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        苦參堿對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力的影響

        2018-02-21 02:30:30郭永梅曹柳肖莉萍楊宇秀高建華
        科技視界 2018年32期
        關(guān)鍵詞:阿爾茨海默病苦參堿記憶力

        郭永梅 曹柳 肖莉萍 楊宇秀 高建華

        【摘 要】目的:探討苦參堿對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力的影響。方法:將Morris水迷宮試驗(yàn)達(dá)標(biāo)的18只雄性SD大鼠,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組和苦參堿組(15mg·kg-1),每組6只。模型組和苦參堿組大鼠雙側(cè)海馬注射凝聚態(tài)Aβ1-40,正常對(duì)照組分別給予等體積藥物或生理鹽水灌胃,持續(xù) 28d。采用Morris水迷宮測(cè)試行為學(xué)指標(biāo),觀察大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。結(jié)果:與正常對(duì)照組相比,模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力均明顯下降;與模型組相比,苦參堿組大鼠Morris水迷宮作業(yè)的錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)減少,記憶能力均明顯增強(qiáng)(P<0.05)。結(jié)論:苦參堿灌胃可以減輕阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力損傷。

        【關(guān)鍵詞】苦參堿;阿爾茨海默?。淮笫?;記憶力

        中圖分類號(hào): R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼: A 文章編號(hào): 2095-2457(2018)32-0075-002

        DOI:10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.32.034

        阿爾茨海默病(Alzheimers disease,AD)是老年人常見(jiàn)的神經(jīng)變性疾病,是起病隱匿、進(jìn)行性的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病[1]。目前研究表明:β-淀粉樣蛋白(β-amyloid protein,Aβ)的沉積及異常代謝是引發(fā)AD的關(guān)鍵誘因。在許多研究中均發(fā)現(xiàn):Aβ與神經(jīng)細(xì)胞的凋亡密切關(guān)系,Aβ可誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡[2]??鄥A是(matrine,MAT)由植物苦參的干燥根、莖、植株及果實(shí)等部位,經(jīng)乙醇等有機(jī)溶劑提取得到的活性成分,一般為苦參總堿。該成分具有廣泛的抗腫瘤、抗心率失常及抗炎等作用,臨床上多用于肝炎的治療,且毒副作用小,療效較好[3]。但苦參堿的抗炎作用能否對(duì)AD起到記憶保護(hù)作用,目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用大鼠海馬注射凝聚態(tài)凝聚態(tài)Aβ1-40構(gòu)建AD動(dòng)物模型,通過(guò)給藥觀察苦參堿對(duì)AD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響。

        1 材料與方法

        1.1 動(dòng)物分組及實(shí)驗(yàn)處理

        健康雄性SD大鼠(清潔級(jí)),體質(zhì)量在250~300 g,購(gòu)自南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物合格證號(hào):SCXK-2015-0004。經(jīng)Morris水迷宮初篩,淘汰反應(yīng)中過(guò)于靈敏、先天癡呆和游泳姿勢(shì)不良者之后,將18只大鼠隨機(jī)分為3組,正常對(duì)照組、模型組和苦參堿組大鼠,每組6只。大鼠自由飲食,晝夜交替飼養(yǎng),飼養(yǎng)室溫度保持為15℃~20℃。

        1.2 主要試劑和實(shí)驗(yàn)儀器

        β-淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)(購(gòu)于美國(guó)Sigma公司);苦參堿(購(gòu)于上??寺∩锔呒夹g(shù)有限公司);ZH-DSG型Morris水迷宮( 購(gòu)于安徽淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司)。

        1.3 實(shí)驗(yàn)方法

        (1)Aβ1-40孵育 用無(wú)菌生理鹽水,將0.5mgAβ1-40稀釋成濃度為10μg·μl-1的溶液,將恒溫箱溫度調(diào)至37 ℃,孵育1周,使其變?yōu)槟蹜B(tài)Aβ1-40,采用封口膜封口,4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

        (2)大鼠模型的構(gòu)建[4]用6 %水合氯醛腹腔注射麻醉SD大鼠,將其固定于大鼠腦立體定位儀上。采用Cushman和Pellegrino編著的《大鼠腦立體定位圖譜》所設(shè)計(jì)方法,以前囟為原點(diǎn),向后4.0mm,中線旁2.0~2.5mm,采用微量進(jìn)樣器在顱骨面下進(jìn)針3.0~3.5mm,每只SD大鼠注射5μl,對(duì)照組按照AD模型組方法,注射生理鹽水5μl??鄥A組大鼠正常喂養(yǎng)基礎(chǔ)從造模手術(shù)當(dāng)天灌胃苦參堿組15mg·kg-1治療,對(duì)照組及模型組灌胃等劑量生理鹽水,各組共給藥28d。

        (3)記憶能力測(cè)試項(xiàng)目[5]SD大鼠造模完成后,進(jìn)行Morris水迷宮作業(yè)實(shí)驗(yàn):人為將用墨水染成黑色的水池分為四個(gè)象限,選擇其中一個(gè)象限放入一平臺(tái),將大鼠沿壁依次從不同象限放入池中,記錄大鼠的運(yùn)動(dòng)軌跡,并用軟件處理、分析。①定向航行試驗(yàn):歷時(shí)5d,前4d為訓(xùn)練,分別從四個(gè)不同象限的池壁中點(diǎn)入水,每次大鼠游泳60s,訓(xùn)練時(shí)任意選擇一入水點(diǎn),測(cè)其在60s內(nèi)找到平臺(tái)所需的時(shí)間(逃避潛伏期),若大鼠未能尋找到平臺(tái),則記錄其逃避潛伏期為60s。②空間探索試驗(yàn):在第6天時(shí)撤除水平臺(tái),然后任選一個(gè)入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中,測(cè)其在120s內(nèi)在原象限的游泳時(shí)間及游泳距離占總距離的百分比。

        (4)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件,組間比較用t檢驗(yàn),多組間比較采用方差分析。

        2 結(jié)果

        行為學(xué)及記憶能力的改變苦參堿對(duì)AD大鼠定位航行能力及空間探索能力的影響研究顯示,與模型組小鼠潛伏期顯著增加(P<0.01),游泳距離顯著增加(P<0.01),原平臺(tái)象限跨越次數(shù)比顯著減少(P<0.01),原平臺(tái)象限游泳時(shí)間顯著減少(P<0.01);與模型組比較,苦參堿組及對(duì)照組大鼠潛伏期顯著減少(P<0.01),游泳距離明顯縮短(P<0.05),原平臺(tái)象限跨越次數(shù)比顯著增加(P<0.01),原平臺(tái)象限游泳時(shí)間比顯著增加(P<0.01)。見(jiàn)表。

        3 討論

        認(rèn)知記憶功能方面的減退是AD病人的重要臨床表現(xiàn)。Morris水迷宮檢測(cè)能較全面地考察動(dòng)物的認(rèn)知過(guò)程,可排除氣味對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,客觀的反映實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的認(rèn)知水平,以其操作簡(jiǎn)便,數(shù)據(jù)記錄準(zhǔn)確,誤差小的特點(diǎn),被廣泛用于認(rèn)知記憶能力的測(cè)試[5]。大量老年斑、神經(jīng)纖維纏結(jié)和選擇性神經(jīng)元及突觸的丟失是AD病的重要神經(jīng)病理學(xué)特征。本研究表明:苦參堿灌胃可以減輕阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力損傷。

        【參考文獻(xiàn)】

        [1]雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)AD模型大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[D].南昌:南昌大學(xué),2010.

        [2]雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠海馬突觸后致密物蛋白N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸受體亞基2B和突觸后致密物質(zhì)95的影響[D].南昌:南昌大學(xué),2010.

        [3]黃丹,賴玲.苦參堿劑型的研究進(jìn)展[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014,31(6):1040-1042.

        [4]李宜培,彭蕤蕤,柴高尚,等.促紅細(xì)胞生成素對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力及其超微結(jié)構(gòu)的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2015,35(3):1620-1623.

        [5]于濤,賴世隆.補(bǔ)腎益智方對(duì)實(shí)驗(yàn)性阿爾茨海默病模型大鼠學(xué)習(xí)記憶水平的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2015,35(2):1030-1033.

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