陳巧華+范世明+許春芳

【摘要】 目的：建立白芍配方顆粒的指紋圖譜，并對(duì)其7種主要成分進(jìn)行含量測(cè)定，為白芍配方顆粒的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：本研究采用HPLC-DAD法，色譜柱為Inetsil-ODS-SP C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈（A）–0.1%甲酸水溶液（B）進(jìn)行梯度洗脫，流速0.8 ml/min，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長233 nm和270 nm，測(cè)定了10批次白芍配方顆粒。結(jié)果：指紋圖譜檢測(cè)結(jié)果，共確定白芍配方顆粒20個(gè)共有峰，各批次白芍配方顆粒指紋圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜相比，相似度均在0.900以上；含量測(cè)定結(jié)果表明，7種主要成分的峰面積和質(zhì)量濃度的線性關(guān)系良好，r均大于0.999，平均加樣回收率96.0%～98.6%。結(jié)論：本文建立了白芍配方顆粒的HPLC指紋圖譜和和其中7種成分含量測(cè)定方法，可以為白芍配方顆粒質(zhì)量控制提供參考。

【關(guān)鍵詞】 白芍配方顆粒； HPLC； 指紋圖譜； 質(zhì)量控制

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.36.001 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1674-6805（2017）36-0001-04

【Abstract】 Objective：A method of fingerprint and simultaneous quantitative analysis of seven components by high performance liquid chromatography（HPLC） was developed and validated for quality evaluation for Baishao Granules.Method：The method was performed by HPLC using Inetsil-ODS-SP C18（4.6 mm×250 mm，5 μm） with a mobile phase of consisted of acetonitrile（A）-0.1% formic acid（B） in gradient mode at a flow rate of 0.8 ml/min；column temperature 30 ℃；wavelength set at 233 nm and 270 nm.10 batches of Baishao Granules were measured.Result：For fingerprint analysis，20 peaks were selected as the common peaks to evaluate the similarities among 10 batches of Baishao Granules collected from different regions with similarity higher than 0.900.Additionally，simultaneous quantification of seven markers，including gallic acid，methyl gallate，catechin，albiflorin，paeoniflorin，pentagalloylglucose and benzoylpaeoniflorin，were performed and the obtained data demonstrated that the method had achieved desired linearity（r>0.999），average recovery were ranged from 96.0% to 98.6%.Conclusion：The results indicated that HPLC fingerprint and simultaneous quantitative analysis of seven components was applicable in quality control of Baishao Granules.

【Key words】 Baishao Granules； HPLC； Fingerprint analysis； Quality control

First-authors address：The Second Hospital of Fujian Medical University，Quanzhou 362000，China

中藥配方顆粒是中藥材臨床應(yīng)用的另外一種形式，是符合炮制要求的中藥飲片在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，應(yīng)用現(xiàn)代制劑工藝生產(chǎn)制成的供臨床使用的顆粒劑，它克服了傳統(tǒng)中藥飲片調(diào)配稱量不夠準(zhǔn)確、服用劑量不易掌握、臨用煎煮、候藥時(shí)間較長和攜帶不方便等缺點(diǎn)[1-3]。但中藥配方顆粒所含有的活性成分往往多而復(fù)雜，單一化學(xué)成分均不能體現(xiàn)出中醫(yī)臨床用藥的整體療效[4-5]。中藥指紋圖譜是一種以“指紋”來質(zhì)控中藥的新方法，通過多批次樣本的化學(xué)計(jì)量學(xué)分析，較為全面地反映中藥內(nèi)在多指標(biāo)共有峰的情況，體現(xiàn)中醫(yī)藥的整體性；另外，在指紋圖譜評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)上，選擇合適的特征共有峰，進(jìn)一步針對(duì)配方顆粒的主要特征成分進(jìn)行多成分含量評(píng)價(jià)，以“指紋-含量”相結(jié)合的方式進(jìn)行質(zhì)控，將非常適合于中藥配方顆粒的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

白芍為毛莨科芍藥屬植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根[6]，有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)，柔肝止痛，斂陰止汗，平抑肝陽的功效，廣泛用于中藥成方制劑中，如四物湯、桂枝湯、逍遙散等?，F(xiàn)代藥理研究表明白芍具有止痛、抗炎、保肝及多途徑抑制自身免疫反應(yīng)等多種藥理作用[7-9]。白芍中的主要化學(xué)成分研究已有報(bào)道[10]，但目前對(duì)商品化白芍配方顆粒的質(zhì)量控制研究報(bào)道較少，僅有對(duì)自制顆粒并多以芍藥苷的含量為指標(biāo)的質(zhì)控方法[11-13]。單一指標(biāo)無法反饋中醫(yī)臨床用藥的整體療效多成分、多靶點(diǎn)的特性，無法體現(xiàn)白芍配方顆粒的內(nèi)在整體質(zhì)量。因此，本研究采用HPLC-DAD法建立白芍配方顆粒的指紋圖譜，并根據(jù)指紋圖譜選擇合適的定量指標(biāo)對(duì)白芍配方顆粒進(jìn)行多成分定量分析，為全面有效地評(píng)價(jià)白芍配方顆粒的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。endprint

1 儀器與試藥

安捷倫LC1290超高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；DFY-500搖擺式高速中藥粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）；CPA225D型十萬分之一分析天平（德國Sartorius公司）；KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；HC-2068高速離心機(jī)（安徽中佳科學(xué)儀器有限公司）；甲醇、乙腈、甲酸為色譜純（德國Merck公司）；Milli-Q超純水（美國Millipore公司）；其余試劑均為分析純。

對(duì)照品沒食子酸（批號(hào)：110736-201605）、芍藥苷（批號(hào)：110736-201640）、兒茶素（批號(hào)：110877-201604）購于中國食品藥品檢定研究院，沒食子酸甲酯（批號(hào)：MUST-15060162）、芍藥內(nèi)酯苷（批號(hào)：MUST-16080477）、苯甲酰芍藥苷（批號(hào)：MUST-16100548）、五沒食子酰葡萄糖（批號(hào)：MUST-16110737）購于成都曼思特生物科技有限公司，以上對(duì)照品經(jīng)面積歸一法測(cè)定，純度均大于98%。樣品：白芍配方顆粒10批，廠家及批號(hào)見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Inetsil-ODS-SP C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脫程序：5%A→10%A（0～10 min）；10%A→15%A（10～23 min）；15%A→20%A（23～35 min）；20%A→25%A（35～45 min）；25%A→52%A（45～60 min）；52%A（60～68 min），流速為0.8 ml/min，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量：10 μl。檢測(cè)波長為233 nm、270 nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 白芍配方顆粒供試品溶液 取10批次白芍配方顆粒研粉，過65目篩，分別取約0.2 g，精密稱定，置50 ml容量瓶中，加40 ml 50%甲醇超聲（功率：250 W，頻率：80 kHz）處理30 min，冷卻至室溫，以50%甲醇定容，搖勻，靜置，取一定量至EP管中，12 000 r/min離心10 min，取上清液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 混合對(duì)照品溶液 取沒食子酸、兒茶素、沒食子酸甲酯、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷的對(duì)照品適量，精密稱定，加入甲醇分別制備質(zhì)量濃度為0.8975、0.3730、0.1260、2.4820、3.5030、1.4850、0.2057 mg/ml的單一對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，置10 ml量瓶中，加入50%甲醇即得沒食子酸179.5 μg/ml、兒茶素14.92 μg/ml、沒食子酸甲酯5.04 μg/ml、芍藥內(nèi)酯苷496.4 μg/ml、芍藥苷700.6 μg/ml、五沒食子酰葡萄糖59.40 μg/ml、苯甲酰芍藥苷41.14 μg/ml的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。其他不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品混合溶液由混合對(duì)照品儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋獲得。

2.3 指紋圖譜研究方法學(xué)考察

2.3.1 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一份白芍配方顆粒供試品（G-7）10 μl連續(xù)進(jìn)樣6次，以芍藥苷（10號(hào)峰）為參照峰，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD和相對(duì)峰面積RSD均小于3.0%，采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）”進(jìn)行評(píng)價(jià)，相似度均大于0.99，表明儀器精密度好。

2.3.2 重復(fù)性試驗(yàn) 同一批次白芍配方顆粒樣品（G-7），照“2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法平行制備配方顆粒供試品溶液各6份，以芍藥苷（10號(hào)峰）為參照峰，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD和相對(duì)峰面積RSD均小于3.0%，相似度均大于0.99，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一份供試品溶液（G-7），按“2.1”項(xiàng)的色譜條件，分別在0、1、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣10 μl，記錄色譜圖，以芍藥苷（10號(hào)峰）為參照峰，計(jì)算得到各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積RSD均小于3.0%，相似度均大于0.99，表明供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 白芍配方顆粒的指紋圖譜建立

經(jīng)過白芍配方顆粒樣品DAD多波長的比較，選擇將10批白芍配方顆粒在270 nm下的HPLC色譜圖導(dǎo)入藥典委員會(huì)推薦的中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012A版）軟件中，設(shè)定G-1為參照?qǐng)D譜，進(jìn)行色譜峰自動(dòng)匹配，生成對(duì)照指紋圖譜G-S，結(jié)果見圖1。

2.4.1 共有峰的標(biāo)定 經(jīng)過10個(gè)批次白芍配方顆粒的色譜分析，利用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012A）”在對(duì)照?qǐng)D譜上共生成20個(gè)共有峰，其中，對(duì)照?qǐng)D譜中10號(hào)色譜峰（芍藥苷）分離度較好，色譜響應(yīng)值較高，保留時(shí)間居中，因此選擇10號(hào)峰為參照峰，同時(shí)采用對(duì)照品溶液加標(biāo)法進(jìn)行共有峰指認(rèn)，標(biāo)定其中7個(gè)共有峰，見圖1。

2.4.2 白芍配方顆粒指紋圖譜相似度評(píng)價(jià) 采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012A）”，對(duì)10批次不同來源白芍顆粒的指紋圖譜的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，分析10批樣品的相似度，結(jié)果見表2。由表2可知，各個(gè)批次白芍顆粒的相似度均在0.9以上，相似度良好。為了進(jìn)一步比較各個(gè)批次間的含量差異，選擇標(biāo)定指認(rèn)的7個(gè)共有峰（沒食子酸、沒食子酸甲酯、兒茶素、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷）進(jìn)行含量測(cè)定研究。

2.5 白芍配方顆粒中7種主要成分含量測(cè)定

2.5.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 混合對(duì)照品和白芍配方顆粒供試品溶液，按照2.1的色譜條件分析，結(jié)果見圖2。由圖2可見，7種分析物：沒食子酸、兒茶素、沒食子酸甲酯、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)均在10 000以上。endprint

2.5.2 線性范圍考察 將2.2中制備的混合對(duì)照品，稀釋成系列不同質(zhì)量濃度的梯度對(duì)照品溶液，按2.1中的色譜條件依次注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，以峰面積（Y）對(duì)化合物濃度（X）進(jìn)行線性回歸，求回歸方程及線性相關(guān)系數(shù)（r）。并以化合物的響應(yīng)為基線響應(yīng)的10倍，信噪比：S/N=10作為定量限（LOQ），結(jié)果見表3。

2.5.3 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按2.1的色譜條件1 d內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣6次，連續(xù)進(jìn)樣3 d，分別記錄7種化合物的峰面積，計(jì)算峰面積的RSD，其日內(nèi)精密度RSD范圍在1.19%～2.19%，日間精密度的RSD范圍在1.44%～2.46%，表明日內(nèi)、日間精密度良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批次的白芍配方顆粒樣品（G-7），按照2.2中供試品溶液制備方法制備白芍配方顆粒供試品溶液，常溫下保存，按2.1的色譜條件分別在0、1、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣10 μl，記錄7種化合物峰面積并計(jì)算RSD，其范圍在1.35%～2.39%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次白芍配方顆粒樣品（G-7）6份，按照2.2中供試品溶液制備方法制備白芍配方顆粒供試品溶液，平行6份，按2.1中的色譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算7種化合物的含量，其含量RSD范圍在1.85%～2.62%，表明方法重復(fù)性良好。

2.5.6 回收率試驗(yàn) 取重復(fù)性實(shí)驗(yàn)同批白芍配方顆粒樣品（G-7）

6份，0.1 g，按照近似1∶1量添加7種分析物對(duì)照品，加入樣品中，按2.2進(jìn)行樣品制備，按2.1的色譜條件分別進(jìn)樣分析測(cè)定，計(jì)算平均回收率在96.0%～98.6%，RSD在1.39%～2.57%，表明方法回收率良好。

2.5.7 樣品含量測(cè)定 精密吸取2.2中10批次白芍配方顆粒供試品溶液，按2.1的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到10批白芍配方顆粒7種主要成分的峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 供試品的制備

針對(duì)白芍配方顆粒所含化學(xué)成分，比較了不同濃度甲醇（10%、30%、50%、70%、90%、純品）作為提取溶劑，當(dāng)甲醇濃度低于50%時(shí)，可能由于樣品淀粉、糊精等輔料影響導(dǎo)致樣品黏度較大，而甲醇濃度大于70%時(shí)，色譜峰分離度較差，最終以50%（體積分?jǐn)?shù)）甲醇作為提取溶劑。此外，實(shí)驗(yàn)還比較了回流提取法和超聲提取法，兩種方法無明顯差異，故采用操作簡單便捷的超聲法。在此基礎(chǔ)上，對(duì)超聲提取法進(jìn)行考察，包括提取的溶劑、次數(shù)、溶劑倍量、時(shí)間，最終選擇50%甲醇超聲提取1次，250倍量，提取30 min。

3.2 色譜條件的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)通過比較Polar-RP C18（Welch 4.6 mm×250 mm，5 μm）、Luna C18（Phenomenex 4.6 mm×250 mm，5 μm）、X-selcect C18（Waters 4.6 mm×250 mm，5 μm）、Inertsil ODS-SP C18（Shimadzu 4.6 mm×250 mm，5 μm）四款色譜柱，結(jié)果表明，Inertsil ODS-SP色譜柱所得色譜圖峰數(shù)較多，分離度好。流動(dòng)相經(jīng)過優(yōu)化，確定以乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相洗脫樣品溶液，可獲得平穩(wěn)的基線，符合指紋圖譜和含量測(cè)定研究的要求。

3.3 檢測(cè)波長的選擇

不同的化合物在不同波長下對(duì)紫外線吸收強(qiáng)度不同，因此檢測(cè)波長的正確選擇對(duì)于指紋圖譜的構(gòu)建及化合物的準(zhǔn)確定量發(fā)揮著重要作用。本研究采用HPLC-DAD法，采集了210～400 nm波段的色譜圖，通過比較不同波長下的色譜圖，發(fā)現(xiàn)270 nm波長處的色譜峰數(shù)目較多，各色譜峰響應(yīng)值較大，且分離較好，因此選擇270 nm波長下的色譜圖構(gòu)建白芍配方顆粒指紋圖譜。然而，對(duì)于主要成分的含量測(cè)定，芍藥苷、兒茶素、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷在233 nm有強(qiáng)紫外吸收，而沒食子酸、沒食子酸甲酯、五沒食子酰葡萄糖在270 nm處紫外吸收較強(qiáng)，因此，以233 nm作為芍藥苷、兒茶素、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷的定量檢測(cè)波長，以270 nm作為沒食子酸、沒食子酸甲酯、五沒食子酰葡萄糖的定量檢測(cè)波長。

3.4 指紋圖譜分析

通過《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件（2012A版）》對(duì)指紋圖譜的相關(guān)參數(shù)進(jìn)行相似度計(jì)算，其中若相似度在0.90以上，則說明配方顆?；瘜W(xué)輪廓接近，相對(duì)穩(wěn)定。本研究用此軟件建立10個(gè)批次的白芍配方顆粒的指紋圖譜，結(jié)果表明10批白芍配方顆粒的相似度均在0.900以上，說明各個(gè)批次白芍配方顆粒的樣品指紋圖譜上相對(duì)穩(wěn)定。

3.5 白芍配方顆粒的含量結(jié)果

本研究對(duì)6個(gè)廠家10批次白芍配方顆粒的7種成分進(jìn)行含量測(cè)定，從含量的平均值可看出白芍配方顆粒中含量相對(duì)較高的依次為芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、沒食子酸、五沒食子酰葡萄糖，而苯甲酰芍藥苷、沒食子酸甲酯、兒茶素含量相對(duì)較低。首先，芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷和苯甲酰芍藥苷屬于白芍的單萜苷類成分，是白芍功效的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[14]，芍藥苷同時(shí)也是2015版藥典白芍飲片的指標(biāo)性成分，在G-1、G-5、G-7、G-9、G-10批中含量均達(dá)到120 mg/g以上，而G-2、G-3、G-4、G-6、G-8批次在100 mg/g以下，由此可以看出不同廠家、不同批次的顆粒劑雖然指紋圖譜上有相似即指紋輪廓相似，但是內(nèi)在的共有化學(xué)成分的含量上存有較大的差異，可能由于不同的生產(chǎn)原料、不同的生產(chǎn)加工工藝等原因所致。其次，沒食子酸、五沒食子酰葡萄糖和沒食子酸甲酯屬于酚酸類成分，經(jīng)過含量測(cè)定，沒食子酸、五沒食子酰葡萄糖含量均值均超過10 mg/g，現(xiàn)代藥理研究表明白芍沒食子酰糖類成分，如五沒食子酰葡萄糖，有顯著的抗炎、抗腫瘤、保肝及氧化損傷神經(jīng)保護(hù)等多重作用[15]，應(yīng)該作為白芍配方顆粒中質(zhì)控指標(biāo)之一。最后，本次含量測(cè)定也檢測(cè)了白芍中黃酮類成分兒茶素，其在配方顆粒中的含量在0.575～2.537 mg/g，含量相對(duì)低于白芍單萜苷類和酚酸類。endprint

本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC同時(shí)測(cè)定白芍配方顆粒中的7種成分（沒食子酸、兒茶素、沒食子酸甲酯、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷）含量指紋圖譜方法，以指紋和含量相結(jié)合，方法簡便、全面、準(zhǔn)確，可以為白芍配方顆粒整體質(zhì)量控制提供新的方法。

參考文獻(xiàn)

[1]李遠(yuǎn)輝，李慧婷，李延年，等.高品質(zhì)中藥配方顆粒與關(guān)鍵制造要素[J].中草藥，2017，48（16）：3259-3266.

[2]李松林，宋景政，徐宏喜.中藥配方顆粒研究淺析[J].中草藥，2009，40（S1）：1-7.

[3]張水寒，梁雪娟，劉浩，等.中藥標(biāo)準(zhǔn)煎液科學(xué)問題的探討[J].中國中藥雜志，42（17）：3275-3281.

[4]范世明，徐惠龍，謝心月，等.三葉青葉指紋圖譜研究及8種酚類成分含量測(cè)定[J].中國中藥雜志，2016，41（21）：3975-3981.

[5]周麗清，陳海濱.利膽片的HPLC指紋圖譜研究[J].海峽藥學(xué)，2017，29（8）：39-42.

[6]國家藥典委員會(huì)編.中國藥典.第一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：105.

[7]趙丹萍，張建軍，賀成，等.基于代謝組學(xué)技術(shù)的白芍養(yǎng)血柔肝作用機(jī)制研究[J].中草藥，2017，48（16）：3412-3418.

[8] Chang Y，Zhang L，Wang C，et al.Paeoniflorin inhibits function of synoviocytes pretreated by rIL-1α and regulates EP4 receptor expression[J].Journal of Ethnopharmacology，2011，137（3）：1275-1282.

[9]吳躍文.白芍在治療痹痛中不同劑量的臨床效果分析[J].海峽藥學(xué)，2017，29（6）：177-179.

[10]周秋香，李友賓，蔣建勤.白芍的化學(xué)成分研究[J].海峽藥學(xué)，2009，21（6）：92-94.

[11]葉娟，高文遠(yuǎn)，劉新橋，等.白芍配方顆粒制備工藝優(yōu)化及質(zhì)量控制[J].中國藥房，2007，18（9）：660-662.

[12]庫爾班江，卡斯木江，賽力曼.白芍配方顆粒中芍藥苷的含量測(cè)定[J].喀什師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，29（3）：38-40.

[13]李宗偉，秦斯民.葛根、白芍中藥配方顆粒制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2015，11（4）：30-31.

[14]劉杰，陳琳，范彩榮，等.基于HPLC-DAD-Q-TOF-MS/MS的白芍和赤芍主要成分定性定量研究[J].中國中藥雜志，2015，40（9）：1762-1770.

[15]劉杰，許文，李煌，等.UPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定白芍飲片中10種成分[J].藥物分析雜志，2015，35（4）：635-643.

（收稿日期：2017-08-22）endprint