楊曉彥+王桂香+李弢

[摘要] 目的 探討妊娠期糖尿?。℅DM）孕婦孕期分泌型卷曲相關(guān)蛋白5（SFRP5）的表達(dá)與胰島素抵抗的關(guān)系。 方法 篩選2016年1月～2017年3月在內(nèi)蒙古自治區(qū)婦幼保健院產(chǎn)檢的50名正常孕婦作為對(duì)照組，50例確診為GDM的孕婦為實(shí)驗(yàn)組。比較兩組孕24～28周空腹胰島素、空腹血糖、血脂檢查結(jié)果；采用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)兩組產(chǎn)婦剖宮產(chǎn)分娩時(shí)的肘靜脈血清中的SFRP5表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)；③分別取對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組各30例孕婦皮下脂肪，采取RT-PCR方法檢測(cè)人脂肪細(xì)胞中SFRP5 mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果 兩組孕婦血清與脂肪中均有SFRP5表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組的血清及脂肪中的SFRP5表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組（P < 0.01）；血清SFRP5的表達(dá)與HOMA-IR、膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇呈負(fù)相關(guān)（r = -0.5706、-0.1479、-0.1541、-0.1366，均P < 0.05），與高密度脂蛋白膽固醇呈正相關(guān)（r = 0.0866，P < 0.01）。 結(jié)論 SFRP5的異常表達(dá)與GDM的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，通過(guò)臨床監(jiān)測(cè)SFRP5的表達(dá)情況能早期發(fā)現(xiàn)胰島素抵抗的發(fā)生，降低GDM發(fā)病率。因此，孕期對(duì)孕婦進(jìn)行良好的營(yíng)養(yǎng)指導(dǎo)，嚴(yán)格體重管理，可以減少胰島素抵抗，改善GDM結(jié)局。

[關(guān)鍵詞] 妊娠期糖尿??；SFRP5；胰島素抵抗

[中圖分類號(hào)] R587.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）12（b）-0071-04

[Abstract] Objective To discuss the relationship between the expression of SFRP5 and insulin resistance of pregnant women with gestational diabetes mellitus （GDM）. Methods Fifty cases of normal pregnant women in Maternal and Child Health Hospital of Inner Mongolia from January 2016 to March 2017 were selected as control group， and 50 cases with GDM were selected as experimental group. The level of fasting insulin， fasting blood glucose and blood lipid from 24 to 28 weeks of pregnancy was compared between the two groups. Enzyme-linked immunosorbent method was used to test the expression of SFRP5 in cubital vein serum of the puerperas in the two groups during cesarean section. Subcutaneous adipose of 30 cases between the two groups was taken respectively， and the expression of SFRP5 mRNA was tested by RT-PCR. Results SFRP5 was expressed in serum and adipose of the experimental group and the control group. The expression of SFRP5 in serum and adipose of the experimental group was lower than that in control group significantly （P < 0.01）. The serum SFRP5 was negatively correlated with HOMA-IR， cholesterol， triglyceride， LDL-C （r = -0.5706， -0.1479， -0.1541， -0.1366， all P < 0.05）， the serum SFRP5 and high density lipoprotein have the positive correlation relationship （r = 0.0866， P < 0.01）. Conclusion The abnormal expression of SFRP5 is related to the occurrence and development of GDM. Through clinical monitoring the expression of SFRP5， the occurrence of insulin resistance can be discovered early， and reduce the morbidity of GDM. During pregnancy， offer good nutrition guidance and strict weight-control to pregnant women can reduce the occurrence of insulin resistance， and improve the pregnancy success rate in GDM.

[Key words] Gestational diabetes mellitus； SFRP5； Insulin resistance

妊娠期糖尿?。╣estational diabetes mellitus，GDM）是危害母嬰健康、導(dǎo)致母嬰不良結(jié)局的常見(jiàn)孕期并發(fā)癥。GDM在發(fā)展中國(guó)家發(fā)病率逐年升高，近年我國(guó)GDM發(fā)病率報(bào)道為10%以上[1]，明確其發(fā)病機(jī)制、尋找有效的預(yù)防和監(jiān)測(cè)方法是我們醫(yī)務(wù)工作者的研究熱點(diǎn)。GDM孕婦較正常孕婦存在明顯胰島素抵抗（insulin resistance，IR），孕中晚期孕婦因體內(nèi)抵抗胰島素樣活性物質(zhì)增加[2]，對(duì)胰島素的敏感性隨孕齡增加呈下降趨勢(shì)。為了維持糖代謝正常，孕婦體內(nèi)胰島素供給量必須隨之增加，而胰島素分泌功能受限孕婦在妊娠期間不能提供足量胰島素而發(fā)生高血糖，成為GDM患者。Ouchi等[3]發(fā)現(xiàn)，人分泌型卷曲相關(guān)蛋白5（SFRP5）的mRNA及蛋白表達(dá)在不同體型小鼠（精瘦小鼠、肥胖小鼠）體內(nèi)脂肪細(xì)胞中的表達(dá)均升高，通過(guò)對(duì)非經(jīng)典Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)行負(fù)反饋?zhàn)饔酶淖円葝u素敏感性。目前國(guó)內(nèi)臨床已有關(guān)于2型糖尿病患者血漿SFRP5水平及其相關(guān)性因素的報(bào)道[4-5]，而對(duì)GDM患者的研究較少。本研究在臨床選取合適病例研究SFRP5在GDM患者血清及分娩時(shí)脂肪組織中的表達(dá)情況，分析其與IR的可能關(guān)系，探討SFRP5參與GDM病生理過(guò)程的可能。endprint

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

選取2016年1月～2017年3月在內(nèi)蒙古婦幼保健院門診產(chǎn)檢并分娩的未經(jīng)輔助生殖技術(shù)助孕、單胎妊娠、年齡20～35歲的初產(chǎn)婦為研究對(duì)象，分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，各50例。實(shí)驗(yàn)組均為診斷為GDM的孕婦；對(duì)照組為符合入組條件的糖耐量正常（normal glucose tolerance，NGT）孕婦，納入標(biāo)準(zhǔn)：孕前BMI >18.5～<28 kg/m2；孕期空腹血糖<7.0 mmol，隨機(jī)血糖 <11.1 mmol。本研究對(duì)象排除標(biāo)準(zhǔn)：合并免疫系統(tǒng)性疾病、傳染性疾病、慢性肝腎功能損傷性疾??；合并心臟病孕婦；孕前有糖尿病史；有糖尿病家族史；既往有高血壓、高血脂等代謝性疾病。本研究通過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法

1.2.1 糖、脂等生化指標(biāo)檢測(cè) 孕24～28周進(jìn)行OGTT糖尿病篩查后，要求孕婦清晨、空腹8 h，靜息狀態(tài)下抽肘靜脈血測(cè)血脂：三酰甘油（TG）、總膽固醇（Chol）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）及空腹血糖（FPG）、空腹胰島素（FINS）（應(yīng)用全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀Cobase411和601德國(guó)羅氏公司）。穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR），即HOMA-IR=FPG×Fins/22.5。

1.2.2 血清中SFRP5表達(dá)水平檢測(cè) 采用ELISA法測(cè)定血清中的SFRP5水平，SFRP5酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒購(gòu)于美國(guó)RD公司，PHOMO酶標(biāo)儀購(gòu)于美國(guó)RD公司試劑盒。

1.2.3 人脂肪細(xì)胞中SFRP5 mRNA表達(dá)水平檢測(cè) 采用RT-PCR法檢測(cè)SFRP5 mRNA表達(dá)水平，Trizol提取脂肪細(xì)胞總RNA，RNA紫外檢測(cè)儀測(cè)定濃度和純度，根據(jù)PrimeScriptTMRT reagent Kit試劑盒說(shuō)明書(shū)要求配制RT反應(yīng)液進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄（cDNA的合成），根據(jù)GenBank上所查mRNA序列，PubMed驗(yàn)證，采用軟件primer 5設(shè)計(jì)脂肪細(xì)胞SFRP5引物，由大連寶生物工程有限公司合成。脂肪細(xì)胞SFRP5引物序列正義：5′-GAAAGTTGATTGGAGCCCAGAA-3′；反義：5′-GCCCGTCAGGTTGTCTAACTGT-3′。內(nèi)參基因GADPH的引物序列正義：5′-ACCCAGAAGACTGTGGATGG-3′；反義：5′-TGCTGTAGCCAAATTCGT？鄄TG-3′。按照UltraSYBR Mixture（With ROX）試劑盒（北京百奧萊博科技有限公司）說(shuō)明書(shū)加樣進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，Biometra PCR儀（北京北方華粵貿(mào)易有限責(zé)任公司實(shí)時(shí)定量PCR儀）擴(kuò)增，取樣品進(jìn)行電泳，Gel？鄄Doc 2000凝膠成像儀采集圖像。用Bio-RAD公司的iCycler軟件檢測(cè)熒光信號(hào)和Ct值，GAPDH和β-actin mRNA作為內(nèi)參，SFRP5相對(duì)mRNA表達(dá)量用2-△△Ct方法計(jì)算。△Ct=平均Ct待測(cè)基因-平均Ct內(nèi)參基因，△△Ct=△CtA組-△CtB組，基因表達(dá)水平差異=2-△△Ct。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較

兩組年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；實(shí)驗(yàn)組的BMI及HOMA-IR高于對(duì)照組（P < 0.01）；實(shí)驗(yàn)組孕婦血清中TG、Chol、LDL-C、HDL-C的濃度明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；實(shí)驗(yàn)組的FPG、FINS水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。見(jiàn)表1。

2.2 兩組血清中SFRP5水平比較

實(shí)驗(yàn)組孕婦的血清中SFRP5水平為（10.38±0.64）pg/mL，正常對(duì)照組孕婦的血清中SFRP5水平為（14.28±1.28）pg/mL，實(shí)驗(yàn)組孕婦的血清中SFRP5水平明顯低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t = 17.92，P < 0.01）。

2.3 兩組脂肪細(xì)胞中SFRP5 mRNA表達(dá)水平比較

實(shí)驗(yàn)組孕婦的脂肪組織中SFRP5 mRNA表達(dá)水平（0.203±0.033）低于正常對(duì)照組（0.260±0.045），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t = 6.836，P < 0.01）。

2.4 血清中SFRP5表達(dá)水平與糖、脂等生化指標(biāo)的相關(guān)性分析

在所有觀察對(duì)象中作單直線相關(guān)分析，血清SFRP5水平與年齡、BMI無(wú)明顯相關(guān)性（P > 0.05），血清SFRP5水平與Chol、TG、LDL-C、空腹血糖、FINS、HOMA-IR呈負(fù)相關(guān)（r = -0.1479、-0.1541、-0.1366、-0.2813、-0.3014、 -0.5706，均P < 0.05）；血清SFRP5與HDL-C呈正相關(guān)（r = 0.0866，P < 0.01）。見(jiàn)表2。

3 討論

妊娠后代謝發(fā)生變化，通常伴隨有母體血脂水平的異常變化[6]。Piechota等[7]研究中、晚期的孕婦所有的血脂水平均有升高。本研究將兩組孕婦孕期血糖、血脂指標(biāo)進(jìn)行比較，表現(xiàn)為實(shí)驗(yàn)組的FPG、Fins、TG、Chol和LDL-C升高，與本研究結(jié)果一致，GDM孕婦存在糖、脂代謝紊亂，所以孕期通過(guò)合理低脂飲食，進(jìn)行適宜的體育鍛煉，是降低孕婦血脂水平的方法之一。

妊娠處于一種生理性的、暫時(shí)存在可恢復(fù)的IR狀態(tài)[8]，GDM與2型糖尿病的發(fā)病原因基本相同，Zawiejska等[9]研究結(jié)果提示存在IR的GDM孕婦胰島β細(xì)胞功能下降，IR就是胰島素的作用能力下降，需要更多的胰島素才能將血糖控制在正常范圍內(nèi)，或者是減少單次食物的攝入，防止血糖水平突然升高，對(duì)GDM孕婦進(jìn)行少食多餐調(diào)整，運(yùn)動(dòng)消耗攝入的過(guò)多熱量，必要時(shí)應(yīng)用胰島素是目前臨床常用的控制血糖的有效治療方法。endprint

已有報(bào)道證實(shí)GDM孕婦脂肪含量高于正常孕婦[10]，存在導(dǎo)致IR的病理基礎(chǔ)，脂肪細(xì)胞因子可以通過(guò)血液到達(dá)全身各個(gè)系統(tǒng)，妨礙胰島素信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)，最終導(dǎo)致靶組織對(duì)胰島素敏感性降低，成為導(dǎo)致IR的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[11]。而SFRP5，一種表達(dá)源于脂肪細(xì)胞的因子，在糖、脂代謝過(guò)程中以及發(fā)生IR中具有重要作用[12]，Chang等[13]對(duì)小鼠注入SFRP5，可以增加更多的葡萄糖攝取和脂肪氧化，改善全身胰島素敏感性。也有研究[14]在肥胖的小鼠中發(fā)現(xiàn)SFEP5在調(diào)節(jié)胰島β細(xì)胞分化過(guò)程有一定的作用。Oztas等[15]發(fā)現(xiàn)早期妊娠時(shí)血漿中SFRP5水平的降低與GDM的風(fēng)險(xiǎn)的增加有關(guān)聯(lián)。呂慈[16]研究發(fā)現(xiàn)降低脂肪細(xì)胞SFRP5表達(dá)，活化Wnt-JNK通路，可增加脂肪組織慢性炎癥，加重IR的發(fā)展。本研究通過(guò)對(duì)兩組孕婦外周血清中及皮下脂肪中SFRP5的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是外周血清或皮下脂肪中，實(shí)驗(yàn)組的SFRP5表達(dá)均高于實(shí)驗(yàn)組，即存在IR的GDM孕婦血清或脂肪中的SFRP5表達(dá)水平低于NGT孕婦，可以理解為SFRP5表達(dá)水平下調(diào)是IR的特征性表現(xiàn)。GDM孕婦血清及脂肪組織中SFRP5表達(dá)水平均低于正常孕婦，說(shuō)明SFRP5的異常表達(dá)與GDM的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。所以，可以相信通過(guò)臨床監(jiān)測(cè)SFRP5的表達(dá)情況能早期發(fā)現(xiàn)IR的發(fā)生，降低GDM發(fā)病率。

另外，Okada等[17]在肥胖小鼠研究中發(fā)現(xiàn)，SFRP5通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)系統(tǒng)調(diào)節(jié)機(jī)體體制形成和物質(zhì)代謝，而尹經(jīng)霞等[18]等在臨床研究中發(fā)現(xiàn)不同糖耐量人群的血漿SFRP5水平均有不同程度降低，且與血脂、HOMA-IR等有關(guān)。羅荔等[12]認(rèn)為SFRP5對(duì)糖尿病的發(fā)生發(fā)展有一定的阻礙作用，已有研究[19-20]發(fā)現(xiàn)SFRP5的分泌表達(dá)與高水平的胰島素有關(guān)，本研究中發(fā)現(xiàn)外周血中SFRP5水平與HOMA-IR之間存在負(fù)相關(guān)關(guān)系，同時(shí)與外周血中Chol、TG、LDL-C的水平也呈負(fù)相關(guān)，即Chol、TG、LDL-C升高，SFRP5表達(dá)降低[21]。因此，相信孕期通過(guò)對(duì)GDM孕婦進(jìn)行良好的孕期營(yíng)養(yǎng)指導(dǎo)，嚴(yán)格體重管理以降低血脂，可以減少IR，改善GDM結(jié)局，而上述指標(biāo)除受脂肪組織的分泌多少影響外，還受如體重、既往有無(wú)代謝綜合征、飲食習(xí)慣等因素影響，這就可以理解為，在檢測(cè)SFRP5表達(dá)情況時(shí)，外周血中SFRP5檢測(cè)值比脂肪組織相對(duì)不穩(wěn)定。

綜上所述，無(wú)論是作為發(fā)現(xiàn)GDM發(fā)生的早期信號(hào)，還是作為監(jiān)測(cè)GDM病情嚴(yán)重程度的指標(biāo)，孕期監(jiān)測(cè)孕婦血清、脂肪組織中的SFRP5意義重大。通過(guò)監(jiān)測(cè)血清中SFRP5的變化以及后續(xù)孕期指導(dǎo)，可以降低GDM發(fā)病率，從而降低孕產(chǎn)婦和圍生兒的不良結(jié)局的發(fā)生，是一項(xiàng)在臨床中簡(jiǎn)單方便易執(zhí)行的監(jiān)測(cè)手段。上調(diào)SFRP5或改變SFRP5的受體以減緩IR，可能是未來(lái)研究治療GDM方法中的一條新方向，而脂肪細(xì)胞中SFRP5的變化可以為研究GDM孕婦的發(fā)病機(jī)制提供研究依據(jù)及方向。

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（收稿日期：2017-07-07 本文編輯：任 念）endprint