李甫泉 常 亮 陳廣榮 金 輝 魏艷沛 白音夫 馮國慶 劉 靜

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020； 2.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065； 3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學附屬人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010)

內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細菌細胞壁外層的組成部分，主要成分為脂多糖，是細菌感染后的主要致病因素。黑冰片為炭化后的野豬糞，其作用原理不明確。本文采用鱟試劑法測定黑冰片對內(nèi)毒素的吸附作用[1]，并與活性炭吸附作用進行比較。

1 材料

1.1 試劑 內(nèi)毒素工作標準品(中國食品藥品檢定研究院)，鱟試劑(廈門市鱟試劑實驗廠)，活性炭(張家口活性炭廠)，黑冰片(內(nèi)蒙古阿爾泰藥材公司)。

1.2 儀器 TGL-16型高速離心機(上海醫(yī)用分析儀器廠)，SHZ88-1型臺式水浴恒溫振蕩器(江蘇太倉鹿河生化儀器廠)，AL204電子天平(瑞典)，DNM-9602酶聯(lián)免疫檢測儀(北京普朗新技術(shù)有限公司)，移液器(德國Eppendorf)，離心管(美國corning)，所有玻璃器皿均250°干燥2h，以除去外源性內(nèi)毒素；塑料器皿均為密封包裝無污染的一次性用品。

2 方法與結(jié)果

2.1 黑冰片用量對內(nèi)毒素吸附作用 取內(nèi)毒素標準液1EU·mL-1、10EU·mL-1各5mL加入至含有取預先經(jīng)250°處理2h后的黑冰片與活性炭的試管內(nèi)，黑冰片終濃度為2%、4%、8%、12%，活性炭終濃度為0.5%、1%、2%、3%，振搖10min后，離心2000轉(zhuǎn)/min，取上清液，按鱟試劑盒使用說明書操作，用移液器取反應液，加到酶聯(lián)免疫檢測儀的測定板微孔內(nèi)測定內(nèi)毒素含量，并計算吸附率：[(吸附前的內(nèi)毒素含量-吸附后的內(nèi)毒素含量)/吸附前內(nèi)毒素含量]×100%。結(jié)果，內(nèi)毒素標準液1EU·mL-1、10EU·mL-1，黑冰片終濃度2%、4%、8%、12%，對內(nèi)毒素吸附率23%、63%、97%、97%和20%、60%、95%、95%；活性炭終濃度0.5%、1%、2%、3%，對內(nèi)毒素吸附率32%、90%、99%、99%和41%、95%、98%、99%。

2.2 黑冰片作用時間對內(nèi)毒素吸附作用 取上述內(nèi)毒素標準液，分別加入終濃度8%黑冰片，2%活性炭，振搖0min、5min、10min、20min，按上法處理測定液體內(nèi)內(nèi)毒素含量并計算吸附率。結(jié)果內(nèi)毒素標準液1EU·mL-1、10EU·mL-1，作用時間0、5、10、20(min)，黑冰片對內(nèi)毒素吸附率分別為5%、70%、97%、97%和7%、70%、96%、96%；活性炭對內(nèi)毒素吸附率分別為12%、82%、99%、99%和21%、88%、99%、99%。

2.3 不同溫度黑冰片對內(nèi)毒素吸附作用 取1EU·mL-1、10EU·mL-1內(nèi)毒素標準液，分別加入成終濃度8%黑冰片，2%活性炭，在20℃、37℃分別振搖10min，按上法處理，測定液體內(nèi)內(nèi)毒素含量并計算吸附率，結(jié)果表明，黑冰片與活性炭作用溫度在20℃、37℃無明顯差異，內(nèi)毒素吸附率分別為98%、97%和99%、99%。

2.4 吸附作用后對家兔致熱作用 選取體溫正常家兔20只，體重1.5～2kg，測定體溫，均分4組，對照組、模型組、黑冰片與活性炭組。對照組耳iv 0.5mL/kg生理鹽水，模型組iv0.5mL/kg1EU·mL-1，黑冰片與活性炭組分別iv黑冰片與活性炭吸附后1EU·mL-10.5mL/kg，觀察對家兔致熱效果。結(jié)果，對照組致熱前體溫38.1±0.6(±s，℃)，致熱后1h、2h、3h、5h、8h體溫分別為38.1±0.5、38.2±0.6、38.1±0.4、37.8±0.5、37.9±0.6；模型組致熱前體溫38.2±0.5，致熱后體溫分別為39.4±0.5(P<0.05)41.2±0.4(P<0.01)、40.7±0.7(P<0.01)、40.2±0.5(P<0.05)、39.7±0.7(P<0.05)；黑冰片組致熱前體溫37.9±0.6，致熱后體溫分別為38.2±0.6、38.4±0.3、38.1±0.3、38.3±0.7、38.4±0.3；活性炭組致熱前體溫37.8±0.4，致熱后體溫分別為38.3±0.7、38.2±0.5、38.1±0.6、38.2±0.8、38.3±0.3。

3 討論

實驗表明，黑冰片與活性炭用量對細菌內(nèi)毒素的吸附作用呈正相關(guān)，黑冰片吸附內(nèi)毒素作用低于活性炭。震蕩作用10min，黑冰片可把液體內(nèi)的細菌內(nèi)毒素大部分吸附，作用溫度對黑冰片的內(nèi)毒素吸附作用差異不大。經(jīng)吸附后的內(nèi)毒素溶液對家兔體溫無明顯致熱作用，表明，黑冰片主要作用原理與活性炭作用一致。

活性炭是由含碳物質(zhì)作為原料，經(jīng)高溫脫水碳化和活化而制成的多孔性疏水性吸附劑?；钚蕴烤哂斜缺砻娣e大、高度發(fā)達的孔隙結(jié)構(gòu)，1g活性炭材料中微孔，將其展開后表面積可高達800～1500m2，同時活性炭孔徑內(nèi)“范德華力”的作用極大增加活性炭吸附作用力。黑冰片為晾干后的野豬糞經(jīng)高溫脫水碳化，野豬糞主要成分為碳水化合物，含有少量的無機鹽類，這與活性炭制作原料及制作過程一致，上述實驗也證明，黑冰片對內(nèi)毒素的吸附作用，可認為，黑冰片的作用原理與活性炭作用原理一致，即通過對體內(nèi)有害物質(zhì)的吸附作用，緩解臨床癥狀，同時可能，黑冰片中少量無機鹽類參與臨床的治療作用。黑冰片吸附作用弱于活性炭，其原因可能源于兩者脫水炭化處理過程的不同。所以，為提高黑冰片臨床療效，可委托活性炭生產(chǎn)廠按活性炭工藝加工炮制黑冰片。

[1]肖貴南，程朝輝，盛英美.活性炭吸附細菌內(nèi)毒素作用研究[1].中國藥房，2010,21(5)：443