孫國(guó)海 汪珣 朱來(lái)晴 石亮

210008江蘇省南京市南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院男科實(shí)驗(yàn)室

隨著社會(huì)發(fā)展及環(huán)境惡化，男性生育力逐漸下降，精液檢查需求相應(yīng)不斷增加。因此，精液檢查結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性顯得尤為重要。隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展，自動(dòng)精液分析儀逐步應(yīng)用于臨床[1-2]。對(duì)于大部分精液標(biāo)本來(lái)說(shuō)，自動(dòng)精液分析儀在精子密度、活力等方面的檢測(cè)結(jié)果較傳統(tǒng)手工法更客觀、可靠，但是自動(dòng)精液分析儀只可用于檢測(cè)精子濃度＞2×106/mL的標(biāo)本[3]。對(duì)于精子濃度遠(yuǎn)低于2×106/mL的標(biāo)本，存在精子漏檢甚至誤診為無(wú)精子癥的可能。本實(shí)驗(yàn)室目前采用的全自動(dòng)精子分析儀(Fully automated sperm analyzer，F(xiàn)ASA)BEION-S3 同樣會(huì)遇到這樣的問(wèn)題。本文中，我們所探討對(duì)象，僅限于FASA全視野均未觀測(cè)到精子從而懷疑為無(wú)精子癥的精液標(biāo)本，對(duì)這些標(biāo)本進(jìn)一步分析以確診其是否是無(wú)精子癥。

資料與方法

2018年1-9月收集男性精液標(biāo)本，F(xiàn)ASA檢測(cè)為無(wú)精子癥標(biāo)本388例，受試者年齡18～55歲。

儀器與試劑：上海北昂醫(yī)藥科技股份有限公司的FASABEION-S3，Olympus CX23光學(xué)顯微鏡，Thermo Fisher scientific公司Micro CL 17離心機(jī)。

方法：囑受試者禁欲2～7 d，手淫取精，標(biāo)本于37℃孵育至完全液化后充分混勻，取2 μL于BEION-S3專用載玻片中，進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)分析。對(duì)未檢測(cè)出精子而提示無(wú)精子癥的標(biāo)本，取樣50 μL均勻涂片后于高倍鏡下逐個(gè)視野觀察，記錄前向運(yùn)動(dòng)PR精子數(shù)、非前向運(yùn)動(dòng)NP精子數(shù)及不動(dòng)IM精子數(shù)。重復(fù)上述涂片步驟1次，記錄2次結(jié)果之和為最終結(jié)果。如2次均未見(jiàn)精子，則取標(biāo)本1 mL以3 000 r/min離心15 min，棄上清，將沉淀物混勻后，在兩張玻片上各加入10 μL沉淀團(tuán)懸液，覆蓋22 mm×22 mm蓋玻片，200倍鏡下逐個(gè)視野觀察，如前記錄各類型精子數(shù)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：以Microsoft Excel 2013進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

結(jié) 果

388例精液標(biāo)本中，離心前鏡檢未觀測(cè)到精子239例(61.60%)，其中離心后鏡檢發(fā)現(xiàn)精子10例(2.58%)；離心前鏡檢觀測(cè)到精子成分149例(38.40%)。觀測(cè)到的不同運(yùn)動(dòng)類型PR、NP、IM精子的標(biāo)本例數(shù)具體結(jié)果，見(jiàn)表1。

討 論

在精液常規(guī)分析中，傳統(tǒng)手工法費(fèi)時(shí)費(fèi)力且易受檢測(cè)者主觀影響，因而近些年隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展，精液自動(dòng)分析系統(tǒng)逐步被市場(chǎng)接受。本實(shí)驗(yàn)室采用的FASA BEION-S3僅需2μL精液標(biāo)本即可快速檢測(cè)出精子密度、活力等常規(guī)參數(shù)，但對(duì)于精子密度極低的精液標(biāo)本存在精子漏檢及誤診為無(wú)精子癥的可能。

無(wú)精子癥是指射出的精液在離心后的沉淀物中未發(fā)現(xiàn)精子，根據(jù)不同病因可分為梗阻性無(wú)精子癥和非梗阻性無(wú)精子癥[4]。本實(shí)驗(yàn)室就診的男性不育癥尤其是少精子癥、無(wú)精子癥患者，多數(shù)于后期需進(jìn)行輔助生育，如果精液標(biāo)本中能夠發(fā)現(xiàn)活動(dòng)精子，尤其是PR精子，那么患者可能無(wú)須承受后期睪丸穿刺的痛苦，因此對(duì)懷疑無(wú)精子或少精子癥標(biāo)本需盡量確診其有無(wú)精子及活動(dòng)精子。在本研究中，388例經(jīng)FASA分析初步懷疑無(wú)精子癥標(biāo)本，經(jīng)過(guò)離心后鏡檢，確診無(wú)精子癥標(biāo)本229例。但必須指出，3 000 r/min離心15 min并不能使精液中所有精子完全沉淀下來(lái)，且離心后精子可能喪失活力。離心后發(fā)現(xiàn)精子的10例標(biāo)本，屬于隱匿精子癥，其中僅1例發(fā)現(xiàn)1條PR精子，另外9例均只檢測(cè)到1～2條不動(dòng)精子。對(duì)于149例可見(jiàn)不同運(yùn)動(dòng)類型精子的標(biāo)本，因精子密度過(guò)低而無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量密度，但通過(guò)對(duì)鏡下檢測(cè)到的精子尤其是活動(dòng)精子進(jìn)行計(jì)數(shù)，并在檢測(cè)報(bào)告中給予備注，為臨床醫(yī)生提供了相對(duì)直觀的精液指標(biāo)，對(duì)臨床判斷不育癥病因及后繼治療具有良好的指導(dǎo)意義。

表1 388例FASA檢測(cè)出的無(wú)精子癥標(biāo)本進(jìn)一步鏡檢結(jié)果[n(%)]

綜上所述，對(duì)于FASA檢測(cè)出的懷疑無(wú)精子癥的精液標(biāo)本，需進(jìn)一步通過(guò)涂片鏡檢甚至離心后鏡檢的方法，確診其有無(wú)精子及活動(dòng)精子，從而得到相對(duì)可靠準(zhǔn)確的精液檢測(cè)結(jié)果。