徐文品 焦 琨 綜述 張 偉 審校

口腔鱗癌是口腔腫瘤科常見(jiàn)病，好發(fā)于舌、頰和牙齦等組織。其惡性程度高，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者預(yù)后不佳，生存率較低。目前臨床上普遍采用手術(shù)擴(kuò)大切除和淋巴清掃為主，放化療為輔等多種綜合治療方法，但患者術(shù)后生存期和生活質(zhì)量仍不理想。報(bào)道稱口腔鱗癌的發(fā)生與發(fā)展是一個(gè)涉及到多種遺傳和表觀遺傳改變的復(fù)雜生物學(xué)過(guò)程[1]。隨著生物信息和基因組學(xué)不斷的發(fā)展和深入，研究證實(shí)一組長(zhǎng)度大于200 nt、無(wú)編碼能力的長(zhǎng)鏈非編碼RNAs(Long non-coding RNAs，LncRNAs)在口腔鱗癌中存在異常表達(dá)。異常表達(dá)的LncRNAs可充當(dāng)不同類型的功能性分子，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲等生物學(xué)行為發(fā)揮調(diào)控作用[2-4]。本文主要論述口腔鱗癌中相關(guān)LncRNAs的表達(dá)水平以及闡述對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)分化和代謝等生物學(xué)行為的影響，為口腔鱗癌診治提供理論依據(jù)和新的臨床思路。

1 LncRNAs

Okazaki等[5]首次發(fā)現(xiàn)LncRNAs這一新的轉(zhuǎn)錄物。起初LncRNAs一直被認(rèn)為是RNA聚合酶Ⅱ在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中生成的副產(chǎn)物。后來(lái)研究證實(shí)LncRNAs是一組長(zhǎng)度超過(guò)200 nt、不能編碼蛋白的RNA[6]。雖然它們?nèi)狈幋a蛋白的重要開(kāi)放閱讀框，但是Ulitsky等[7]提出LncRNAs可行使多種功能，如直接或間接轉(zhuǎn)錄調(diào)控、轉(zhuǎn)錄因子隔離和蛋白質(zhì)或RNA的調(diào)節(jié)等。LncRNAs可作為剪接因子和競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源性RNA(Competitive endogenous RNA，ceRNA)參與干細(xì)胞分化和自身免疫疾病調(diào)控。研究報(bào)道LncRNAs在結(jié)直腸癌[8]、腎癌[9]、乳腺癌[10]和食道癌[11]等腫瘤中異常表達(dá)。腫瘤中異常表達(dá)的LncRNAs廣泛涉及各種生理和病理過(guò)程，調(diào)控腫瘤的生物學(xué)行為，如DANCR[12]、PVT1[13]和CASC15[14]等。Gibb等[15]發(fā)現(xiàn)LncRNAs在口腔癌前病變和口腔鱗癌中表達(dá)異常，第一次闡述了LncRNAs在口腔疾病中的表達(dá)水平和作用機(jī)制，為L(zhǎng)ncRNAs在口腔其它疾病研究邁出重要一步。近年來(lái)，眾多報(bào)道稱LncRNAs可作為口腔鱗癌的診斷標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)。

2 口腔鱗癌中相關(guān)LncRNAs的異常表達(dá)及其作用

2.1 核富集轉(zhuǎn)錄物1(Nuclear enriched abundant transcript 1，NEAT1)

NEAT1是重要的細(xì)胞功能調(diào)節(jié)因子，有兩種共享相同轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄變體(NEAT1-1和NEAT1-2)，但它們終止位點(diǎn)不同。NEAT1對(duì)結(jié)腸癌、膽囊癌和卵巢癌等腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移起調(diào)節(jié)作用[16]。鼻咽癌中高表達(dá)的NEAT1通過(guò)抑制miR-124表達(dá)促進(jìn)鼻咽癌的發(fā)展，這一復(fù)雜的過(guò)程是由調(diào)控miR-124/NF-κB信號(hào)通路來(lái)完成的[17]。Huang等[18]采用RT-PCR在口腔鱗癌細(xì)胞系和癌組織中檢測(cè)到NEAT1表達(dá)顯著上調(diào)，敲除NEAT1后發(fā)現(xiàn)口腔鱗癌細(xì)胞增殖和侵襲行為受到抑制。低表達(dá)的NEAT1可促使癌細(xì)胞停滯在G0和G1期并加快癌細(xì)胞進(jìn)入凋亡程序。NEAT1的表達(dá)水平與口腔鱗癌的TNM分期和腫瘤的組織學(xué)類型密切相關(guān)。NEAT1與miR-365的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，抑制miR-365可消除NEAT1敲除后對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的抑制作用。NEAT1/miR-365軸可調(diào)節(jié)RGS20、Cyclin D1、E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白和波形蛋白的表達(dá)水平，從而對(duì)口腔鱗癌起調(diào)控作用。作為miR-365的直接靶點(diǎn)RGS20可通過(guò)增強(qiáng)細(xì)胞活力和運(yùn)動(dòng)性逆轉(zhuǎn)miR-365對(duì)腫瘤的抑制作用。故NEAT1/miR-365/RGS20軸可能參與調(diào)控口腔鱗癌的生物過(guò)程，是口腔鱗癌的治療靶點(diǎn)。

2.2 轉(zhuǎn)移相關(guān)肺腺癌轉(zhuǎn)錄物1(Metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT1)

MALAT1位于人染色體11q13。MALAT1主要通過(guò)選擇性剪接和轉(zhuǎn)錄調(diào)控兩種方式發(fā)揮作用[19]。MALAT1在肝癌、乳腺癌和骨肉瘤等腫瘤中高表達(dá)并發(fā)揮調(diào)控功能[20]。Chang等[21]研究發(fā)現(xiàn)口腔鱗癌中MALAT1顯著高表達(dá)，敲除MALAT1后癌細(xì)胞活力減弱。作為ceRNA的MALAT1一方面調(diào)節(jié)miR-125b的表達(dá)；另一方面經(jīng)miR-125b途徑調(diào)控STAT3的表達(dá)，以達(dá)到完成抑制或促進(jìn)口腔鱗癌細(xì)胞增殖的功能。故MALAT1通過(guò)miR-125b/STAT3軸來(lái)調(diào)控口腔鱗癌細(xì)胞的增殖等行為。蛋白印跡實(shí)驗(yàn)證實(shí)MALAT1通過(guò)激活β-catenin和NF-κB通路，參與上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)介導(dǎo)口腔鱗癌的轉(zhuǎn)移；同時(shí)Slug、Zeb-1和Twist-1等轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)也受到抑制[22]。LncRNA-MALAT1在舌癌細(xì)胞系中高表達(dá)并促進(jìn)舌癌細(xì)胞的增殖和侵襲，而腫瘤抑制因子miR-124高表達(dá)促使JAG1下調(diào)，阻止舌癌向鄰近和遠(yuǎn)處出現(xiàn)侵襲轉(zhuǎn)移[23]。MALAT1/miR-124/JAG1的相互作用對(duì)舌癌的發(fā)展起重要作用。

2.3 轉(zhuǎn)錄超保守元件338(Transcribed ultraconserved element 338，TUC338)

TUC338位于人染色體12q13.13，轉(zhuǎn)錄本為590 bp。TUC338可通過(guò)相關(guān)下游基因如CDK4、CDK6和Cyclin D1或通過(guò)轉(zhuǎn)染TUC338改變下游相關(guān)因子STAT1、p-STAT1、Akt、p-Akt和Caspase-3的表達(dá)繼而影響腫瘤的發(fā)展。作為靶向TIMP1基因的新型致癌基因，TUC338抑制宮頸癌和結(jié)腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與侵襲[24]。而在肺癌中TUC338通過(guò)激活MAPK途徑促進(jìn)肺癌的侵襲[25]。Ouyang等在25例舌癌組織中發(fā)現(xiàn)TUC338高表達(dá)并促進(jìn)舌癌細(xì)胞的增殖，瞬間轉(zhuǎn)染shRNA-TUC338后發(fā)現(xiàn)舌癌細(xì)胞系CAL-27和SCC-9細(xì)胞的增殖能力受到明顯抑制同時(shí)誘導(dǎo)舌癌細(xì)胞的凋亡；shRNA-TUC338轉(zhuǎn)染組的舌癌細(xì)胞增殖抑制率和癌細(xì)胞凋亡率高于對(duì)照組和空白組[26]。雖然Si-TUC338對(duì)舌癌細(xì)胞廣泛死亡起著誘導(dǎo)作用，但對(duì)處于S期的舌癌細(xì)胞沒(méi)有任何效果，這一點(diǎn)與肝細(xì)胞癌不同。綜上TUC338可作為舌癌診斷和治療的標(biāo)志物，是舌癌潛在的新型治療靶標(biāo)。但TUC338作用機(jī)制仍不清楚，有待繼續(xù)研究。

2.4 結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄物2(Colon cancer-associated transcript 2，CCAT2)

CCAT2是一種新型非編碼RNA，位于染色體8q24。CCAT2在胃癌和食管鱗癌等腫瘤中異常表達(dá)并調(diào)控著腫瘤的生物學(xué)行為。研究證實(shí)，與癌旁組織相比，CCAT2在口腔鱗癌中高表達(dá)，沉默CCAT2誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡、抑制癌細(xì)胞增殖和減弱侵襲能力[27]。通過(guò)激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，CCAT2開(kāi)啟致癌效應(yīng)。氯化鋰激活的Wnt/β-catenin信號(hào)通路可抑制β-catenin、CCND1和MYC表達(dá)，同時(shí)激活GSK-3β可恢復(fù)以CCAT2為媒介的腫瘤惡性生物學(xué)行為。Yan等[28]統(tǒng)計(jì)、分析和評(píng)估62位口腔鱗癌患者整體生存率與CCAT2的表達(dá)水平是否存在相關(guān)性，結(jié)果顯示患者總體生存率與CCAT2表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。Meta分析也顯示CCAT2高表達(dá)的患者整體生存率低，惡化率高[29]。CCAT2表達(dá)水平對(duì)口腔鱗癌的預(yù)后評(píng)估有著積極的意義。

2.5 SOX21反義RNA1(SOX21 antisense RNA 1，SOX21-AS1)

SOX21-AS1是一組長(zhǎng)為2986 bp的長(zhǎng)鏈非編碼RNA，位于人染色體13q32.1。SOX21-AS1和SOX21共享一個(gè)頭對(duì)頭的啟動(dòng)子。SOX21-AS1可作為增強(qiáng)劑，增強(qiáng)腫瘤抑制基因的mRNA表達(dá)；也可作為誘餌，阻止某些轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合以阻止癌基因轉(zhuǎn)錄。SOX21-AS1在肺癌中通過(guò)抑制p57發(fā)揮癌基因的致癌作用。SOX21-AS1在肺腺癌(Lung adenocarcinoma，LUAD)組織中顯著過(guò)表達(dá)并促進(jìn)LUAD細(xì)胞的增殖。SOX21-AS1作用于靶標(biāo)miR-145/MYO6軸促進(jìn)結(jié)直腸癌的形成[30]。SOX21-AS1在口腔鱗癌中低表達(dá)，加快口腔鱗癌細(xì)胞的生長(zhǎng)速度和增強(qiáng)癌細(xì)胞的侵襲力。體外甲基化實(shí)驗(yàn)闡明DNA高甲基化具有抑制口腔癌細(xì)胞中SOX21-AS1啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的功能；口腔鱗癌中SOX21-AS1表達(dá)水平降低與CpG 2區(qū)的腫瘤高度甲基化有關(guān)，但與CpG 1區(qū)和CpG 3區(qū)無(wú)關(guān)[31]。SOX21-AS1的表達(dá)水平下調(diào)抑制E-鈣黏蛋白的表達(dá)和促進(jìn)纖維連結(jié)蛋白和Cyclin D1的生成。SOX21-AS1的表達(dá)也受口腔鱗癌TNM分期、腫瘤直徑大小以及腫瘤類型的影響。口腔鱗癌患者的癌組織中SOX21-AS1表達(dá)水平低，其生存期短。因此SOX21-AS1表達(dá)水平對(duì)口腔鱗癌患者的預(yù)后評(píng)估有重要的意義。SOX21-AS1可作為口腔鱗癌預(yù)后判斷的標(biāo)志物，但SOX21-AS1抑制細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲的機(jī)制仍不清楚。

2.6 ?；撬嵘险{(diào)基因1(Taurine up-regulated gene 1，TUG1)

TUG1是一種常見(jiàn)的LncRNAs。高表達(dá)的TUG1有助于食道癌和卵巢癌等腫瘤的轉(zhuǎn)移。Li等[32]證實(shí)TUG1在舌癌中高表達(dá)，促進(jìn)舌癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移；敲除TUG1不僅可抑制細(xì)胞的增殖而且增加舌癌化療的效果。舌癌的TNM分期以及是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都會(huì)與TUG1的表達(dá)相關(guān)。Liang等[33]證實(shí)敲除TUG1能抑制β-catenin和Cyclin D1等相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而抑制口腔鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、減弱癌細(xì)胞侵襲力和促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡；同時(shí)敲除TUG1可干擾c-myc的mRNA和蛋白質(zhì)合成，影響口腔鱗癌的進(jìn)展。在Tca8113和TSCCA口腔鱗癌細(xì)胞系中，Wnt/β-catenin途徑的活化劑(氯化鋰，LiCl)能逆轉(zhuǎn)TUG1敲除后對(duì)癌細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響。TUG1可能是舌癌的一個(gè)潛在治療靶點(diǎn)，但舌癌中TUG1相關(guān)作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

2.7 尿路上皮癌相關(guān)1(Urothelial cancer associated 1，UCA1)

UCA1位于染色體19p13.12。UCA1由三個(gè)外顯子組成，轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度為1400 bp。UCA1通過(guò)以下途徑發(fā)揮調(diào)控功能：一是調(diào)節(jié)β-catenin的表達(dá)；二是作用于TCF4和Cyclin D1的下游靶分子。UCA1的表達(dá)水平與β-catenin、TCF-4和Cyclin D1呈正相關(guān)。LncRNA-UCA1最初是在膀胱癌中檢測(cè)到高表達(dá)。胃癌和骨肉瘤中UCA1的高表達(dá)促進(jìn)癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖和加快癌細(xì)胞遷移。在124例舌癌患者的腫瘤組織和癌旁組織中檢測(cè)到UCA1在腫瘤組中高表達(dá)并促進(jìn)細(xì)胞的增殖，沉默UCA1后發(fā)現(xiàn)口腔鱗癌細(xì)胞的增殖能力出現(xiàn)抑制現(xiàn)象[34]。Fang等[35]發(fā)現(xiàn)UCA1抑制miR-184的表達(dá)，導(dǎo)致口腔鱗癌細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)?？谇击[癌中UCA1表達(dá)水平與腫瘤有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征相關(guān)性分析時(shí)發(fā)現(xiàn)在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤中，UCA1表達(dá)水平相對(duì)較低。UCA1在口腔鱗癌中異常表達(dá)以及對(duì)口腔鱗癌的調(diào)控作用表明UCA1可作為口腔鱗癌診治的新依據(jù)和靶標(biāo)。

3 小結(jié)與展望

雖然LncRNAs無(wú)法編碼蛋白，但卻參與表觀遺傳調(diào)控、細(xì)胞調(diào)控和腫瘤調(diào)控。長(zhǎng)鏈非編碼RNAs的功能性特征為腫瘤的診治及預(yù)后的判斷和評(píng)估提供了理論依據(jù)。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)許多相關(guān)LncRNAs在口腔鱗癌中表達(dá)異常。異常表達(dá)的LncRNAs對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞的生物學(xué)行為具有調(diào)控作用。這些LncRNAs可作為口腔鱗癌診斷、治療和預(yù)后的標(biāo)志物或靶點(diǎn)。雖然LncRNAs在口腔鱗癌中的作用機(jī)制被逐一闡明，但仍有部分LncRNAs作用機(jī)制不明確，仍需要進(jìn)一步研究。