汪詠新 ，于強(qiáng) ，吳新華 ，高峰 ，如先古麗·熱衣丁

宮頸癌的致病因素是多種復(fù)雜的，是多種誘因素作用的結(jié)果，但人乳頭瘤病毒（HPV）是引起宮頸癌及宮頸癌前病變的主要病因[1]。為了了解克孜勒蘇柯爾克孜自治州柯爾克孜族女性HPV感染狀況、型別分布和多種感染狀況特點(diǎn)，我們對前來婦科門診就診的123例柯爾克孜族女性進(jìn)行PCRDNA雜交技術(shù)檢測并進(jìn)行分型，同時(shí)結(jié)合液基細(xì)胞學(xué)、宮頸病理活檢進(jìn)行臨床分析，目的在于通過對新疆克孜勒蘇柯爾克孜自治州柯爾克孜族女性HPV-DNA基因分型檢測來探討柯爾克孜族女性HPV-DNA基因分型檢測與宮頸癌早期篩查、早期防治方面的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2015年2月5日至2016年10月26日期間在克孜勒蘇柯爾克孜自治州人民醫(yī)院婦科門診就診的柯爾克孜族女性患者123例為觀察對象，年齡最低的25歲，最高的83歲。

1.2 樣本來源 由醫(yī)院婦科門診部醫(yī)生用無菌生理鹽水綿球去取宮頸外分泌物，再用HPV專用采樣刷于宮頸管內(nèi)2cm處采集標(biāo)本，采集后將采樣刷放入內(nèi)有專用細(xì)胞保存液的采樣管里，立刻送到PCR-DNA檢測室檢驗(yàn)。

1.3 儀器及試劑 使用美國ABI7300 PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增，人乳頭瘤病毒基因分型（28型）檢測試劑盒（PCR-反向點(diǎn)雜交）由中山大學(xué)達(dá)安生物基因有限公司提供的雜交試劑盒進(jìn)雜交分型。

1.4 檢測步驟

1.4.1 HPV-DNA的分離提取 試劑盒由中山大學(xué)達(dá)安生物基因有限公司供應(yīng)，確保試劑盒在有效期內(nèi)使用完畢，選用專業(yè)技術(shù)強(qiáng)的檢驗(yàn)技術(shù)人員，認(rèn)真仔細(xì)的按分離提取要求逐步提取HPV-DNA。提取最后階段，取出20μl提取好的HPV-DNA模板用于PCR-DNA擴(kuò)增，并把部分HPV-DNA樣本冰凍在-20℃冰柜中以便備用。

1.4.2 HPV-DNA的擴(kuò)增 使用美國ABI7300 PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物放在-200C保存以備使用。

1.4.3 HPV-DNA雜交分型 使用達(dá)安生物基因有限公司提供的試劑盒并采取手工進(jìn)行雜交分型。檢測結(jié)果出現(xiàn)清晰可見的藍(lán)色圓點(diǎn)即為陽性，雜交膜上的生物色素結(jié)合點(diǎn)、內(nèi)控點(diǎn)必須顯色，否則檢測為無效檢測。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS 15.0系統(tǒng)軟件統(tǒng)計(jì)計(jì)算，用百分率（%）表示。

2 結(jié)果

2.1 HPV-DNA檢測結(jié)果 于123名門診就診柯爾克孜族女性人群當(dāng)中，檢測出22例HPV感染陽性患者，總陽性率達(dá)17.89%，在其中高度危險(xiǎn)型感染有18例占81.82%，中度危險(xiǎn)型感染3例占13.64%，低度危險(xiǎn)型感染9例占40.91%。

2.2 HPV-DNA亞型分布 從表1中可以得出，22例女性HPV感染的各亞型分布中，其感染率居前幾位為 HPV54型占 22.7%、HPV16型占 18.2%、HPV58型占13.6%、HPV31型占13.6%、HPV51型占9.0%、HPV52型占9.0%、HPV66型占9.0%。

表1 例柯爾克孜族女性HPV感染者HPV基因型別感染陽性率分布

2.3 HPV-DNA基因型單一及多重感染情況 表2可見，在22例感染HPV樣本中，檢測出來17例單一HPV基因型感染占77.3%，5例為HPV基因型多重感染，占22.7%。

表2 22例感染者HPV基因型單一、多重感染陽性率

3 討論

本方法采用了反向點(diǎn)雜交原理檢測28種HPV基因型別。率先檢測多達(dá)28種HPV基因型別。28種基因型別包括15種高度危險(xiǎn)型HPV(16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68，73，8 2 型)、3 種中度危險(xiǎn)型(26，53，66)和 10 種低度危險(xiǎn)型 HPV(6，11，40，42，43，44，54，61，81，83 型)。 該方法具有多種優(yōu)點(diǎn)如可檢測多重感染、高通量、敏感性極強(qiáng)、特異性顯著、精準(zhǔn)性高等；只需要一次擴(kuò)增就可以同時(shí)檢測出28種高度危險(xiǎn)型、中度危險(xiǎn)型、低度危險(xiǎn)型及國內(nèi)人群常見型別。目前，國內(nèi)外專家一致認(rèn)為該檢測方法是進(jìn)行HPV DNA檢測和分型非常好的方法[2，3]。本調(diào)查，共檢測123例柯爾克孜族女性樣本，檢出HPV陽性者22例，總陽性率為17.89%，總陽性率低于其他文獻(xiàn)關(guān)于新疆女性HPV感染狀況的報(bào)道[4]。于22例感染HPV中，高度危險(xiǎn)型HPV 18例，占感染率81.82%，中度危險(xiǎn)型HPV 3例，感染率占13.64%，低度危險(xiǎn)型HPV 9例，占感染率40.91%，混合感染HPV 5例，占感染率22.73%。本結(jié)果展示，新疆克孜勒蘇柯爾克孜自治州柯爾克孜族女性人群HPV型別分布特點(diǎn)：高度危險(xiǎn)型基因型別主要是HPV16型，其次為HPV31、58、51、52 型，依次占總感染型別的 18.2%、13.6%、13.6%、9.0%、9.0%；檢測出HPV 28種型別中的17種型別，高度危險(xiǎn)型患者感染率由高到低依 次 為 HPV16、58、31、51、52、35、45、68、68 和 73型，中度危險(xiǎn)型依次為HPV53、66，低度危險(xiǎn)型依次為 HPV54、6、40、44、43 型。 高度危險(xiǎn)型感染的問題嚴(yán)重，占總體感染病例的81.82%，尤為明顯的是HPV16占感染率的18.2%；低度危險(xiǎn)型感染也一定的比率達(dá)40.91%，其中尤為明顯的是HPV54占總體感染率的22.7%，其危害性應(yīng)予以重視，定期檢測HPV、加強(qiáng)隨訪并進(jìn)行臨床醫(yī)學(xué)干預(yù)很有必要。

從本調(diào)查可以看到，柯爾克孜族女性人群中HPV亞型多重感染率現(xiàn)已達(dá)到22.7%，這與其他科研人員研究中的發(fā)現(xiàn)相一致[5，6]。我們的研究數(shù)據(jù)及資料顯示：單一HPV基因型感染占很大比例；在多重感染中，二重感染占18.2%之多，同時(shí)也存在HPV四種基因型別感染現(xiàn)象占4.5%。我們還發(fā)現(xiàn)柯爾克孜族女性人群中HPV亞型多重感染既有高度危險(xiǎn)亞型與高度危險(xiǎn)亞型的混合又有低度危險(xiǎn)亞型與高度危險(xiǎn)亞型的混合，并未發(fā)現(xiàn)低度危險(xiǎn)亞型與低度危險(xiǎn)亞型的混合，并且各亞型混合分布無特殊規(guī)律可言。經(jīng)查閱有關(guān)宮頸癌研究資料顯示，長期持續(xù)感染 HPV16、52、33、18型是直接導(dǎo)致宮頸癌的主要因素，而之外的其他型別多重感染則會有誘發(fā)宮頸癌發(fā)生的可能[7]。HPV的多重感染與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有著緊密的相關(guān)性，多重HPV感染會使宮頸癌患病風(fēng)險(xiǎn)巨增到30多倍，而單一HPV感染也可使宮頸癌患病的風(fēng)險(xiǎn)增加到近20倍[8－10]。故此，我們很有必要對柯爾克孜族女性HPV亞型多重感染者做到定期HPV-DNA檢測及細(xì)胞液集，更有必要時(shí)可做陰道鏡病理活檢。

據(jù)相關(guān)臨床資料報(bào)道，在新疆很多地區(qū)宮頸癌有一定的發(fā)病率[11－13]。而我們對新疆克孜勒蘇柯爾克孜自治州柯爾克孜族女性，123例樣本中，檢出HPV陽性者22例，總陽性率為17.89%，明顯低于我國其它地區(qū)及新疆其它地區(qū)的HPV感染率。但22例HPV陽性病例中，高危型HPV 18例，占感染率81.82%，中危型HPV 3例，感染率13.64%，低危型HPV 9例，占感染率40.91%，混合感染HPV 5例，占感染率22.73%，仍需要引起我們的高度重視。通過分析新疆克州柯爾克孜族女性人群中HPV感染基因型別分布情況，對新疆克孜勒蘇柯爾克孜自治州柯爾克孜族女性人群宮頸癌等疾病的預(yù)警和早期診斷具有重要的臨床意義，早發(fā)現(xiàn)早診斷早治療和在臨床醫(yī)學(xué)上加強(qiáng)主動(dòng)精準(zhǔn)干預(yù)有利于防止宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，并對HPV感染的轉(zhuǎn)歸有著很大的幫助，從而做到降低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率。