陳魯曼，關(guān)真民，段旭艷

(菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校，山東 菏澤 274100)

隨著社會(huì)的進(jìn)步，肥胖人群不斷增多，肥胖給健康造成了極大的危害，肥胖可引起糖尿病、老年癡呆等疾病[1]。肥胖癥本身是由于機(jī)體能量代謝失衡引起的，瘦素（Leptin，LP）和胃動(dòng)素 (Motilin，MTL)是體內(nèi)兩種比較重要的調(diào)節(jié)能量代謝的物質(zhì)，它們不但存在于血液循環(huán)中，其受體也廣泛分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)下丘腦內(nèi)[2，3]。對機(jī)體的食欲、攝食量、情緒以及記憶等方面都可能起著廣泛的中樞調(diào)節(jié)作用，但具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚不明確。為此，我們對谷氨酸鈉誘導(dǎo)的肥胖大鼠進(jìn)行限食干預(yù)，了解下丘腦腹內(nèi)側(cè)核瘦素受體和胃動(dòng)素受體的表達(dá)特點(diǎn)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：新生Wistar大鼠90只，♂，SPF級，體重（6.32±1.68)g，山東魯抗制藥有限責(zé)任公司，合格證號(hào):scxk(魯)2015-0013。（2）實(shí)驗(yàn)藥品、試劑：谷氨酸鈉及免疫組化有關(guān)試劑源自上海瑞齊生物科技有限公司出品。瘦素與胃動(dòng)素ELISA試劑盒、瘦素抗體（Ob-R）和胃動(dòng)素抗體（MTL-R）源自南京德寶生化有限公司出品。

1.2 方法（1）動(dòng)物分組：適應(yīng)性飼養(yǎng)7天，隨機(jī)分為：對照組30只、模型組60只，模型組在出生10天內(nèi)，隔1天皮下注射谷氨酸鈉，劑量為3mg/g體重，連續(xù)5次，對照組同時(shí)皮下注射等量的生理鹽水（3mg/g體重），兩組均給予同樣的飼料和水。每天觀察記錄大鼠的攝食量、身長、體重，并做好記錄。8周齡時(shí)，根據(jù)Lee’s指數(shù)：模型組肥胖有56只，對照組正常有29只。按照隨機(jī)平均的原則把模型組分為限食組和肥胖組，各28只。對照組和肥胖組按照原來的方式繼續(xù)飼養(yǎng)，限食組30%能量限制。（2）實(shí)驗(yàn)取材：16周齡時(shí)空腹24 h后取材。測定體重、身長，從大鼠股動(dòng)脈抽血，離心分離血清，利用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測定總膽固醇和甘油三酯的含量，按照試劑盒說明書的步驟進(jìn)行測定血清瘦素、胃動(dòng)素的含量；取血后進(jìn)行麻醉和灌注，10%的水合氯醛（3 ml/kg）進(jìn)行腹腔注射麻醉，經(jīng)左心室至升主動(dòng)脈進(jìn)行緩慢灌注，大約用時(shí)2 h。選擇灌注較好的大鼠，對照組、限食組和肥胖組各22只，采用斷頭開顱的方法取出其下丘腦組織，固定6～8 h后脫水,包埋機(jī)進(jìn)行包埋，制成蠟塊備用。分離摘取大鼠體內(nèi)大網(wǎng)膜、腎周、睪周脂肪組織，天平測定重量。(3)免疫組化染色：利用Koning等的大鼠腦定位圖譜，從大鼠下丘腦的腹內(nèi)側(cè)核隆起所在的平面進(jìn)行恒冷箱切片，20μm厚，每例共取5張。染色中所用抗體濃度Ob-R抗體（1:200）MTL（1:500）。具體的免疫組化ABC法的染色步驟為:PBS漂洗，加3%雙氧水約10 min，PBS漂洗，封血清（15 ml/L）0.5 h，加入Ob-R抗體或者M(jìn)TL-R抗體，冷藏（4℃）孵育約24 h，取出置于室溫2 h后，PBS漂洗。陰性對照組用PBS代替第2抗體，其余步驟不變。免疫組化染色陽性細(xì)胞的判定標(biāo)準(zhǔn)：采用二級計(jì)分的方法，顏色深淺評分，無著色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分，棕黃色或棕褐色計(jì)2分。陽性細(xì)胞比例評分：無陽性細(xì)胞者計(jì)0分，25%陽性細(xì)胞者計(jì)1分，26～50%陽性細(xì)胞者計(jì)2分，51%以上者計(jì)3分。二者相加，最終評分是0分為陰性（-），1～2分為陽性（+），3～5分為強(qiáng)陽性（++）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0軟件，所獲數(shù)據(jù)采用方差分析和行配對資料t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 三組Lee’s指數(shù)、各部脂肪含量、血清總膽固醇、甘油三酯、瘦素、胃動(dòng)素的含量比較 見表1。

表1 三組Lee’s指數(shù)、各部脂肪含量、血清總膽固醇、甘油三酯、瘦素、胃動(dòng)素的含量比較

表1 三組Lee’s指數(shù)、各部脂肪含量、血清總膽固醇、甘油三酯、瘦素、胃動(dòng)素的含量比較

肥胖組與對照組Lee’s指數(shù)、各部脂肪含量、血清總膽固醇、甘油三酯、瘦素、胃動(dòng)素的含量比較，t=8.7730、15.132、13.749、23.244、19.519、27.962，P均＜0.0005。限食組與對照組Lee’s指數(shù)、各部脂肪含量、血清總膽固醇、甘油三酯、瘦素、胃動(dòng)素的含量比較，t=12.538、5.6375、17.063、13.457、10.359、5.4568，P均＜0.0005。

組別nLee'sTotal fat（g）TCTGLP（ng/ml）MTL（ng/ml）對照組 22 321.96±12.16 1.62±0.43 1.96±0.16 1.74±0.14 3.12±0.31 3.52±0.63肥胖組 22 358.15±15.05 3.15±0.20 3.36±0.45 3.16±0.25 6.23±0.68 7.63±0.28限食組 22 281.36±9.10 1.05±0.20 1.21±0.13 1.13±0.16 2.12±0.33 2.67±0.37

2.2 三組大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)核瘦素、胃動(dòng)素受體陽性細(xì)胞表達(dá)的比較 見表2。

表2 三組大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)核瘦素、胃動(dòng)素受體陽性細(xì)胞表達(dá)的比較

3 討論

我國的肥胖人群數(shù)量劇增，如何有效的進(jìn)行防治成為大家關(guān)注的熱點(diǎn)?，F(xiàn)階段國內(nèi)外對單純性肥胖的研究較多，主要是限食干預(yù)[4,5,6]對肥胖大鼠的肥胖指標(biāo)以及瘦素等的影響。但有關(guān)限食對血清胃動(dòng)素及下丘腦胃動(dòng)素受體影響的報(bào)道較少。腦內(nèi)各部受體分布不同[7]。本實(shí)驗(yàn)選用谷氨酸鈉誘導(dǎo)的肥胖大鼠模型，前期研究已經(jīng)證實(shí)此模型的肥胖發(fā)生機(jī)制與下丘腦弓狀核胃動(dòng)素受體表達(dá)增強(qiáng)有關(guān)[8]，還可能與神經(jīng)肽Y活性超表達(dá)可以積極促進(jìn)大鼠機(jī)體脂肪組織的生成增加，從而引起下丘腦神經(jīng)細(xì)胞分泌瘦素顯著增加。研究發(fā)現(xiàn)肥胖大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)核也有瘦素受體和胃動(dòng)素受體的分布，了解限食干預(yù)對谷氨酸鈉肥胖大鼠的下丘腦腹內(nèi)側(cè)核瘦素受體和胃動(dòng)素受體的影響。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果肥胖組與對照組Lee’s指數(shù)、各部脂肪含量、血清總膽固醇、甘油三酯、瘦素、胃動(dòng)素的含量比較，P均＜0.0005,均有非常顯著性差異。限食組與對照組Lee’s指數(shù)、各部脂肪含量、血清總膽固醇、甘油三酯、瘦素、胃動(dòng)素的含量比較，P均＜0.0005,均有非常顯著性差異。三組大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)核瘦素、胃動(dòng)素受體陽性細(xì)胞表達(dá)的比較，P均＜0.0005，均有非常顯著性差異。三組大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)核瘦素、胃動(dòng)素受體陽性細(xì)胞表達(dá)的比較，P均＜0.0005，均有非常顯著性差異。這些說明肥胖組的大鼠中樞能量調(diào)節(jié)有下丘腦腹內(nèi)側(cè)核有關(guān)，具體機(jī)制可能是，谷氨酸鈉可以使大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)核胃動(dòng)素受體激活，通過作用于攝食中樞，使大鼠增加饑餓感，攝食量增加；同樣谷氨酸鈉可以使大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)核瘦素受體受到抑制，血清瘦素反而增多，說明存在瘦素抵抗。限食組的肥胖大鼠通過限食干預(yù)，體重明顯下降，血清瘦素、胃動(dòng)素含量降低，其受體顯著增多，說明限食可以促進(jìn)機(jī)體能量代謝的良性循環(huán)，促進(jìn)脂肪代謝轉(zhuǎn)運(yùn)，加快體重的下降。

谷氨酸鈉誘導(dǎo)的肥胖大鼠體內(nèi)存在瘦素抵抗，能量代謝的異常調(diào)節(jié)與下丘腦腹內(nèi)側(cè)核的瘦素受體表達(dá)減少，胃動(dòng)素受體的表達(dá)增強(qiáng)有關(guān)；限食干預(yù)可以有效改善谷氨酸鈉誘導(dǎo)的大鼠肥胖，具體機(jī)制與下丘腦腹內(nèi)側(cè)核的瘦素受體表達(dá)增多，胃動(dòng)素受體的表達(dá)減少有密切聯(lián)系，為肥胖癥的治療和藥物開發(fā)提供理論依據(jù)。但具體通過哪一條神經(jīng)通路進(jìn)行的調(diào)節(jié)，還需要進(jìn)一步研究。

[1]趙麗云，劉素，于冬梅，等.我國居民膳食營養(yǎng)狀況與《中國食物與營養(yǎng)發(fā)展綱要(2014—2020年)》相關(guān)目標(biāo)的比較分析[J].中國食物與營養(yǎng)，2015，21（8）:5-7．

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