宋玉美

(周口市疾病預(yù)防控制中心專科病醫(yī)院 檢驗(yàn)科 河南 周口 466000)

隨著社會生活節(jié)奏加快，工作壓力不斷增大，女性不孕癥的發(fā)病率呈逐年增長趨勢，其影響因素主要有排卵因素、輸卵管因素、子宮因素等，給患者造成較大痛苦[1-2]。宮頸分泌物沙眼衣原體(chlamydia trachomatis，CT)與解脲支原體(ureaplasm urealyticum，UU)容易對生殖道產(chǎn)生感染，引發(fā)宮頸炎，甚至導(dǎo)致不孕[3]。熒光定量PCR技術(shù)(realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ-PCR)是一種基于酶促化學(xué)反應(yīng)放大試管中待測基因，能短時(shí)間內(nèi)將待測基因擴(kuò)增至上百萬倍，提高基因診斷靈敏度，降低診斷難度[4]。本研究通過檢測不孕癥患者宮頸分泌物沙眼衣原體和解脲支原體的感染情況，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2014年8月至2016年9月周口市疾病預(yù)防控制中心?？撇♂t(yī)院106例不孕癥女性患者作為觀察組，年齡21～36歲，平均(28.45±2.64)歲，其中59例原發(fā)性不孕患者(原發(fā)性不孕組)和47例繼發(fā)性不孕患者(繼發(fā)性不孕組)。另選同期102例已生育健康體檢女性作為對照組，年齡20～37歲，平均(29.25±3.13)歲。觀察組與對照組受檢者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，所有患者均自愿參加本研究并簽署知情同意書。且本研究經(jīng)周口市疾病預(yù)防控制中心?？撇♂t(yī)院倫理協(xié)會審核批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1儀器選擇及標(biāo)本采集 以定時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢查，儀器由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供。采用無菌窺陰器，充分顯露宮頸，宮頸外分泌物用無菌棉球擦拭獲取，并于不孕患者宮頸處插入無菌棉拭子，同時(shí)轉(zhuǎn)動，停留數(shù)秒后取出，將棉拭子置于無菌試管，密閉送檢。

1.2.2FQ-PCR檢測 試劑盒由深圳匹基生物工程公司提供，嚴(yán)格依照劑盒說明書操作，標(biāo)本棉拭+1.5 ml生理鹽水充分洗滌，吸取混懸液，再加入核酸提取液A(100 μl)，混勻，離心(13 000 r/min)10 min，棄上清液；加入核酸提取液B(50 μl)，混勻，100 ℃裂解10 min，離心(13 000 r/min)處理5 min，取上清液(DNA)，將其作為反應(yīng)模板，并進(jìn)行FQ-PCR檢測。反應(yīng)條件：93 ℃ 5 min預(yù)變性，再按93 ℃ 45 s、55 ℃ 45 s進(jìn)行40個反應(yīng)循環(huán)。結(jié)束后電腦自動計(jì)算定量結(jié)果，標(biāo)本均按試劑盒提供定量陽性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，做定量陽性質(zhì)控，檢測后均進(jìn)行陰性及陽性對照。

1.3觀察指標(biāo)①統(tǒng)計(jì)對比兩組UU、CT及混合UU+CT感染檢測結(jié)果；②對比觀察組中原發(fā)性不孕組及繼發(fā)性不孕組UU、CT及混合UU+CT感染檢測結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，定性資料以率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組UU DNA、CT DNA及混合感染陽性率均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；繼發(fā)性不孕組UU DNA、CT DNA及混合感染陽性率均高于原發(fā)性不孕組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表1、2。

表1 觀察組與對照組受檢者檢測結(jié)果比較[n(%)]

3 討論

表2 原發(fā)性不孕組及繼發(fā)性不孕組患者檢測結(jié)果比較[n(%)]

不孕癥是指1 a未采取任何避孕措施，性生活正常而沒有成功妊娠，主要分為原發(fā)性不孕及繼發(fā)性不孕。生殖系統(tǒng)感染是影響女性不孕主要因素之一，多種微生物均可引起女性生殖道感染，由于UU、CT感染癥狀較輕，未受到重視，易導(dǎo)致反復(fù)感染，嚴(yán)重者甚至造成不孕[5-6]。熒光定量PCR技術(shù)是一種新型檢查技術(shù)，可及早檢測出宮頸分泌物中UU、CT感染情況，逐漸廣泛應(yīng)用于臨床。

UU是女性下生殖道最常見的微生物，可損害精子代謝和生理機(jī)能，影響傳統(tǒng)卵細(xì)胞能力，導(dǎo)致女性不孕；同時(shí)，UU可導(dǎo)致輸卵管黏膜的纖毛細(xì)胞脫落，影響其正常受精。CT結(jié)構(gòu)獨(dú)特，自身無法合成能量物質(zhì)，常通過寄生宿主細(xì)胞獲取三磷酸腺苷及氨基酸，傳染性極高；CT于人體黏膜最常見，繁殖力強(qiáng)，累及宮頸柱狀上皮，引起宮頸管炎，進(jìn)而侵犯輸卵管上皮，導(dǎo)致輸卵管蠕動異常及阻塞造成繼發(fā)不孕。UU、CT混合感染易導(dǎo)致輸卵管炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致宮腔阻塞，影響正常受精，破壞妊娠條件引起不孕。熒光定量PCR技術(shù)是一種新型臨床檢測技術(shù)，可有效檢測女性UU、CT感染，本研究采用FQ-PCR技術(shù)對女性宮頸分泌物進(jìn)行檢查，具有以下優(yōu)點(diǎn)。①檢測簡單、迅速：熒光探針具有DNA探針雜交作用，閉管操作可降低假陽性率；②通過對熒光信號進(jìn)行測定，具有較高敏感度，定量范圍寬且準(zhǔn)確度高，可滿足臨床需要。本研究結(jié)果顯示，觀察組UU DNA、CT DNA及混合感染陽性率均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；繼發(fā)性不孕組UU DNA、CT DNA及混合感染陽性率均高于原發(fā)性不孕組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。該結(jié)果表明UU、CT感染可能為引發(fā)不孕癥發(fā)生的重要因素，通過熒光定量PC技術(shù)對不孕癥患者行生殖道UU、CT進(jìn)行篩查，有助于降低不孕癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，UU、CT感染可能是導(dǎo)致不孕癥影響因素，臨床應(yīng)及早檢測UU、CT及混合感染情況，有助于臨床及時(shí)診斷治療，降低不孕癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

[1] 烏云塔娜,劉玲玲,趙勇,等.宮腹腔鏡聯(lián)合診治女性不孕癥461例臨床療效分析[J].中國計(jì)劃生育學(xué)雜志,2016,24(4):256-260.

[2] 朱江妃.不孕癥患者盆腔粘連的相關(guān)因素分析及其對輸卵管再通的影響[J].中國基層醫(yī)藥,2017,24(5):755-758.

[3] 李素芳,徐宏仙,黎世貴.沙眼衣原體與解脲支原體感染與女性不孕癥相關(guān)性分析[J].中國性科學(xué),2016,25(11):105-107.

[4] 曾成龍,馮婷,閆丹,等.液體培養(yǎng)法、PCR法和SAT法在解脲支原體檢測中的應(yīng)用比較[J].中國麻風(fēng)皮膚病雜志,2016,32(7):397-398.

[5] 任玉順.宮頸分泌物病原體檢測的臨床價(jià)值分析[J].中國婦幼保健,2017,32(2):342-344.

[6] 張欠欠,仵恒立,胡軍婷,等.熒光定量PCR檢測淋球菌、沙眼衣原體和解脲支原體結(jié)果分析[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào),2016,32(3):312-314.