.

[9]羅國安，王義明，梁瓊麟，等.中醫(yī)藥系統(tǒng)生物學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，2011：2-8，426-427.

[10] 楊維，吳思玚，王蘆笛，等.清開靈注射液中鈣元素分析[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2017，23(1)：75-78.

[11] 姚瑤.基于系統(tǒng)藥理學(xué)的中藥復(fù)方配伍及作用機制研究[D].咸陽：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2014.

[12] 劉惠.基于系統(tǒng)藥理學(xué)的甘草作用機制和新藥發(fā)現(xiàn)研究[D].咸陽：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2013.

[13] 張新莊，蕭偉，徐筱杰，等.利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法研究熱毒寧注射液抗流感病毒的分子作用機制[J].物理化學(xué)學(xué)報，2013，29(7)：1415-1420.

[14] 馮春來，顧於梅，秦悅，等.基于模塊分解的生物網(wǎng)絡(luò)分析算法及其應(yīng)用[J].中成藥，2016，38(10)：2227-2232.

[15] 黃海濱，楊路明，王建新，等.基于網(wǎng)絡(luò)拓?fù)涞纳锞W(wǎng)絡(luò)關(guān)鍵節(jié)點識別研究進(jìn)展[J].數(shù)學(xué)的實踐與認(rèn)識，2011，41(7)：114-125.

[16] The Gene Ontology project in 2008[J].Nucleic Acids Res，2008，36(Database issue)：D440-D444.

[17] 楊蓉，蔡琳.BiNGO及DAVID在miR-155靶基因富集分析中的應(yīng)用[J].福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，46(6)：408-414.

[18] Maere S，Heymans K，Kuiper M.BiNGO：a Cytoscape plugin to assess overrepresentation of gene ontology categories in biological networks[J].Bioinformatics，2005，21(16)：3448-3449.

[19] Huang da W，Sherman BT，Lempicki RA.Systematic and integrative analysis of large gene lists using DAVID bioinformatics resources[J].Nat Protoc，2009，4(1)：44-57.

[20] 劉志華，孫曉波.網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)：中醫(yī)藥現(xiàn)代化的新機遇[J].藥學(xué)學(xué)報，2012，47(6)：696-703.

[21] 劉鑫馗，吳嘉瑞，藺夢娟，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的四君子湯作用機制分析[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2017，23(16)：194-202.

[22] 劉鑫馗，吳嘉瑞，藺夢娟，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的吳茱萸湯作用機制分析[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2017，23(16)：203-210.

[23] 劉鑫馗，吳嘉瑞，張丹，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的參附湯作用機制分析[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2017，23(16)：211-218.

[24] 劉鑫馗，吳嘉瑞，張丹，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的生脈散作用機制分析[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2017，23(16)：219-226.

[25] 劉智豪，劉叔文，余樂.COX-2抑制劑聯(lián)合抗腫瘤的研究進(jìn)展[J].中國藥理學(xué)通報，2012，28(12)：1651-1654.

[26] 蔡靈鈺，王莉，俞春江.過氧化物酶體增殖物受體γ激動劑對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)機制[J].中華老年心腦血管病雜志，2016，18(2)：218-220.

[27] 陳元德.水牛角粉治療精神分裂癥二十三例臨床觀察[J].成都中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1984(2)：18-19.

[28] 劉睿.水牛角解熱效應(yīng)評價與珍珠產(chǎn)品開發(fā)[D].鎮(zhèn)江：江蘇大學(xué)，2007.